Name: Recolección simultánea de cerebro y suero murino fetal para evaluar los efectos de la dieta materna en la nutrición y el neurodesarrollo en la neurofibromatosis tipo 1 (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-05-17T13:50:00.000+00:00
Duration: 5 min 44 s
Description: Aprenda a recolectar simultáneamente cerebro y suero fetal en ratones para estudiar el impacto de la dieta materna en el neurodesarrollo y la formación de tumores cerebrales en modelos de neurofibromatosis tipo 1.

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<meta charset="utf8"></head><body>Recolección simultánea del cerebro y el suero del feto murino

<ol><li>Listernick, R., Darling, C., Greenwald, M., Strauss, L., Charrow, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optic+pathway+tumors+in+children%3A+the+effect+of+neurofibromatosis+type+1+on+clinical+manifestations+and+natural+history%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pediatr%22%5BJournal%5D)">Optic pathway tumors in children: the effect of neurofibromatosis type 1 on clinical manifestations and natural history.</a> J Pediatr. 127 (5), 718-722 (1995).</li>
<li>Fisher, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+molecular+and+clinical+analysis+of+low-grade+gliomas+in+children+with+neurofibromatosis+type+1+%28NF1%29%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Integrated molecular and clinical analysis of low-grade gliomas in children with neurofibromatosis type 1 (NF1).</a> Acta Neuropathol. 141 (4), 605-617 (2021).</li>
<li>Cimino, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expanded+analysis+of+high-grade+astrocytoma+with+piloid+features+identifies+an+epigenetically+and+clinically+distinct+subtype+associated+with+neurofibromatosis+type+1%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Expanded analysis of high-grade astrocytoma with piloid features identifies an epigenetically and clinically distinct subtype associated with neurofibromatosis type 1.</a> Acta Neuropathol. 145 (1), 71-82 (2023).</li>
<li>Lucas, C. -H. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplatform+molecular+analyses+refine+classification+of+gliomas+arising+in+patients+with+neurofibromatosis+type+1%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Multiplatform molecular analyses refine classification of gliomas arising in patients with neurofibromatosis type 1.</a> Acta Neuropathol. 144 (4), 747-765 (2022).</li>
<li>Fisher, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+neurofibromatosis+type+1-associated+plexiform+neurofibromas%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro-Oncol%22%5BJournal%5D)">Management of neurofibromatosis type 1-associated plexiform neurofibromas.</a> Neuro-Oncol. 24 (11), 1827-1844 (2022).</li>
<li>Packer, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plexiform+neurofibromas+in+NF1%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Plexiform neurofibromas in NF1.</a> Neurology. 58 (10), 1461-1470 (2002).</li>
<li>Evans, D. G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Malignant+peripheral+nerve+sheath+tumours+in+neurofibromatosis+1%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Genet%22%5BJournal%5D)">Malignant peripheral nerve sheath tumours in neurofibromatosis 1.</a> J Med Genet. 39 (5), 311(2002).</li>
<li>Prudner, B. C., Ball, T., Rathore, R., Hirbe, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosis+and+management+of+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumors%3A+Current+practice+and+future+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Neurooncol+Adv%22%5BJournal%5D)">Diagnosis and management of malignant peripheral nerve sheath tumors: Current practice and future perspectives.</a> Neurooncol Adv. 2, Suppl 1 i40-i49 (2020).</li>
<li>Ma, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+molecular+basis+for+neurofibroma-associated+skeletal+manifestations+in+NF1%5BTitle%5D)+AND+%22Genet+Med%22%5BJournal%5D)">A molecular basis for neurofibroma-associated skeletal manifestations in NF1.</a> Genet Med. 22 (11), 1786-1793 (2020).</li>
<li>Ozarslan, B., Russo, T., Argenziano, G., Santoro, C., Piccolo, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutaneous+findings+in+neurofibromatosis+Type+1%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers%22%5BJournal%5D)">Cutaneous findings in neurofibromatosis Type 1.</a> Cancers. 13 (3), 463(2021).</li>
<li>Hyman, S. L., Shores, A., North, K. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+nature+and+frequency+of+cognitive+deficits+in+children+with+neurofibromatosis+type+1%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">The nature and frequency of cognitive deficits in children with neurofibromatosis type 1.</a> Neurology. 65 (7), 1037-1044 (2005).</li>
<li>Morris, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disease+burden+and+symptom+structure+of+autism+in+neurofibromatosis+type+1%3A+a+study+of+the+International+NF1-ASD+Consortium+Team+%28INFACT%29%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Disease burden and symptom structure of autism in neurofibromatosis type 1: a study of the International NF1-ASD Consortium Team (INFACT).</a> JAMA Psychiatry. 73 (12), 1276-1284 (2016).</li>
<li>Geoffray, M. -M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predictors+of+cognitive%2C+behavioural+and+academic+difficulties+in+NF1%5BTitle%5D)+AND+%22J+Psychiatr+Res%22%5BJournal%5D)">Predictors of cognitive, behavioural and academic difficulties in NF1.</a> J Psychiatr Res. 140, 545-550 (2021).</li>
<li>Monroe, C. L., Dahiya, S., Gutmann, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissecting+clinical+heterogeneity+in+neurofibromatosis+type+1%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Rev+Pathol%22%5BJournal%5D)">Dissecting clinical heterogeneity in neurofibromatosis type 1.</a> Ann Rev Pathol. 12 (1), 53-74 (2017).</li>
<li>Kehrer-Sawatzki, H., Mautner, V. -F., Cooper, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+genotype-phenotype+relationships+in+patients+with+large+NF1+deletions%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Genet%22%5BJournal%5D)">Emerging genotype-phenotype relationships in patients with large NF1 deletions.</a> Hum Genet. 136 (4), 349-376 (2017).</li>
<li>Hou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predictors+of+cognitive+development+in+children+with+neurofibromatosis+type+1+and+plexiform+neurofibromas%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Med+Child+Neurol%22%5BJournal%5D)">Predictors of cognitive development in children with neurofibromatosis type 1 and plexiform neurofibromas.</a> Dev Med Child Neurol. 62 (8), 977-984 (2020).</li>
<li>Biotteau, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sporadic+and+familial+variants+in+NF1%3A+an+explanation+of+the+wide+variability+in+neurocognitive+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurol%22%5BJournal%5D)">Sporadic and familial variants in NF1: an explanation of the wide variability in neurocognitive phenotype.</a> Front Neurol. 11, 368(2020).</li>
<li>Rodriguez, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+adiposity+prior+to+pregnancy+is+associated+with+ADHD+symptoms+in+offspring%3A+evidence+from+three+prospective+pregnancy+cohorts%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Obes+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Maternal adiposity prior to pregnancy is associated with ADHD symptoms in offspring: evidence from three prospective pregnancy cohorts.</a> Int J Obes (Lond). 32 (3), 550-557 (2008).</li>
<li>Andersen, C. H., Thomsen, P. H., Nohr, E. A., Lemcke, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+body+mass+index+before+pregnancy+as+a+risk+factor+for+ADHD+and+autism+in+children%29%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Child+Adolesc+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Maternal body mass index before pregnancy as a risk factor for ADHD and autism in children).</a> Eur Child Adolesc Psychiatry. 27 (2), 139-148 (2018).</li>
<li>Pugh, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gestational+weight+gain%2C+prepregnancy+body+mass+index+and+offspring+attention-deficit+hyperactivity+disorder+symptoms+and+behaviour+at+age+10%5BTitle%5D)+AND+%22Bjog%22%5BJournal%5D)">Gestational weight gain, prepregnancy body mass index and offspring attention-deficit hyperactivity disorder symptoms and behaviour at age 10.</a> Bjog. 123 (13), 2094-2103 (2016).</li>
<li>Mina, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prenatal+exposure+to+maternal+very+severe+obesity+is+associated+with+impaired+neurodevelopment+and+executive+functioning+in+children%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Res%22%5BJournal%5D)">Prenatal exposure to maternal very severe obesity is associated with impaired neurodevelopment and executive functioning in children.</a> Pediatr Res. 82 (1), 47-54 (2017).</li>
<li>Oken, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+maternal+prenatal+weight+and+offspring+cognition+and+behavior%3A+Results+from+the+Promotion+of+Breastfeeding+Intervention+Trial+%28PROBIT%29+Cohort%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Netw+Open%22%5BJournal%5D)">Analysis of maternal prenatal weight and offspring cognition and behavior: Results from the Promotion of Breastfeeding Intervention Trial (PROBIT) Cohort.</a> JAMA Netw Open. 4 (8), e2121429-e2121429 (2021).</li>
<li>Buss, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+executive+function+mediates+the+association+between+maternal+pre-pregnancy+body+mass+index+and+child+ADHD+symptoms%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+ONE%22%5BJournal%5D)">Impaired executive function mediates the association between maternal pre-pregnancy body mass index and child ADHD symptoms.</a> PLOS ONE. 7 (6), e37758(2012).</li>
<li>Li, Y. -M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+between+maternal+obesity+and+autism+spectrum+disorder+in+offspring%3A+a+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Autism+Dev+Disord%22%5BJournal%5D)">Association between maternal obesity and autism spectrum disorder in offspring: a meta-analysis.</a> J Autism Dev Disord. 46 (1), 95-102 (2016).</li>
<li>Dow, C., Galera, C., Charles, M. -A., Heude, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+pre-pregnancy+BMI+and+offspring+hyperactivity-inattention+trajectories+from+3+to+8+years+in+the+EDEN+birth+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Child+Adolesc+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Maternal pre-pregnancy BMI and offspring hyperactivity-inattention trajectories from 3 to 8 years in the EDEN birth cohort study.</a> Eur Child Adolesc Psychiatry. 32 (10), 2057-2065 (2023).</li>
<li>Fast, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+attention-deficit%2Fhyperactivity+disorder+and+autism+in+12-year-old+children%3A+A+population-based+cohort%5BTitle%5D)+AND+%22Devl+Med+Child+Neurol%22%5BJournal%5D)">Prevalence of attention-deficit/hyperactivity disorder and autism in 12-year-old children: A population-based cohort.</a> Devl Med Child Neurol. 66 (4), 493-500 (2023).</li>
<li>Carter, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+obesity+and+diabetes+during+pregnancy+and+early+autism+screening+score+at+well-child+visits+in+standard+clinical+practice%5BTitle%5D)+AND+%22Autism%22%5BJournal%5D)">Maternal obesity and diabetes during pregnancy and early autism screening score at well-child visits in standard clinical practice.</a> Autism. 28 (4), 975-984 (2023).</li>
<li>West, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationships+between+maternal+body+mass+index+and+child+cognitive+outcomes+at+3+years+of+age+are+buffered+by+specific+early+environments+in+a+prospective+Canadian+birth+cohort%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dev+Orig+Health+Dis%22%5BJournal%5D)">Relationships between maternal body mass index and child cognitive outcomes at 3 years of age are buffered by specific early environments in a prospective Canadian birth cohort.</a> J Dev Orig Health Dis. 14 (1), 42-52 (2023).</li>
<li>Gutmann, D. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurofibromatosis+type+1%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Dis+Primers%22%5BJournal%5D)">Neurofibromatosis type 1.</a> Nat Rev Dis Primers. 3, 17004(2017).</li>
<li>Martins, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lower+fasting+blood+glucose+in+neurofibromatosis+type+1%5BTitle%5D)+AND+%22Endocr+Connect%22%5BJournal%5D)">Lower fasting blood glucose in neurofibromatosis type 1.</a> Endocr Connect. 5 (1), 28-33 (2016).</li>
<li>Martins, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+insulin+sensitivity+in+individuals+with+neurofibromatosis+type+1%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Increased insulin sensitivity in individuals with neurofibromatosis type 1.</a> Arch Endocrinol Metab. 62 (1), 41-46 (2018).</li>
<li>Brossier, N. M., Thondapu, S., Cobb, O. M., Dahiya, S., Gutmann, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal%2C+spatial%2C+and+genetic+constraints+contribute+to+the+patterning+and+penetrance+of+murine+Neurofibromatosis-1+optic+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro+Oncol%22%5BJournal%5D)">Temporal, spatial, and genetic constraints contribute to the patterning and penetrance of murine Neurofibromatosis-1 optic glioma.</a> Neuro Oncol. 23 (4), 625-637 (2020).</li>
<li>de Lurdes Pinto, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technical+Report%3A+Mouse+fetal+blood+collection+taking+the+best+out+of+the+old+needle-syringe+method%5BTitle%5D)+AND+%22Scandinavian+Journal+of+Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Technical Report: Mouse fetal blood collection taking the best out of the old needle-syringe method.</a> Scandinavian Journal of Laboratory Animal Science. 35 (1), 5(2008).</li>
<li>Musillo, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bdnf-Nrf-2+crosstalk+and+emotional+behavior+are+disrupted+in+a+sex-dependent+fashion+in+adolescent+mice+exposed+to+maternal+stress+or+maternal+obesity%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Bdnf-Nrf-2 crosstalk and emotional behavior are disrupted in a sex-dependent fashion in adolescent mice exposed to maternal stress or maternal obesity.</a> Transl Psychiatry. 13 (1), 399(2023).</li>
<li>Encinas, J. M., Vaahtokari, A., Enikolopov, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluoxetine+targets+early+progenitor+cells+in+the+adult+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Fluoxetine targets early progenitor cells in the adult brain.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (21), 8233-8238 (2006).</li>
<li>Anastasaki, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+induced+pluripotent+stem+cell+engineering+establishes+a+humanized+mouse+platform+for+pediatric+low-grade+glioma+modeling%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol+Commun%22%5BJournal%5D)">Human induced pluripotent stem cell engineering establishes a humanized mouse platform for pediatric low-grade glioma modeling.</a> Acta Neuropathol Commun. 10 (1), 120(2022).</li>
<li>Cai, H. -J., Xie, C. -L., Chen, Q., Chen, X. -Y., Chen, Y. -H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+relationship+between+hepatic+low-density+lipoprotein+receptor+activity+and+serum+cholesterol+level+in+the+human+fetus%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">The relationship between hepatic low-density lipoprotein receptor activity and serum cholesterol level in the human fetus.</a> Hepatology. 13 (5), 852-857 (1991).</li>
<li>Toonen, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NF1+germline+mutation+differentially+dictates+optic+glioma+formation+and+growth+in+neurofibromatosis-1%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">NF1 germline mutation differentially dictates optic glioma formation and growth in neurofibromatosis-1.</a> Hum Mol Genet. 25 (9), 1703-1713 (2016).</li>
<li>Guo, X., Pan, Y., Gutmann, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+and+genomic+alterations+differentially+dictate+low-grade+glioma+growth+through+cancer+stem+cell-specific+chemokine+recruitment+of+T+cells+and+microglia%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro+Oncol%22%5BJournal%5D)">Genetic and genomic alterations differentially dictate low-grade glioma growth through cancer stem cell-specific chemokine recruitment of T cells and microglia.</a> Neuro Oncol. 21 (10), 1250-1262 (2019).</li>
<li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Pharmacother%22%5BJournal%5D)">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> J Pharmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).</li>
<li>Meyer, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+three+commonly+used+blood+sampling+techniques+on+the+welfare+of+laboratory+mice%3A+Taking+the+animal%27s+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+ONE%22%5BJournal%5D)">Impact of three commonly used blood sampling techniques on the welfare of laboratory mice: Taking the animal's perspective.</a> PLOS ONE. 15 (9), e0238895(2020).</li>
<li>Diehl, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+good+practice+guide+to+the+administration+of+substances+and+removal+of+blood%2C+including+routes+and+volumes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Toxicol%22%5BJournal%5D)">A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes.</a> J Appl Toxicol. 21 (1), 15-23 (2001).</li>
<li>Jung, J., Garnett, E., Rector, K., Jariwala, P., Devaraj, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+collection+tube+type+on+glucose+stability+in+whole+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Clin+Lab+Sci%22%5BJournal%5D)">Effect of collection tube type on glucose stability in whole blood.</a> Ann Clin Lab Sci. 50 (4), 557-559 (2020).</li>
<li>Bonetti, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Which+sample+tube+should+be+used+for+routine+glucose+determination%5BTitle%5D)+AND+%22Prim+Care+Diabetes%22%5BJournal%5D)">Which sample tube should be used for routine glucose determination.</a> Prim Care Diabetes. 10 (3), 227-232 (2016).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>#5/45 Pinzas</td><td>Dumont&nbsp;</td><td>11251-35 Forma de</td><td>la punta: angulado 45 grados;</td></tr><tr><td>4200 Tapestation</td><td>Agilent</td><td>G2991BA</td><td>Verificar la integridad y la calidad del ARN, medición de los valores RIN</td></tr><tr><td>Contenedor de nitrógeno líquido de sobremesa</td><td>Thermo Fisher</td><td>2122</td><td>U otro contenedor crioseguro</td></tr><tr><td>Control Chow</td><td>PicoLab</td><td>5053</td><td>También se pueden utilizar dietas de investigación D12328 (bajas en grasa, bajas en azúcar).</td></tr><tr><td>Pinzas curvas</td><td>Cole Parmer</td><td>UX-10818-25</td><td>Forma de la punta: curvada 90&deg;</td></tr><tr><td>Mango de cuchilla de disección</td><td>Cole-Parmer Essentials</td><td>10822-20</td><td>SS Siegel-Type, cuchillas #10 a #15</td></tr><tr><td>EMS SuperCut Tijeras</td> de <td>disección Ciencias del microscopio electrónico</td><td>72996-01</td><td>5&frac12; " (139,7 mm), Anticuerpo</td></tr><tr><td>GFAP</td> Recto <td>Abcam</td><td>ab7260</td><td>Diluido 1:350. Bloquea con un 10% de suero que contiene 0,3 M de glicina.</td></tr><tr><td>Cuchillas quirúrgicas de acero al carbono Glassvan, tamaño 11</td> Las cuchillas <td>MYCO medical</td><td>2001T-11</td><td>#11 permiten un corte recto y plano</td></tr><tr><td>Cuchara de laboratorio Micro</td><td>Az Scilab</td><td>A2Z-VL001</td><td>acero inoxidable, esterilizable en autoclave</td></tr><tr><td>Micro tijeras</td><td>Rubis</td><td>78180-1C3</td><td>modelo 1C300</td></tr><tr><td>Minivette&nbsp; POCT neutro</td><td>Sarstedt</td><td>17.2111.050</td><td>volumen nominal: 50 y micro; L, sin preparación</td></tr><tr><td>Nanorop</td><td>Thermo Fisher</td><td>13-400-519</td><td>Medir la concentración de ARN, proporciones 260/280</td></tr><tr><td>Dieta obesogénica</td><td>Researchdiets.com</td><td>D12331</td> Reactivo de colesterol total <td>alto en grasas y sacarosa</td></tr><tr><td></td><td>Thermo Fisher</td><td>TR13421</td><td>Detección colorimétrica</td></tr><tr><td>&beta;-anticuerpo de actina</td><td>Señalización celular</td><td>8457</td><td>Diluido 1:1.000.</td></tr></tbody></table>

recolección simultánea de cerebro y suero murino fetal para evaluar los efectos de la dieta materna en la nutrición y el neurodesarrollo en la neurofibromatosis tipo 1

Concurrent Collection of Fetal Murine Brain and Serum to Assess Effects of Maternal Diet on Nutrition and Neurodevelopment in Neurofibromatosis Type 1

Para ilustrar la calidad del tejido cerebral obtenido a través de esta técnica, mostramos muestras de cerebros fetales de ratones Nestin-CFPnuc35, inmunoteñidos para GFAP según una técnica previamente reportada32. Las células Nestin+ se observan recubriendo el ventrículo lateral (Figura 2A), con filamentos GFAP+ que se extienden desde la superficie. No observamos diferencias entre la expresión de nestina o GFAP en el ventrículo lateral de los ratones con EC frente a los ratones expuestos a Ob en las cepas heterocigóticas WT o Nf1 (Figura 2A,B). A continuación, evaluamos la calidad del tejido microdisecado. Primero realizamos Western blot36 para la proteína de mantenimiento β-actina en el tejido microdisecado aislado de los ventrículos laterales de los ratones EC frente a los ratones expuestos a Ob. Todas las muestras mostraron una fuerte expresión de β-actina (Figura 2C), como se esperaba. A continuación, aislamos el ARN del tejido microdisecado según la metodología previamente informada32. El ARN aislado mostró una alta pureza (260/280 ≥ 2) e integridad (valores de RIN ≥ 9), lo que indica ARN no degradado de alta pureza (Figura 2D).
A continuación, comparamos los diferentes métodos de aislamiento sérico. Utilizando nuestro método minivette, recolectamos rutinariamente mayores volúmenes de suero no hemolizado, mientras que el drenaje por gravedad y la punción torácica resultaron en una recolección de volumen muy variable y hemólisis en muchas muestras (Figura 3A, B). Para ilustrar la calidad del suero obtenido a través de esta técnica, medimos los niveles de colesterol sérico total utilizando el reactivo de colesterol total según las instrucciones del fabricante. Los niveles de colesterol fetal estaban dentro del rango esperado para las crías de gestación tardía según estudios previos en fetos humanos37. Los niveles aumentaron en los ratones expuestos a Ob en comparación con los expuestos a CD tanto para las crías de tipo salvaje (Figura 3C, izquierda) como para las heterocigóticas Nf1 (Figura 3C, derecha). Tenga en cuenta que el panel derecho muestra datos combinados de dos cepas heterocigóticas Nf1 diferentes con mutaciones de la línea germinal identificadas por el paciente (R681X, C383X)32,38,39, ya que se observaron perfiles similares en ambas cepas.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66226/66226fig01.jpg"> Figura 1: Resumen gráfico del flujo de trabajo. Las crías se aíslan primero de las madres preñadas. A continuación, se extrae el suero de las crías. Por último, se aíslan cerebros enteros de las crías y, si se desea, se microdiseccionan en busca de regiones de interés. Gráfico creado con BioRender.com. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66226/66226fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66226/66226fig02.jpg"> Figura 2: Resultados ilustrativos, tejido cerebral. (A) Los cerebros criseccionados de ratones Nestin-CFPnuc , que expresan una proteína fluorescente cian localizada nuclearmente bajo el control del promotor Nestin, se recolectaron con este método y se inmunotindieron para GFAP (rojo) según la metodología previamente informada32. Las células nestin-positivas se visualizan a través de la expresión endógena de Nestin-CFPnuc (verde). Los núcleos se contratiñeron con bis-benzimida (azul). No hubo diferencias significativas entre los cerebros con TC y los cerebros con WT expuestos a Ob. Barra de escala = 100 μm. (B) Nestin-CFPnuc; Las críasde Nf1 mut/+ se evaluaron de manera similar. La distribución de GFAP y Nestin-CFP pareció similar a la WT y no varió con las condiciones dietéticas. Barra de escala = 100 μm. (C) La proteína se aisló del tejido microdisecado del VI. La transferencia de Western se realizó según la metodología previamente reportada36 con 20 μg de proteína cargada por carril. Se detectó una fuerte expresión de β-actina en todas las muestras. (D) El ARN se aisló a partir de tejido microdisecado según la metodología previamente reportada32. La calidad del ARN se evaluó mediante proporciones 260/280 y valores de RIN. Todas las muestras mostraron excelentes relaciones 260/280 (≥2) y valores de RIN (≥9), lo que indica un buen aislamiento del ARN no degradado. Abreviaturas: CFP = proteína fluorescente cian; GFAP = proteína ácida fibrilar glial; WT = tipo salvaje; VI = ventrículo lateral; RIN = número de integridad del ARN. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66226/66226fig02large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66226/66226fig03.jpg"> Figura 3: Resultados ilustrativos y suero. (A) Se recolectó suero de cada uno de los métodos descritos. La recolección con la minivette permitió la recolección rutinaria de suero no hemolizado en comparación con el drenaje asistido por gravedad y la punción torácica. (B) Se muestran los volúmenes típicos de recolección de suero. La colección Minivette permitió una colección más reproducible de mayores volúmenes de suero. Significación estadística determinada por ANOVA de un factor con comparaciones múltiples. Barras de error: SEM. (C) El colesterol sérico total se midió a partir de CD frente a WT expuesto a Ob (izquierda) y suero fetal heterocigoto Nf1 (derecha); Los animales expuestos a ob mostraron un colesterol sérico más alto en ambos genotipos. Significación estadística determinada por t-test. Barras de error: SEM. Abreviaturas: WT = tipo salvaje; CD = dieta de control; Ob = dieta obesogénica. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66226/66226fig03large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
Tabla suplementaria S1: Composiciones dietéticas. Se muestra la composición de las dietas control y obesogénicas utilizadas en este manuscrito. NOTA: Para una dieta baja en grasas y sin sacarosa que controle mejor los componentes dietéticos individuales en D12331, se puede preferir la dieta D12328 (researchdiets.com). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66226/66226_S_Table1Rev.zip" target="_blank">Haga clic aquí para descargar este archivo.</a>

Recolección simultánea de cerebro y suero murino fetal para evaluar los efectos de la dieta materna en la nutrición y el neurodesarrollo en la neurofibromatosis tipo 1

Maternal diet-induced obesity has been demonstrated to alter neurodevelopment in offspring, which may lead to reduced cognitive capacity, hyperactivity, ...

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Investigación

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Genetics

Genética

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La ecocardiografía fetal murino

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Recolección simultánea de cerebro y suero murino fetal para evaluar los efectos de la dieta materna en la nutrición y el neurodesarrollo en la neurofibromatosis tipo 1

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