Name: Establecimiento de un modelo experimental de endometrioma en ratones para estudiar su infertilidad relacionada (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-05T13:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 7 s
Description: Aprenda a establecer un modelo experimental de endometrioma en ratones C57BL/6J para estudiar los mecanismos de infertilidad relacionada. Esta herramienta avanza la investigación en medicina reproductiva.

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<meta charset="utf8"></head><body>Desarrollo de un nuevo modelo de ratón simulador de endometrioma

<table><tbody><tr><td>Jeringa de 1 cc con aguja de 25 G</td><td>BD Biociencias</td><td>301320</td><td></td></tr><tr><td>Placa de cultivo de tejidos de 10 mm</td><td>HALCÓN</td><td>353001</td><td></td></tr><tr><td>10% de formalina tamponada</td><td>Fisher Scientific</td><td>SF100-4</td><td></td></tr><tr><td>10x tampón de solución salina tamponada con fosfato (PBS)</td><td>Fisher Scientific</td><td>AM9625</td><td></td></tr><tr><td>Aguja de 30 g</td><td>BD Biociencias</td><td>305107</td><td></td></tr><tr><td>5-0 sutura no absorbible de seda trenzada negra</td><td>Ethicon Inc.</td><td>W500H</td><td></td></tr><tr><td>70% Etanol</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Portaobjetos adhesivos para microscopio</td><td>Marienfeld</td><td>810401</td><td></td></tr><tr><td>Inyección de buprenorfina&nbsp;</td><td>Med-Vet Internacional</td><td>RXBUPRENOR5</td><td></td></tr><tr><td>Hisopo de algodón de doble cabezal</td><td>SANYO Co., LTD.</td><td>HUBY-340</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas finas</td><td>Herramientas de ciencia fina</td><td>11254-20</td><td></td></tr><tr><td>Ketamina</td><td>Alfasan International b.v</td><td>2203095-08</td><td></td></tr><tr><td>Microtubos</td><td>Corning&nbsp;</td><td>MCT-150-C</td><td></td></tr><tr><td>Portaagujas</td><td>Corporación Excelta</td><td>2827-NH-35-SE-ND</td><td></td></tr><tr><td>Ungüento oftálmico</td><td>Principales productos farmacéuticos</td><td>10033691</td><td></td></tr><tr><td>Kit de tinción de ácido periódico Schiff (PAS)</td><td>Abcam</td><td>AB150680</td><td></td></tr><tr><td>Guantes estériles sin polvo</td><td>Fisher Scientific</td><td>19020558</td><td></td></tr><tr><td>Procesamiento/incrustación de casetes</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-197-700A</td><td></td></tr><tr><td>Bisturí tamaño 3</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-079-657</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas semicurvadas dentadas pequeñas</td><td>Roboz Instrumentos Quirúrgicos Co.</td><td>RS-5135</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras quirúrgicas pequeñas</td><td>Roboz Instrumentos Quirúrgicos Co.</td><td>RS-5850</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio óptico estándar</td><td></td><td></td><td>Para evaluar citologías vaginales, frotis y análisis histológicos.</td></tr><tr><td>Hojas de bisturí de acero #10</td><td>B. Braun</td><td>BB510</td><td></td></tr><tr><td>Gasa estéril</td><td>MEDICOM</td><td>HMWS 077</td><td></td></tr><tr><td>Placas de Petri de vidrio pyrex esterilizado</td><td>Corning</td><td>70160-101</td><td></td></tr><tr><td>Almohadilla eléctrica termorregulada</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>VICRYL RAPIDE (poliglactina 910) sutura absorbible</td><td>Ethicon Inc.</td><td>W9918</td><td></td></tr><tr><td>Xilacina&nbsp;</td><td>Alfasan International b.v</td><td>2110333-10</td><td></td></tr></tbody></table>

establecimiento de un modelo experimental de endometrioma en ratones para estudiar su infertilidad relacionada

Establishment of an Experimental Mouse Model of Endometrioma to Study its Related Infertility

El exitoso establecimiento de OMA De los 12 ratones sometidos al protocolo de trasplante, 10 presentaron lesiones características de OMA, tanto a nivel anatómico macroscópico como histológico, lo que se traduce en una tasa de éxito del 83%. El examen macroscópico reveló lesiones llenas de líquido adheridas a los ovarios, que recuerdan a las presentaciones clínicas de OMA (Figura 2). El escrutinio histopatológico, como se ilustra en la Figura 3, confirmó la implantación exitosa del tejido endometrial ectópico. Además, la infiltración de lesiones endometriósicas indujo una atresia masiva de los folículos junto a los implantes, lo que indica su interferencia con el medio ovárico.
Especificidad del modelo Para la validez del modelo fue fundamental su especificidad para la endometriosis ovárica. Tras un examen exhaustivo, no se identificaron implantes endometriósicos extraños en ningún otro órgano pélvico o abdominal, lo que subraya la precisión del modelo y su potencial como herramienta sólida para investigar el endometrioma y su infertilidad relacionada.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66240/66240fig01.jpg"> 
Figura 1: Generación del modelo de endometrioma. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66240/66240fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66240/66240fig02.jpg"> 
Figura 2: Anatomía macroscópica del endometrioma. En comparación con el grupo control simulado, el crecimiento quístico endometrial ectópico fue visible en asociación con la morfología ovárica 4 semanas después del trasplante en el grupo OMA en morfología. Contorno discontinuo azul: lesión endometriósica. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66240/66240fig02large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66240/66240fig03.jpg"> 
Figura 3: Sección histológica teñida de una lesión endometrial del modelo de ratón. En comparación con el grupo de control simulado, el crecimiento quístico endometrial ectópico fue visible en asociación con el ovario 4 semanas después del trasplante en el grupo OMA en histología. Las flechas negras indican folículos atréticos. Barras de escala = 0,5 mm. Abreviatura: OMA = endometrioma. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66240/66240fig03large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>

Establecimiento de un modelo experimental de endometrioma en ratones para estudiar su infertilidad relacionada

Endometrioma (OMA), a subtype of endometriosis characterized by the formation of endometriotic cysts in the ovaries, affects 17-44% of individuals ...

El alcance de nuestra investigación se centra en comprender los mecanismos subyacentes a la infertilidad asociada al endometrioma. Nuestro objetivo es abordar la brecha en el conocimiento mediante el desarrollo de un modelo de ratón que simule el endometrioma e investigando su impacto en la fertilidad. En el campo de la investigación de la endometriosis, los desarrollos recientes incluyen avances en la comprensión de los mecanismos moleculares subyacentes a la endometriosis, la identificación de nuevos marcadores para el diagnóstico y el tratamiento, y el desarrollo de modelos innovadores para estudiar subtipos específicos como el endometrioma. Estos desarrollos contribuyen a mejorar el conocimiento y las posibles estrategias terapéuticas para la endometriosis. Los desafíos experimentales actuales en la investigación del endometrioma incluyen la falta de un modelo animal confiable, la comprensión limitada de la patogénesis y el impacto en la fertilidad, y la necesidad de estudios de recurrencia y pruebas de diagnóstico. El modelo de ratón de endometrioma y la incorporación de hallazgos abordan estos desafíos y avanzan en el campo.Nuestro protocolo ofrece claras ventajas en comparación con otras técnicas. Se enfoca específicamente en imitar el endometrioma, mientras que no se han establecido otros subtipos mediante este método. Con una alta tasa de éxito, permite modificaciones genéticas y replica características reproductivas similares a las de los humanos, lo que lo convierte en una herramienta valiosa para estudiar la infertilidad relacionada con el endometrioma. Nuestros hallazgos allanaron el camino para una nueva era de investigación sobre la endometriosis. Al llenar un vacío de larga data, nuestro modelo promete conocimientos transformadores, revolucionando nuestra comprensión, tratamiento y potencialmente prevención del endometrioma. Al integrar los hallazgos de los estudios de recurrencia y diagnóstico, nuestra investigación mejora el contexto más amplio de la investigación de la endometriosis y la atención al paciente.[Narrador] Después de recolectar ropa de cama que contenga feromonas masculinas, introdúzcalas en la jaula del ratón hembra durante 48 horas. Vierta 10 mililitros de PBS en una placa de Petri y sumerja un extremo de un hisopo de algodón en ella para absorber el líquido. Saque suavemente un ratón de su jaula y colóquelo en la tapa. Inserte delicadamente el hisopo de algodón humedecido en la vagina y gire el hisopo suavemente a 45 grados con respecto al eje largo del cuerpo del animal. Después de recolectar las células de las paredes luminosas vaginales, retire con cuidado el hisopo. Enrolle suavemente la punta del hisopo en un portaobjetos de vidrio limpio y preetiquetado para transferir las células recolectadas. Examine el portaobjetos bajo un microscopio para detectar la presencia de células epiteliales cornificadas que indiquen el estadio de celo. Para comenzar, desinfecte el área abdominal del ratón hembra en etapa de celo sacrificado por el donante con etanol al 70%. Use tijeras quirúrgicas estériles para hacer una incisión de un centímetro a lo largo de la línea media del peritoneo, exponiendo la capa muscular. Luego, use un par de tijeras diferente para cortar la capa muscular y revelar la cavidad pélvica. Cierre las puntas de las pinzas y levante suavemente los intestinos usando la porción central roma. Después de localizar el útero, disecciona estérilmente todo el cuerno uterino, asegurando la extirpación de ambos cuernos uterinos. Coloque los tejidos extirpados en una placa de Petri que contenga PBS y elimine el exceso de tejido graso. Con un bisturí estéril, disecciona minuciosamente los tejidos en trozos cúbicos de un milímetro. Agregue periódicamente PBS para mantener los tejidos húmedos. Coloque el ratón receptor anestesiado en posición supina sobre una tabla quirúrgica estéril. Identifique el sitio quirúrgico manipulando suavemente las patas traseras para sentir una prominencia ósea debajo de la piel. Desinfecte el área quirúrgica con un hisopo de etanol al 70% y luego con Betadine. En el sitio elegido, haga una incisión lateral precisa entre tres y cinco milímetros. Estabilice el ovario con pinzas de mano no dominantes e inyecte 100 microlitros de PBS en la bolsa ovárica observando una ligera separación. Haga una pequeña hendidura en la bolsa y, con microfórceps, trasplante los fragmentos de tejido uterino en cubos de un milímetro. Después de la cirugía, sutura las capas musculares con suturas absorbibles y la piel con suturas no absorbibles. Después de cuatro semanas, retire el ratón receptor trasplantado de la jaula de alojamiento. Haga una incisión en la línea media en el ratón receptor eutanasiado y exponga la cavidad abdominal para la inspección de órganos. Inspeccione minuciosamente la cavidad abdominal en busca de lesiones endometriósicas extrañas. Luego, extrae los ovarios con lesiones visibles para fotografiarlos. Fije los ovarios con lesiones en formol tamponado neutro al 10%. Después de seccionar y montar las secciones de tejido en un portaobjetos, coloque la solución de xileno para eliminar la parafina. Rehidrate las secciones de tejido colocando el portaobjetos en una serie de concentraciones decrecientes de etanol. Trate las secciones de tejido con ácido periódico al 1% durante cinco a 10 minutos a temperatura ambiente. Luego, enjuague bien el portaobjetos con agua destilada para eliminar cualquier ácido peryódico residual. Ahora, tiñe las secciones de tejido con la solución de desplazamiento durante 15 minutos. Enjuague el portaobjetos con agua caliente del grifo para eliminar el exceso de manchas y luego con agua destilada. Contratiñe las secciones de tejido con hematoxilina de Mayer durante dos o tres minutos. Enjuague el portaobjetos con agua corriente del grifo antes de aplicar el reactivo azulado durante 30 segundos. Después de enjuagar el portaobjetos en agua destilada, deshidrate las secciones en concentraciones crecientes de etanol. Sumerja las secciones en xileno para hacerlas transparentes. Aplique un medio de montaje a las secciones y coloque suavemente un cubreobjetos evitando burbujas de aire. Después del secado, examine el portaobjetos bajo un microscopio óptico para detectar la presencia de glándulas endometriales, estroma y quistes hemorrágicos que confirmen la endometriosis en el ovario. En comparación con el grupo de control simulado, el crecimiento quístico endometrial ectópico fue visible en asociación con la morfología ovárica cuatro semanas después del trasplante en el grupo endometrial. Un escrutinio histopatológico adicional confirmó la implantación exitosa del tejido endometrial ectópico en el grupo endometrial.

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Investigación

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Medicina

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Aprenda a establecer un modelo experimental de endometrioma en ratones C57BL/6J para estudiar los mecanismos de infertilidad relacionada. Esta herramienta avanza la investigación en medicina reproductiva.

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