Name: Estrategia de sonda nasogástrica para la fórmula de decocción de la medicina tradicional china en ratones modelo de osteosarcoma (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-06-07T13:20:00.000+00:00
Duration: 3 min 11 s
Description: Aprenda a preparar y administrar decocciones de medicina tradicional china mediante sonda nasogástrica en ratones modelo de osteosarcoma. Este protocolo estandarizado mejora la reproducibilidad y protección animal en estudios farmacológicos.

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El trabajo actual cuenta con el apoyo de subvenciones de (1) la Fundación Nacional de Ciencias de la Naturaleza (81973877 y 82174408), (2) el Programa Nacional Clave de Investigación y Desarrollo de China (2020YFE0201600), (3) el proyecto de construcción del Centro de Investigación de Alta Prioridad de Shanghái (2022ZZ01009), (4) el Centro de Innovación Colaborativa de Shanghái de Transformación Industrial de la Preparación de la MTC Hospitalaria y (5) los Proyectos de Investigación dentro del Presupuesto de la Universidad de Medicina Tradicional China de Shanghái (2021LK047).

Este protocolo describe la técnica detallada de sonda nasogástrica en ratones modelo de osteosarcoma utilizando la decocción de Yiqi Jiedu como muestra. En este experimento se utilizaron ratones atímicos machos de cuatro semanas de edad (BALB/c desnudos) y se mantuvieron en la sala de cría de grado SPF del Centro de Animales de Laboratorio de la Universidad de Medicina Tradicional China de Shanghai. Todos los experimentos con animales fueron aprobados por el Comité de Manejo de Animales de la Universidad de Medicina Tradicional China de Shanghái, cumplieron con el Código de Ética para Animales de Laboratorio (Número de Aprobación de Ética Animal: PZSHUTCM2304060007) y se llevaron a cabo en estricta conformidad con los requisitos internacionales relacionados con los animales de laboratorio.
1. Materiales
<ol><li>Obtenga los siguientes materiales: hierbas chinas (Ginseng 42 g, Hedyotis diffusa 52,5 g, hierba de escutelaria de púas 31,5 g), jeringa de 1 ml y aguja de sonda nasogástrica de codo de 12 g/55 mm (Figura 1).</li>
</ol>2. Determinación de la dosis
<ol><li>Calcule la dosis diaria de la siguiente manera: la dosis diaria para adultos con un peso corporal estándar de 60 kg es Ginseng 12 g, Hedyotis diffusa 15 g y hierba de escutelaria de púas 9 g, con un total de 36 g de medicamento listo para la decocción, es decir, 0,6 g de medicamentos listos para la decocción/kg de peso corporal. Refiriéndose a las 12 veces para dosis equivalentes, 6 veces para dosis bajas y 24 veces para dosis altas entre los adultos con peso corporal estándar de 60 kg y los ratones con peso corporal estándar de 25 g de acuerdo con el área de superficie corporal11, así como nuestros datos preliminares, use una proporción de dosis de 20 veces de la decocción de Yiqi Jiedu para los ratones en el estudio actual, Por lo tanto, la dosis para ratones fue de 12 g de medicamentos listos para la decocción/kg de peso corporal.</li>
	<li>Calcule la dosis para cada ratón usando la ecuación: Dosis para ratón (peso corporal del soporte) = dosis para el adulto (peso corporal del soporte) x 20 (proporción de dosis equivalente designada). La dosis diaria de cada ratón es de 0,3 g [(12 g de medicamentos listos para decocción/1000 g de peso corporal) x 25 g de peso corporal] en 200 μL con una concentración final de 1,5 g/mL.</li>
	<li>Calcule que el total de medicamentos listos para la decocción para ratones (n = 7) en el grupo de decocción de Yiqi Jiedu con administración por sonda nasogástrica durante 28 días es de 58,8 g. Concéntrelo a 39,2 ml para alcanzar una concentración final de 1,5 g/ml.</li>
	<li>Teniendo en cuenta la posible pérdida de fármaco durante las etapas de decocción y sonda nasogástrica, y para facilitar el cálculo, prepare un total de 126 g (Ginseng 42 g, Hedyotis diffusa 52,5 g, hierba de escutelaria de púas 31,5 g) de medicamento listo para la decocción, concentrado en un volumen final de 84 ml.</li>
</ol>3. Origen y cultivo celular
<ol><li>Compre células de osteosarcoma 143B de origen humano en el banco de células ATCC.</li>
	<li>Siembre 1 x 106 143B células en 10 mL de medio MEM que contenga 10% de FBS, 100 U/mL de penicilina y 100 μg/mL de estreptomicina en una placa de cultivo celular de 10 cm.</li>
	<li>Cultivar células 143B a 37 °C en una incubadora de CO2 al 5% hasta que las células tengan una confluencia del 80%-90%.</li>
</ol>4. Métodos de modelado
<ol><li>Recoja el cultivo de 143B al 80 % de las células confluentes, vuelva a suspenderlas en 6 ml de medio MEM al 10 % que contenga suero y mézclelas con gel de matriz de membrana basal en una proporción de volumen de 1:1 para hacer una suspensión celular con una concentración final de 1 x 107 células/ml.</li>
	<li>Inyectar 10 μL de la suspensión celular en la tibia izquierda de cada ratón atímico para establecer un modelo de ratón de osteosarcoma de xenoinjerto in situ , tal y como se describe en nuestra publicación anterior12. Los pasos en resumen son los siguientes.<ol><li>Lave las celdas 2 veces con PBS. Tripsinar las células con 1,5 mL de tripsina al 0,25% durante 3 min. Agregue 6 ml de medio MEM al 10 % que contenga suero. Recoja las células en un tubo de centrífuga de 15 ml.</li>
		<li>Aspire 20 μL de suspensión celular en la cámara de la placa de recuento celular y calcule la concentración celular utilizando un contador celular automático. Centrifugar las celdas a 800 x g durante 5 min a temperatura ambiente.</li>
		<li>Deseche el sobrenadante con una pipeta, vuelva a suspender el gránulo celular en una matriz de membrana basal de 8,5 mg/ml y colóquelo en hielo.</li>
		<li>Anestesiar a los ratones exponiéndolos a un 2% de isoflurano y un 98% de oxígeno (caudal de oxígeno, 2 L/min). Aplique una pequeña cantidad de ungüento veterinario en los ojos para evitar la sequedad mientras está bajo anestesia.</li>
		<li>Realice todo el procedimiento en un área bien ventilada. Antes de la inyección de células de osteosarcoma, asegúrese de que cada ratón esté bajo anestesia profunda tocando suavemente el pie; Si el ratón sigue teniendo respuestas, como contracción o sacudida. Espere más tiempo si el mouse todavía tiene respuestas, como contracción o sacudida, hasta que estas respuestas desaparezcan.</li>
		<li>Coloque el ratón en posición supina. Sujete el tobillo del ratón con el pulgar y el índice y desinfecte el lugar de la inyección de la tibia con tres rondas alternas de betadine y un hisopo de etanol al 70%.</li>
		<li>Coloque la aguja en una jeringa de 1 ml y apunte la punta de la aguja hacia el lugar de la inyección, paralela al eje de la tibia. Inserte la aguja percutáneamente para perforar un orificio a través de la plataforma de la tibia hacia el extremo distal de la tibia.</li>
		<li>Cargue la suspensión de células de osteosarcoma que se colocó previamente en hielo en una jeringa de microvolumen y reemplace la jeringa de 1 ml en la tibia con la jeringa de microvolumen cargada de células de osteosarcoma. Inyecte lentamente aproximadamente 10 μl de suspensión de células de osteosarcoma (1 x 107 células/ml) en la tibia de cada ratón atímico.</li>
		<li>Retire la jeringa de microvolumen del lugar de inyección y presione el lugar de inyección con el hisopo de algodón durante unos 30 segundos. Vuelva a colocar al ratón en una jaula limpia y observe su recuperación durante 10 minutos.</li>
	</ol></li>
</ol>5. Preparación de la fórmula de decocción de la medicina tradicional china para la sonda nasogástrica (Figura 2)
<ol><li>Calcule la dosis según el paso 2.</li>
	<li>Remoje todas las hierbas medicinales para la decocción, excepto la costosa hierba Ginseng, en agua potable con un nivel 3 cm más alto que la superficie del medicamento, durante 30 minutos, y luego realice la decocción 2 veces como se describe a continuación.</li>
	<li>Realice la primera decocción calentando hasta que hierva sobre un fuego fuerte y luego calentando durante 15-25 minutos sobre un fuego suave. El fuego leve se refiere a un calor de baja potencia con temperaturas que suelen oscilar entre 80 °C y 100 °C, mientras que el fuego fuerte se refiere a un calor de alta potencia que suele oscilar entre 200 °C y 300 °C.</li>
	<li>Vierta el líquido de decocción en un recipiente.</li>
	<li>Realice la segunda decocción calentando las hierbas medicinales en agua potable, con un volumen suficiente para sumergir la superficie del medicamento, hasta que hierva a fuego fuerte, y luego calentando durante 15-25 minutos sobre un fuego suave.</li>
	<li>Vierta el líquido de decocción en el mismo recipiente que en el paso 5.4.</li>
	<li>Remojar y decoctar 42 g de Ginseng por separado, con agua potable 3 cm más alta que la superficie del medicamento, ya que es caro.</li>
	<li>Realice la primera decocción de Ginseng remojado calentándolo a fuego fuerte durante 60 min. Vierta el líquido de decocción en el mismo recipiente que en el paso 5.4.</li>
	<li>Realizar la segunda decocción de Ginseng en agua potable con un volumen suficiente para sumergir la superficie del medicamento, calentando a fuego suave durante 40 min. Vierta el líquido de decocción en el mismo recipiente que en el paso 5.4. NOTA: Los recipientes utilizados para la decocción deben ser químicamente estables, como cazuelas (las más utilizadas en la práctica clínica), cerámica, vidrio y acero inoxidable para evitar posibles reacciones químicas con las sustancias medicinales. Todo el líquido de decocción obtenido de diferentes pasos debe ponerse en el mismo recipiente.</li>
	<li>Mezclar y filtrar el líquido de decocción con tres capas de gasa fijadas en la boca de un vaso medidor con gomas elásticas.</li>
	<li>Hervir la decocción filtrada a fuego fuerte en una olla, luego cambiar a fuego suave y mantener el fuego suave hasta alcanzar la concentración objetivo (un volumen final de 84 ml con una concentración final de 1,5 g/ml).</li>
	<li>Preparar 21 mL de alícuotas de la decocción concentrada según la dosis requerida para la administración intragástrica durante 1 semana, y almacenar las alícuotas en un refrigerador a -20 °C.</li>
</ol>6. Administración de sonda nasogástrica en ratones mediante el uso de un dispositivo de sonda nasogástrica
<ol><li>Coloque el mouse sobre la superficie de la jaula del mouse u otra superficie más rugosa.</li>
	<li>Agarra la cola del ratón con el pulgar y el índice de la mano derecha. Luego, agarra el cuello del ratón con el pulgar, el índice y el dedo medio de la mano izquierda.</li>
	<li>Sostén la cola del ratón con los otros dos dedos de la mano izquierda para hacer la cabeza, el cuello y el cuerpo del ratón en línea recta. NOTA: Asegúrese de mantener el mouse relajado durante todo el proceso de agarre. Si el ratón sigue luchando por moverse, el proceso de agarre debe realizarse hasta que el ratón esté relajado.</li>
	<li>Sostenga el dispositivo de sonda nasogástrica en la mano derecha y cargue 200 μL de fórmula de decocción para un ratón con 20 g de peso corporal (100 μL de fórmula de decocción/10 g de peso corporal del ratón).</li>
	<li>Inserte la aguja de sonda nasogástrica en la boca desde la esquina y empuje la lengua contra la mandíbula superior del ratón.</li>
	<li>Mantenga el cuerpo del ratón en la misma dirección y empuje suavemente la aguja de sonda nasogástrica hacia el estómago a lo largo del esófago hasta que queden unos 10 mm de la aguja de sonda nasogástrica fuera. NOTA: Hay una sensación de vacío cuando la aguja de sonda nasogástrica entra en el esófago. La longitud de la aguja de sonda nasogástrica insertada en el ratón debe medirse hasta la parte superior del esternón. La longitud total de la aguja de sonda nasogástrica es de 60 mm (Figura 3), por lo tanto, se deben insertar aproximadamente 50 mm de la aguja de sonda nasogástrica en el cuerpo del ratón antes de inyectar la fórmula de decocción en el estómago del ratón.</li>
	<li>Inyecte la fórmula de decocción en el estómago del ratón. Encontrarse con resistencia o líquido que sale de la comisura de la boca significa una mala colocación de la aguja de sonda nasogástrica, que debe evitarse. Además, la velocidad de inyección debe reducirse si la fórmula de decocción es espesa.</li>
	<li>Suelta el ratón y obsérvalos durante 10 min. La sonda nasogástrica es exitosa si no se observa ninguna anomalía respiratoria y devuelve al ratón a la jaula (Figura 4).</li>
</ol>7. Curso del tratamiento
<ol><li>Para explorar la eficacia terapéutica de la decocción de Yiqi Jiedu, establezca un grupo de control y un grupo de decocción de Yiqi Jiedu. Para los ratones del grupo de control, administrar solución salina fisiológica, una vez al día durante 28 días. En el caso de los ratones del grupo de decocción Yiqi Jiedu, administre la decocción Yiqi Jiedu una vez al día durante 28 días.</li>
</ol>8. Reacciones adversas
<ol><li>Observe de cerca el estado de los ratones después de volver a colocarlos en la jaula, incluida la pérdida de peso y la disminución del estado mental debido a la incapacidad de los alimentos para ingresar al estómago.</li>
	<li>Los ratones experimentarán dificultad para respirar y falta de aliento debido a la obstrucción traqueal causada por los alimentos y toserán en un intento de despejar la tráquea. Si se observa alguno de estos síntomas durante la sonda nasogástrica, deténgala inmediatamente y practique la eutanasia a los ratones.</li>
</ol>

Formulación de decocción de hierbas y estandarización de sonda nasogástrica en ratones con osteosarcoma

<ol><li>Gao, S. Discussion on advantages and improvement of traditional Chinese medicine decoction. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGao%2C+S+%22Chinese+Community+Physicians+%28Comprehensive+Edition%29%22">Chinese Community Physicians (Comprehensive Edition)</a>. (21), 12(2005).</li>
<li>Chinese Pharmacopoeia Commission. Pharmacopoeia of the People's Republic of China. , (2015).</li>
<li>An, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interpretation+on+specification+of+traditional+Chinese+medicine+decoction%5BTitle%5D)+AND+%22Herald+Med%22%5BJournal%5D)">Interpretation on specification of traditional Chinese medicine decoction.</a> Herald Med. 42 (11), 1648-1652 (2023).</li>
<li>Chen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Research+strategies+in+standard+decoction+of+medicinal+slices%5BTitle%5D)+AND+%22China+J+Chinese+Materia+Medica%22%5BJournal%5D)">Research strategies in standard decoction of medicinal slices.</a> China J Chinese Materia Medica. 41 (8), 1367-1375 (2016).</li>
<li>Luo, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+soaking+traditional+Chinese+medicine+before+decoction+on+active+components%5BTitle%5D)+AND+%22Shanghai+Yiyao%22%5BJournal%5D)">Effect of soaking traditional Chinese medicine before decoction on active components.</a> Shanghai Yiyao. 40 (9), 63-64 (2019).</li>
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<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+decocting+times+and+instrument+on+the+quality+of+decoction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Trad+Chinese+Med%22%5BJournal%5D)">Influence of decocting times and instrument on the quality of decoction.</a> J Trad Chinese Med. 50 (6), 550-552 (2009).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Herbal+decoctosome+is+a+novel+form+of+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+China.+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Herbal decoctosome is a novel form of medicine.</a> Sci China. Life Sci. 62 (3), 333-348 (2019).</li>
<li>Lan, Y., Hu, Y., Huang, W., Tang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reflections+on+PK+-+PD+model+based+on+animal+experiments+for+study+of+Chinese+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Lishizen+Med+Materia+Medica+Res%22%5BJournal%5D)">Reflections on PK - PD model based on animal experiments for study of Chinese medicine.</a> Lishizen Med Materia Medica Res. 34 (2), 395-397 (2023).</li>
<li>Li, Y., Bai, M., Song, Y., Guo, H., Miao, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Research+and+reflection+on+standard+decoction+of+Chinese+materia+medica%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Trad+Herbal+Drugs%22%5BJournal%5D)">Research and reflection on standard decoction of Chinese materia medica.</a> Chinese Trad Herbal Drugs. 49 (17), 3977-3980 (2018).</li>
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<li>Recena Aydos, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonalcoholic+fatty+liver+disease+induced+by+high-fat+diet+in+C57bl%2F6+models%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Nonalcoholic fatty liver disease induced by high-fat diet in C57bl/6 models.</a> Nutrients. 11 (12), 3067(2019).</li>
</ol>

Los autores declaran que no tienen nada que revelar.

La eficacia clínica de las hierbas prescritas en la medicina tradicional china se asocia en gran medida con la dosis administrada y la forma farmacéutica; Por lo tanto, el establecimiento de una estrategia de decocción estandarizada y un proceso de administración calificado son necesarios en la práctica clínica, así como en la mejora de la confiabilidad de los resultados experimentales.
En este estudio, primero proporcionamos una estrategia detallada para la decocción estandarizada de hierbas chinas utilizadas en la práctica clínica de la medicina tradicional china, lo que facilita la orientación de las personas para decoctar científicamente los medicamentos, también mejora prácticamente la calidad de la fórmula de decocción y la eficacia clínica de las hierbas medicinales; Por lo tanto, una vez que se logre la estandarización, mejorará la precisión y la consistencia de la eficacia de la medicina herbaria en la práctica clínica.
La estrategia de sonda nasogástrica se ha aplicado ampliamente como método de ingesta oral en estudios preclínicos y es aplicable a varios animales de experimentación, incluidos ratones, ratas y conejos, lo que ofrece algunas ventajas, como la facilidad de administración, el control preciso de la dosis y la capacidad de imitar la vía clínica de administración de fármacos13. Sin embargo, los animales tendrán dificultades si se les inmoviliza en una posición incorrecta sin anestesia, lo que puede amenazar la salud de los investigadores y reducir la fiabilidad de los experimentos. Por lo tanto, el establecimiento de un método estandarizado de sonda nasogástrica es importante para reducir estas posibilidades y evitar que la decocción entre en el esófago por error o cause daño en el esófago, lo que a su vez causa la muerte de los animales y el fracaso experimental.
En este caso, elegimos la vía de la sonda nasogástrica para administrar la fórmula de decocción en los ratones modelo de osteosarcoma, ya que nos permitió medir con precisión la dosis y garantizar una administración constante del fármaco durante todo el experimento. Para preparar la fórmula de decocción, primero calculamos la cantidad de medicamentos listos para la decocción para el ratón en base a una proporción de 20 veces la cantidad utilizada para adultos con un peso corporal de 60 kg; remojado y decocido 2 veces calentando hasta que hierva; se filtró concentrado y almacenó la decocción en alícuotas a -20 °C. Para realizar la administración de sonda nasogástrica, cargue 200 μL de la fórmula de decocción concentrada en un dispositivo de sonda nasogástrica, inserte la aguja de sonda nasogástrica en la boca, empuje suavemente la aguja de sonda nasogástrica hacia el estómago e inyecte la fórmula de decocción en el estómago del ratón. Uno de nuestros hallazgos es la inhibición significativa del crecimiento tumoral observada en el grupo que recibió la fórmula de decocción de la decocción de Yiqi Jiedu por sonda nasogástrica. Observamos una reducción evidente en el volumen tumoral en el grupo de decocción de Yiqi Jiedu en comparación con el grupo control. Estos resultados indican que la estrategia de sonda nasogástrica administra eficazmente los componentes activos de la fórmula de decocción en el sitio diana, lo que resulta en potentes efectos antitumorales. Además, evaluamos el perfil de seguridad de la estrategia de sonda nasogástrica mediante el seguimiento del estado general y el peso corporal de los ratones durante todo el período experimental. No se encontraron diferencias significativas en los cambios en el peso corporal ni en los signos de toxicidad entre el grupo de sonda nasogástrica de decocción de Yiqi Jiedu y el grupo control, lo que indica que la administración de la fórmula de decocción por sonda nasogástrica es bien tolerada y no causa efectos adversos evidentes.
Aunque la estrategia de sonda nasogástrica demostró ser eficaz en la administración de la fórmula de decocción a los animales de experimentación, es importante tener en cuenta las posibles reacciones adversas y ciertas limitaciones asociadas con este método de administración. Para evitar la obstrucción de la tráquea causada por los alimentos, observe de cerca el estado del ratón durante y después de la sonda nasogástrica, como dificultad para respirar, falta de aliento y tos. Una vez que aparezca alguno de ellos, detenga inmediatamente la sonda nasogástrica y realice compresiones torácicas sobre un escritorio duro horizontal; Además, la ayuda veterinaria inmediata es necesaria para cualquier afección grave. Además, debemos prestar mucha atención a las siguientes limitaciones. En primer lugar, la sonda nasogástrica puede inducir estrés en los animales, lo que puede afectar a su fisiología general y a su respuesta al tratamiento. Sin embargo, tomamos medidas para minimizar el estrés mediante el uso de una pequeña aguja de alimentación y la manipulación de los ratones con cuidado durante el procedimiento de sonda nasogástrica. Además, la sonda nasogástrica solo puede ser realizada por una persona que haya sido específicamente entrenada y calificada para garantizar que se utilice una técnica estandarizada para evitar el posible daño a los animales14. En segundo lugar, el mecanismo exacto por el cual los componentes activos de la fórmula de decocción ejercen sus efectos antitumorales sigue sin estar claro. Es posible que la estrategia de sonda nasogástrica pueda alterar la farmacocinética y la farmacodinámica de los compuestos herbales, lo que podría influir en su biodisponibilidad y eficacia terapéutica. Los estudios futuros deben centrarse en dilucidar los mecanismos precisos que subyacen a los efectos antitumorales de la fórmula de decocción administrada a través de sonda nasogástrica. Además, estudios han reportado que la aplicación de anestesia con isoflurano durante la sonda nasogástrica a largo plazo reduce la ingestión incompleta de la decocción y la muerte de los animales debido a la técnica de sonda nasogástrica no calificada15. Mientras tanto, la adición de aceite de cocina a la decocción reduce el estrés animal asociado a la sonda nasogástrica16.
En conclusión, proporcionamos el proceso de decocción estandarizado de hierbas chinas y la estrategia de sonda nasogástrica hábil para ratones. Estos esfuerzos no solo evitan posibles lesiones esofágicas y la muerte de los ratones experimentales, sino que también evitan el desbordamiento de medicamentos asegurando que cada animal experimental administre la misma cantidad de medicamentos a base de hierbas, por lo tanto, mejoran la precisión y consistencia de los resultados experimentales, así como los efectos terapéuticos. Nuestro estudio demuestra la eficacia y seguridad de la estrategia de sonda nasogástrica para la administración de la fórmula de decocción de la medicina tradicional china en un modelo de ratón con osteosarcoma. Estos resultados resaltan el potencial de este método de administración en el tratamiento del osteosarcoma y sientan las bases para futuras investigaciones en la optimización de la estrategia de sonda nasogástrica de la administración de la medicina tradicional china. Además, los estudios futuros deben investigar los mecanismos de acción exactos de los componentes activos en la fórmula de decocción y explorar posibles efectos sinérgicos con otras modalidades de tratamiento para mejorar los resultados terapéuticos en pacientes con osteosarcoma. Por lo tanto, estos hallazgos arrojan luz sobre los posibles beneficios y limitaciones de este método de administración y proporcionan información valiosa sobre su aplicación en el tratamiento del osteosarcoma.

La fórmula de decocción es la forma de dosificación más utilizada de la medicina tradicional china y los medicamentos líquidos 1,2. La fórmula de decocción de la medicina tradicional china se procesa decociendo las hierbas en agua después de remojarlas, seguidas de un filtrado para desechar las heces.
Debido a que la fórmula de decocción puede individualizarse en función de las necesidades clínicas, especialmente en línea con las características del tratamiento basado en la evidencia en la medicina tradicional china, esta forma farmacéutica por vía transoral se ha aplicado en la práctica clínica durante miles de años con ventajas específicas e insustituibles 3,4. La calidad de la fórmula de decocción está directamente relacionada con la eficacia clínica. Por lo tanto, la fórmula de decocción debe prepararse en base a los principios de los métodos de decocción estandarizados para garantizar que los ingredientes activos se extraigan y protejan al máximo3. Mientras tanto, los medicamentos listos para la decocción son la principal forma de hierbas chinas crudas utilizadas en la práctica clínica; las normas de calidad y los métodos de producción de los medicamentos listos para la decocción prescritos deben cumplir con las disposiciones de la Farmacopea China2. Además, los medicamentos listos para la decocción prescritos deben remojarse en agua potable fría durante al menos 30 minutos antes de ser cocidos en una olla farmacéutica especial calentando5. Los estudios han demostrado que la mayoría de los ingredientes activos se pueden extraer decociendo dos veces, y el Código de Práctica para la Administración de Salas de Decocción de Medicinas Tradicionales Chinas en Instituciones Médicas también prescribe que la decocción se realice dos veces 4,6,7. Si se prescriben hierbas chinas especiales, como una con textura dura o tónicos, se recomienda extender el tiempo de decocción. Los utensilios de decocción y los recipientes de almacenamiento que entran en contacto directo con la fórmula de decocción, a partir del recipiente en el que se remojan los medicamentos listos para la decocción prescritos, deben ser químicamente estables y tener tapas, como cazuelas, cerámica, vidrio y acero inoxidable. Sin embargo, no se deben utilizar productos de aluminio y plástico ordinario, mientras que el hierro y otros utensilios corrosivos deben prohibirse para evitar posibles reacciones químicas, que reducirán la eficacia terapéutica e incluso producirán efectos nocivos 4,6,7.
Debido a las limitaciones de la realización de experimentos clínicos, los pequeños animales portadores de las enfermedades humanas, como los ratones, se utilizan a menudo en la investigación médica para explorar la eficacia terapéutica y los mecanismos integrales de diferentes intervenciones, incluida la fórmula de decocción de la medicina tradicional china 8,9; Sin embargo, a diferencia de los humanos, las fórmulas de decocción deben prepararse todos los días, mezclarse y administrarse 2 veces al día en la práctica clínica. Los animales no pueden tomar voluntariamente sus medicamentos a tiempo con la dosis requerida, y la mayoría de los experimentos con animales relacionados con la medicina tradicional china se administran por vía oral con sonda nasogástrica en la actualidad. Las fórmulas de decocción utilizadas para los experimentos in vivo con animales deben prepararse con antelación, alícuotas, almacenarse a -20 °C y descongelarse justo antes de su uso 3,4,10. Además, la inmovilización de animales de baja calidad y la manipulación de agujas por sonda aumentan el riesgo de lesiones innecesarias y emociones negativas. Por lo tanto, como método importante de administración transoral de fármacos, la técnica de sonda nasogástrica especializada es particularmente importante para evitar posibles lesiones esofágicas y derrames de fármacos, asegurando así que cada animal modelo reciba la misma cantidad de medicamentos herbales recetados para lograr resultados experimentales precisos. Aquí, proporcionamos un protocolo de sonda nasogástrica para la fórmula de decocción de la medicina tradicional china.

<table><tbody><tr><td>Línea celular 143B</td><td>ATCC</td><td>CRL-8303</td><td>línea celular de osteosarcoma</td></tr><tr><td>Máquina de anestesia</td><td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td><td>R500IP</td><td>El equipo de ratones de anestesia</td></tr><tr><td>Contador automático de células</td><td>Shanghai Simo Biological Technology Co., Ltd</td><td>IC1000</td><td>Recuento de células</td></tr><tr><td>BALB/c ratones atímicos</td><td>Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd.</td><td>Hierba</td><td></td></tr> de <tr><td>escutelaria con púas</td> de animal masculino <td>Shanghai Yanghetang Tableta de medicina tradicional china Co., Ltd.</td><td>20230606</td><td>Medicamentos listos para la decocción&nbsp;</td></tr><tr><td>Matriz de membrana basal</td><td>Shanghai Uning BioscienceTechnology Co., Ltd</td><td>356234, BD, Matrigel</td><td>re-suspender células</td></tr><tr><td>Tubo de centrífuga (15 mL)</td><td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td><td>430790, Corning</td><td>Centrífuga de las células</td></tr><tr><td>Aguja de sonda nasogástrica de codo (calibre 12 / 55 mm)</td><td>RWD Life Science Co., Ltd.</td><td>C21014-12</td><td>Componente del dispositivo de perfusión gástrica</td></tr><tr><td>Gasa</td><td>Haishi Hainuo Group Co., Ltd.</td><td>LC45</td><td>Filtro de decocción</td></tr><tr><td>Ginseng</td><td>Shanghai Wanshicheng Pharmaceutical Co., Ltd.</td><td>20220704-2</td><td>Medicamentos listos para la decocción&nbsp;</td></tr><tr><td>Hedyotis diffusa</td><td>Shanghai Yanghetang Medicina Tradicional China Tableta Co., Ltd.</td><td>2023071107</td><td>Medicamentos listos para la decocción&nbsp;</td></tr><tr><td>isoflurano</td><td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td><td>VETEASY</td><td>Anesthesia ratones</td></tr><tr><td>Jeringa de microvolumen</td><td>Shanghai alta paloma industria y comercio Co., Ltd</td><td>0-50 &mu; L</td><td>Inyecte células precisas en la tibia</td></tr><tr><td>Solución salina tamponada con fosfato</td><td>Beyotime Biotechnology</td><td>ST447</td><td>lave las células del osteosarcoma humano</td></tr><tr><td>Bandas elásticas</td><td>Shanghai Hengfei Biotechnology Co., Ltd.</td><td>XPJ</td><td>Gasa de fijación en la taza medidora</td></tr><tr><td>Jeringa (1 mL )</td><td>Shanghai Mishawa Medical Industry Co., Ltd.</td><td>SBM0040</td><td>Componente del dispositivo de perfusión gástrica</td></tr><tr><td>Tripsina (0.25%)</td><td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td><td>25200056, Gibco</td><td>tratamiento de tripsina de células</td></tr></tbody></table>

estrategia de sonda nasogástrica para la fórmula de decocción de la medicina tradicional china en ratones modelo de osteosarcoma

Gavage Strategy for Decoction Formula of Traditional Chinese Medicine in Osteosarcoma Model Mice

La fórmula de decocción es la forma de dosificación más utilizada en la medicina tradicional china y se ha aplicado en la práctica clínica durante miles de años mediante administración transoral, que se caracteriza por un efecto rápido, una fácil absorción y un tratamiento individualizado basado en los síndromes específicos de los pacientes. La calidad de la fórmula de decocción es directamente responsable de la eficacia clínica de la medicina tradicional china; Por lo tanto, el proceso de estandarización de la fórmula de decocción es importante para evitar diferencias en la calidad de la decocción causadas por factores subjetivos. Mientras tanto, debido a las limitaciones de la realización de experimentos clínicos, los pequeños animales portadores de enfermedades humanas, como los ratones, se utilizan a menudo en la investigación médica para explorar la eficacia terapéutica y los mecanismos integrales de diferentes intervenciones, incluida la fórmula de decocción para la medicina tradicional china. En consecuencia, como método importante de administración transoral, la técnica de sonda nasogástrica especializada es particularmente importante para evitar posibles daños en el esófago y derrames de fármacos, lo que garantizará que se administre una cantidad igual de medicamento a cada animal modelo, lo que conducirá a resultados experimentales precisos. Además, el método estandarizado de preparación de la fórmula de decocción y la estrategia de sonda nasogástrica calificada son necesarios para proteger el bienestar animal y minimizar el número de animales utilizados. Aquí, informamos un proceso de estandarización detallado de la fórmula de decocción y la técnica de sonda nasogástrica con la decocción de Yiqi Jiedu en un modelo de ratón con osteosarcoma como ejemplo. La eficacia se evaluó por el volumen tumoral. Este protocolo maximizará la protección animal y mejorará la fiabilidad de los datos de investigación, proporcionando así estrategias eficaces para futuras investigaciones sobre la eficacia terapéutica y los mecanismos moleculares de la fórmula de decocción para la medicina tradicional china in vivo.

El efecto inhibidor de la decocción de Yiqi Jiedu sobre el crecimiento del osteosarcoma in vivo se determinó en un modelo de ratón de osteosarcoma de xenoinjerto intratibial, que se preparó inyectando las células de osteosarcoma 143B en la tibia de ratones atímicos. La decocción de Yiqi Jiedu se administró a los ratones del grupo de decocción de Yiqi Jiedu por sonda nasogástrica durante 28 días a partir del segundo día de la inyección de 143B. Se administró solución salina fisiológica a los ratones del grupo de control. Todos los ratones fueron sacrificados después de 28 días. Los resultados mostraron que el volumen tumoral en el grupo de decocción de Yiqi Jiedu se redujo significativamente en comparación con el del grupo control (Figura 5).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66177/66177fig01.jpg"> Figura 1: Consumibles de decocción. El medicamento listo para la decocción consiste en (A) Ginseng, (B) Hedyotis diffusa, (C) Hierba de escutelaria de púas, (D) Vaso medidor graduado, (E) Bandas elásticas, (F) Gasa, (G) Fijación de tres capas de gasa en la boca de la taza medidora con bandas elásticas. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66177/66177fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66177/66177fig02.jpg"> Figura 2: Preparación de la fórmula de decocción para la medicina tradicional china. (A) Los medicamentos listos para la decocción, excepto el ginseng, se remojan durante 30 min. (B) El ginseng se remoja por separado durante 30 min. (C) El ginseng se descoce por separado. (D) Fórmula de decocción filtrante de la medicina tradicional china. E) Almacenamiento de la fórmula de decocción concentrada de la medicina tradicional china. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66177/66177fig02large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66177/66177fig03.jpg"> Figura 3: Consumibles de sonda nasogástrica. Jeringa normal de 1 ml con aguja original (panel izquierdo) y jeringa de 1 ml con aguja original que se sustituye por una aguja de perfusión gástrica de codo n.º 12/55 mm para colocar un dispositivo de sonda nasogástrica (panel derecho). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66177/66177fig03large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66177/66177fig04.jpg"> Figura 4: Procedimiento de administración de sonda nasogástrica en ratón. (A) Ratón en la superficie de la jaula. (B) Cola de ratón agarrada con una mano. (C-D) El ratón se fija con una mano. (E) Aguja que se inserta desde la boca del ratón. (F) Fin de la administración de sonda nasogástrica. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66177/66177fig04large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66177/66177fig05.jpg"> Figura 5: Efecto inhibidor de la decocción en el modelo murino de osteosarcoma. (A) Se recolectan muestras de osteosarcoma del grupo de control y del grupo de intervención de decocción de Yiqi Jiedu. Las barras de error representan la desviación estándar (n = 7) (B) Prueba t no apareada del volumen tumoral entre el grupo control (Ctrl) y el grupo de intervención de decocción de Yiqi Jiedu. La intervención de decocción de Yiqi Jiedu durante 28 días inhibe significativamente el volumen tumoral (p&lt;0,05). Las barras de error representan la desviación estándar (n = 7). (C) Peso corporal de los ratones en el grupo de sonda nasogástrica de decocción de Yiqi Jiedu y en el grupo de control durante todo el período experimental. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66177/66177fig05large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>

El protocolo proporciona un proceso de estandarización detallado de la fórmula de decocción y la técnica de sonda nasogástrica con la decocción de Yiqi Jiedu en el modelo de ratón con osteosarcoma como ejemplo. Describe la protección de los animales y mejora la fiabilidad de los datos de investigación, proporcionando estrategias eficaces para investigar la eficacia terapéutica y los mecanismos moleculares de las fórmulas de decocción in vivo.

Estrategia de sonda nasogástrica para la fórmula de decocción de la medicina tradicional china en ratones modelo de osteosarcoma

Decoction formula is the most commonly used dosage form in traditional Chinese medicine and applied in clinical practice for thousands of years by ...

Este estudio proporciona un protocolo detallado y estandarizado para la preparación de precauciones bajo una operación gradual que proporciona una referencia para aquellos que lo necesitan. Nuestra investigación garantiza que cada animal se dosifique por igual para producir resultados precisos. Nuestro estudio tiene como objetivo maximizar la protección de los animales y mejorar la fiabilidad de los resultados de los estudios sobre las formulaciones de decocción.

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El objetivo de este artículo es proporcionar una descripción detallada del protocolo para el ensayo de metástasis pulmonar (PuMA). Este modelo permite a los investigadores a estudiar el crecimiento de células de osteosarcoma metastásico (OS) en el tejido del pulmón usando un widefield fluorescencia o un microscopio de escaneo láser confocal.

Consideraciones prácticas en el estudio de colonización pulmonar metastásico en Osteosarcoma usando el ensayo de metástasis pulmonar

Inyección directa de vesículas extracelulares derivadas de cáncer (EVs) conduce a la reprogramación de la médula ósea apoyando la progresión del tumor; sin embargo, está claro que las células median este efecto. Adjunto, describimos un protocolo paso a paso para investigar EV-mediada de células madre tumorales mesenquimales (MSC) interacciones en vivo, revelando un papel crucial para MSCs EV-educado en metástasis.

Un modelo de ratón preclínica de Osteosarcoma a definir la comunicación mediada por vesículas extracelular entre Tumor y las células madre mesenquimales

Aquí, presentamos un protocolo para la generación de pluripotentes inducidas (iPSCs) de células de fibroblastos derivados pacientes de síndrome de Li-Fraumeni (LFS), diferenciación de iPSCs a través de las células madre mesenquimales (MSCs) y osteoblastos, modelado en vivo tumorigenesis con osteoblastos derivados de paciente LFS.

Modelado de Osteosarcoma usando las células de vástago de Pluripotent inducido derivados del paciente el síndrome de Li-Fraumeni

El modelo de la matriz extracelular (BEM) de hueso para el osteosarcoma (OS) está bien establecida y se muestra aquí. Puede utilizarse como un andamio adecuado para mímico el tumor primario crecimiento en vitro y proporcionando un modelo ideal para el estudio de la heterogeneidad histologic y cytogenic de OS.

Modelo de matriz extracelular ósea tridimensional para el Osteosarcoma

Aquí, se describe un implante ortotópico singénico seguido de un procedimiento de amputación del osteosarcoma con metástasis pulmonar espontánea que se puede utilizar para la investigación preclínica de la biología de la metástasis y el desarrollo de nuevas terapias.

Un modelo de rata Sprague Dawley de osteosarcoma ortotópico singénico con amputación para controlar la tasa de metástasis

El presente protocolo describe la inyección de células de osteosarcoma intratibia para generar modelos de ratón con osteosarcoma ortotópico y lesiones de metástasis pulmonar.

Inyección de células de osteosarcoma intratibial para generar osteosarcoma ortotópico y metástasis pulmonar modelos de ratón

Este protocolo presenta un método económico y eficiente para la evaluación cuantitativa de la microarquitectura ósea en un modelo murino de osteoporosis mediante la combinación de técnicas de tinción de hematoxilina-eosina (HE) y microtomografía computarizada (Micro-CT).

Evaluación de la microarquitectura ósea trabecular en un modelo murino de osteoporosis

Este protocolo proporciona un modelo murino de cáncer colorrectal asociado a coloproctitis ulcerosa inducido por azometano combinado con sulfato de dextrano sódico. El modelo se utilizó para evaluar la eficacia de los compuestos de la medicina tradicional china en la prevención y el tratamiento del cáncer colorrectal.

Establecimiento de un modelo de cáncer de coloproctitis en ratones y evaluación del efecto terapéutico de la medicina china

El presente protocolo describe el método para establecer un modelo de ratón de xenoinjerto derivado del paciente (PDX) utilizando tejido de osteosarcoma humano.

Establecimiento de un modelo de ratón de xenoinjerto derivado de un paciente con tejidos de osteosarcoma humano

La osteoporosis posmenopáusica se ha convertido en un problema de salud pública mundial. El objetivo de este estudio es explorar los efectos terapéuticos y los mecanismos relacionados de las píldoras de medicina tradicional china Xiaoyao sobre esta afección.

Estudios sobre el efecto antiinflamatorio de las píldoras Xiaoyao en el tratamiento de la osteoporosis posmenopáusica en ratones

Aprenda a preparar y administrar decocciones de medicina tradicional china mediante sonda nasogástrica en ratones modelo de osteosarcoma. Este protocolo estandarizado mejora la reproducibilidad y protección animal en estudios farmacológicos.

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Estrategia de sonda nasogástrica para la fórmula de decocción de la medicina tradicional china en ratones modelo de osteosarcoma

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