Name: Tinción con rojo de Picrosirius para la evaluación histopatológica semicuantitativa del depósito de colágeno en modelos murinos de rechazo crónico del aloinjerto pulmonar (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-21T12:10:00.000+00:00
Duration: 4 min 42 s
Description: Aprenda a evaluar semicuantitativamente el depósito de colágeno en modelos murinos de rechazo pulmonar crónico mediante tinción con rojo de Picrosirius. Este método diferencia fibras gruesas y delgadas para caracterizar la fibrosis del injerto.

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Todos los protocolos con animales cumplen con los principios éticos de las 3R para la investigación humanitaria con animales y fueron aprobados por el comité de ética veterinaria local (Veterinäramt Kanton Zürich, Suiza, Estudio número 45/2014). Del mismo modo, los lectores deben obtener el permiso de las instituciones pertinentes antes de realizar cualquier procedimiento en animales de laboratorio.
1. Adquisición de muestras
<ol>
	<li>Realizar experimentos con animales de acuerdo con las necesidades individuales y la aprobación ética respectiva. Un solo microcirujano realiza todas las cirugías sin ningún tiempo de isquemia prolongado adicional. NOTA: Para una reproducción de nuestros resultados representativos, obtenga ratones machos adultos específicos libres de patógenos C57BL/6J, C57BL/10J y BALB/c que pesen entre 27 y 30 g de Charles River Laboratories. En el caso de los isoinjertos, utilice animales C57BL/6J como donantes y receptores. En el modelo menor de incompatibilidad, trasplante pulmones de donantes C57BL/10J a receptores C57BL/6J. En el modelo de incompatibilidad mayor, trasplante de pulmones de donantes BALB/c a receptores C57BL/6J e inyecte ciclosporina (10 mg/kg/día) y metilprednisolona (1,6 mg/kg/día) por vía subcutánea diariamente5. Use solución salina para la perfusión y recupere los pulmones después de 8 semanas (56 días).</li>
	<li>Para la eutanasia, intubar al animal con un catéter de 20 g y ventilarlo conO2 suplementado con isoflurano al 2%-3%. Confirme la profundidad suficiente de la anestesia por la ausencia de una respuesta a un pellizco de la pata.</li>
	<li>Realice una laparosternotomía mediana mediante una incisión en la pared abdominal con tijeras quirúrgicas y un corte a lo largo del esternón para exponer el corazón. Identificar la vena cava inferior y la orejuela auricular izquierda por su localización anatómica.</li>
	<li>En rápida sucesión, corte la vena cava inferior y el apéndice auricular izquierdo con unas tijeras quirúrgicas y perfunda el animal con 3-5 ml de NaCl al 0,9% a través de la raíz de la arteria pulmonar con una jeringa para extraer toda la sangre de la circulación pulmonar. NOTA: La eutanasia debe realizarse de acuerdo con la aprobación ética respectiva. Se pueden aplicar otros métodos de manera similar. Se recomienda que la sangre de la circulación pulmonar se extraiga completamente, lo que también se puede realizar por perfusión después de un paro circulatorio.</li>
	<li>Retire los pulmones perfundidos con unas tijeras.</li>
	<li>Para su conservación, incubar las muestras en formalina al 4%. Inyecte la solución de formalina directamente en el bronquio y la vasculatura pulmonar. Sumerge las muestras en formol y déjalas incubar durante al menos 6 h. NOTA: Para el inflado del pulmón con formalina, se debe aplicar un procedimiento estandarizado para obtener resultados comparables. En otros artículos se publican ejemplos de protocolos para este tipo de procedimientos10,11.</li>
	<li>Recorte el órgano de acuerdo con las necesidades experimentales. Cortar transversalmente los pulmones por la mitad para capturar todas las partes del árbol bronquial en una sección.</li>
	<li>Transfiera las muestras a un procesador automático de tejidos para su deshidratación en secuencia de alcohol, aclarando en xilol y recubrimiento de parafina de la siguiente manera: 70% de etanol, 70% de etanol, 80% de etanol, 96% de etanol, 100% de etanol (1 h cada una), 100% de etanol, 100% de etanol, xilol (2 h cada uno), xilol (1 h) y parafina 3x durante 2 h.</li>
	<li>Derrita la parafina e incruste las muestras en la orientación correcta en casetes de inclusión de polioximetileno. Tenga cuidado de incrustar las muestras con la superficie de corte hacia abajo. Utilice un micrótomo giratorio para cortar secciones de 5 μm consecutivas. Deje secar los portaobjetos durante 24 horas a 37 °C antes de continuar con el procesamiento.</li>
</ol>
2. Desparafinación e hidratación de portaobjetos de parafina
<ol>
	<li>Retire la parafina incubando las muestras 2 veces en xilol al 100% durante 5 minutos cada una. PRECAUCIÓN: El xilol es inflamable y peligroso para la salud. Úselo solo debajo de la campana extractora.</li>
	<li>Hidrate las muestras en etanol al 100%, etanol al 100%, etanol al 95%, etanol al 70% y etanol al 50% durante 2 minutos cada una. Luego, lavar durante 2 min en agua destilada.</li>
</ol>
3. Teñir con Picrosirius Red
<ol>
	<li>Tiñe los portaobjetos durante 8 min en la solución de hemalum de Meyer. Lave los portaobjetos durante 10 minutos con agua corriente del grifo.</li>
	<li>Incubar los portaobjetos durante 1 h en la solución Picrosirius Red. Para la solución de Picrosirius Red, use una solución de tinción premezclada o use 0.1% de Direct Red 80 o Sirius Red F 3B (CI 35780) diluido en ácido pícrico saturado. PRECAUCIÓN: El ácido pícrico es inflamable y altamente explosivo y debe tratarse con cuidado. NOTA: Hay muchos proveedores diferentes de kits de tinción Picrosirius Red disponibles, como se indica en la Tabla de materiales. Tenga en cuenta las diferencias en el precio y los métodos de tinción, y siempre siga las instrucciones de los proveedores. Se recomienda utilizar únicamente kits de tinción con el índice de color específico para Sirius Red F 3B (CI 35780).</li>
	<li>Sumerja los portaobjetos 5x-10x en una solución de ácido acético (0,5%). Agite suavemente los portaobjetos para extraer físicamente la solución.</li>
	<li>Deshidrate los portaobjetos en etanol al 95%, etanol al 100%, etanol al 100%, xilol al 100% y xilol al 100% durante 5 minutos cada uno.</li>
	<li>Incruste agregando una gota de medio de montaje en cada muestra y cúbrala con un cubreobjetos. Deje que los portaobjetos se sequen debajo de una campana extractora.</li>
</ol>
4. Digitalización y procesamiento de imágenes
<ol>
	<li>Enfoque las muestras bajo un microscopio óptico con un software de imagen adecuado hasta que la imagen se vuelva clara y nítida. Agregue un filtro polarizador y ajuste el grado de polarización hasta que el fondo esté completamente oscuro o negro. Cuando el fondo está lo más oscuro posible, se consigue la polarización correcta. NOTA: También es posible visualizar la tinción de Picrosirius Red con luz transmitida convencional y sin filtro polarizador. Para ello, se recomienda utilizar Sirius Red con Fast Green, ya que se ha demostrado que es más sensible que Sirius Red solo12,13. Sin embargo, la microscopía polarizadora es necesaria para distinguir entre fibras de colágeno gruesas y delgadas.</li>
	<li>Escanee todas las muestras completamente con un aumento de 20x y exporte como .tiff. Transferencia a Fiji software14. Asegúrese de limpiar las diapositivas correctamente con anticipación y use configuraciones estandarizadas con respecto al tiempo de exposición y la intensidad de la fuente de luz.</li>
	<li>Rodea la muestra manualmente y recórtala en el software usando Editar &gt; Borrar exterior. Mida el área de superficie total haciendo clic en Analizar &gt; medir. NOTA: La selección del compartimento a medir es un paso crítico para crear resultados fiables y comparables. Al digitalizar y seleccionar toda la muestra, se muestra una buena sección transversal y los tejidos heterogéneos se consideran como un todo. Sin embargo, también es posible limitarse a áreas específicas dentro de las muestras, como la pleura o los bronquios individuales. Tenga en cuenta que siempre debe seleccionar los compartimentos para comparar de manera estandarizada. En caso de que las muestras muestren una gran variabilidad en la ventilación, es aconsejable excluir el área del espacio aéreo del compartimentoanalizado 15.</li>
	<li>Mida el contenido total de colágeno por muestra utilizando el umbral de color haciendo clic en Imagen &gt; Ajustar &gt; umbral de color y ajuste la configuración haciendo clic en Analizar &gt; Analizar partículas. Establecer tamaño = 1 - Infinito, Borrar, Resumir. Brillo = 35 - 255. Tono = 2 - 130 NOTA: Un ajuste razonable de los umbrales de color es fundamental para lograr resultados fiables.</li>
	<li>Repita para las fibras de colágeno gruesas y delgadas ajustando el tono como <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/66395/66395eq01.jpg" style="margin: auto;"> Fibras de colágeno gruesas rojas (tono 2-30) y Fibras de colágeno delgadas amarillo-verde <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/66395/66395eq01.jpg" style="margin: auto;"> (tono 31-130). El resultado será el área de píxeles manchados.</li>
	<li>Configure la macro para el procesamiento automatizado haciendo clic en Plugins &gt; Macros &gt; Grabar y repetir con todas las muestras.</li>
	<li>Para obtener valores finales estandarizados al área de superficie de la sección transversal, divida el área de píxeles teñidos para todos los parámetros por el área de superficie total medida en los pasos 4.3 y 4.5 para cada muestra, respectivamente.</li>
</ol>

<meta charset="utf8"></head><body>Evaluación del colágeno en la fibrosis pulmonar murina mediante tinción con rojo Picrosirius

<ol><li>Weigt, S., DerHovanessian, A., Wallace, W., Lynch, J., Belperio, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bronchiolitis+Obliterans+Syndrome%3A+The+Achilles%27+heel+of+lung+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Bronchiolitis Obliterans Syndrome: The Achilles' heel of lung transplantation.</a> Semin Respir Crit Care Med. 34 (3), 336-351 (2013).</li>
<li>Verleden, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+lung+allograft+dysfunction%3A+Definition%2C+diagnostic+criteria%2C+and+approaches+to+treatment-A+consensus+report+from+the+Pulmonary+Council+of+the+ISHLT%5BTitle%5D)+AND+%22J+Heart+Lung+Transplant%22%5BJournal%5D)">Chronic lung allograft dysfunction: Definition, diagnostic criteria, and approaches to treatment-A consensus report from the Pulmonary Council of the ISHLT.</a> J Heart Lung Transplant. 38 (5), 493-503 (2019).</li>
<li>Lama, V. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Models+of+lung+transplant+research%3A+A+consensus+statement+from+the+National+Heart%2C+Lung%2C+and+Blood+Institute+workshop%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Models of lung transplant research: A consensus statement from the National Heart, Lung, and Blood Institute workshop.</a> JCI Insight. 2 (9), e93121(2017).</li>
<li>Martinu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spectrum+of+chronic+lung+allograft+pathology+in+a+mouse+minor-mismatched+orthotopic+lung+transplant+model%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Spectrum of chronic lung allograft pathology in a mouse minor-mismatched orthotopic lung transplant model.</a> Am J Transplant. 19 (1), 247-258 (2019).</li>
<li>de Vleeschauwer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+rejection+pathology+after+orthotopic+lung+transplantation+in+mice%3A+The+development+of+a+murine+BOS+model+and+its+drawbacks%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Chronic rejection pathology after orthotopic lung transplantation in mice: The development of a murine BOS model and its drawbacks.</a> PLoS One. 7 (1), e29802(2012).</li>
<li>Yamada, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+airway+fibrosis+in+orthotopic+mouse+lung+transplantation+models-An+experimental+reappraisal%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Chronic airway fibrosis in orthotopic mouse lung transplantation models-An experimental reappraisal.</a> Transplantation. 102 (2), e49-e58 (2018).</li>
<li>Whittaker, P., Kloner, R. A., Boughner, D. R., Pickering, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+assessment+of+myocardial+collagen+with+picrosirius+red+staining+and+circularly+polarized+light%5BTitle%5D)+AND+%22Basic+Res+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Quantitative assessment of myocardial collagen with picrosirius red staining and circularly polarized light.</a> Basic Res Cardiol. 89 (5), 397-410 (1994).</li>
<li>Puchtler, H., Waldrop, F. S., Valentine, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polarization+microscopic+studies+of+connective+tissue+stained+with+picro-sirius+red+FBA%5BTitle%5D)+AND+%22Beitr+Pathol%22%5BJournal%5D)">Polarization microscopic studies of connective tissue stained with picro-sirius red FBA.</a> Beitr Pathol. 150 (2), 174-187 (1973).</li>
<li>Junqueira, L. C. U., Cossermelli, W., Brentani, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+staining+of+collagens+type+I%2C+II+and+III+by+Sirius+Red+and+polarization+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Histol+Jpn%22%5BJournal%5D)">Differential staining of collagens type I, II and III by Sirius Red and polarization microscopy.</a> Arch Histol Jpn. 41 (3), 267-274 (1978).</li>
<li>Davenport, M. L., Sherrill, T. P., Blackwell, T. S., Edmonds, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfusion+and+inflation+of+the+mouse+lung+for+tumor+histology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Perfusion and inflation of the mouse lung for tumor histology.</a> J Vis Exp. (162), e60605(2020).</li>
<li>Limjunyawong, N., Mock, J., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Instillation+and+fixation+methods+useful+in+mouse+lung+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Instillation and fixation methods useful in mouse lung cancer research.</a> J Vis Exp. (102), e52964(2015).</li>
<li>Segnani, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histochemical+detection+of+collagen+fibers+by+Sirius+Red%2FFast+Green+is+more+sensitive+than+van+Gieson+or+Sirius+Red+alone+in+normal+and+inflamed+rat+colon%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Histochemical detection of collagen fibers by Sirius Red/Fast Green is more sensitive than van Gieson or Sirius Red alone in normal and inflamed rat colon.</a> PLoS One. 10 (12), e0144630(2015).</li>
<li>Courtoy, G. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Digital+image+analysis+of+Picrosirius+Red+staining%3A+A+robust+method+for+multi-organ+fibrosis+quantification+and+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22Biomolecules%22%5BJournal%5D)">Digital image analysis of Picrosirius Red staining: A robust method for multi-organ fibrosis quantification and characterization.</a> Biomolecules. 10 (11), 1585(2020).</li>
<li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fiji%3A+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nat Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li>
<li>Ségard, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+fibrosis+extend+and+airspace+availability+in+lung%3A+A+semi-automativ+ImageJ%2FFiji+toolbox%5BTitle%5D)+AND+%22PloS%22%5BJournal%5D)">Quantification of fibrosis extend and airspace availability in lung: A semi-automativ ImageJ/Fiji toolbox.</a> PloS. 2 (2), e0298015(2024).</li>
<li>Zhou, X., Moore, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+section+staining+and+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Protoc%22%5BJournal%5D)">Lung section staining and microscopy.</a> Bio Protoc. 7 (10), e2286(2017).</li>
<li>Herovici, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Picropolychrome%3A+histological+staining+technic+intended+for+the+study+of+normal+and+pathological+connective+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Rev+Fr+Etud+Clin+Biol%22%5BJournal%5D)">Picropolychrome: histological staining technic intended for the study of normal and pathological connective tissue.</a> Rev Fr Etud Clin Biol. 8, 88-89 (1963).</li>
<li>Sweat, F., Puchtler, H., Rosenthal, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sirius+Red+F3BA+as+a+stain+for+connective+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Pathol%22%5BJournal%5D)">Sirius Red F3BA as a stain for connective tissue.</a> Arch Pathol. 78, 69-72 (1964).</li>
<li>Cardiff, R. D., Miller, C. H., Munn, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manual+hematoxylin+and+eosin+staining+of+mouse+tissue+sections%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">Manual hematoxylin and eosin staining of mouse tissue sections.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2014 (6), 655-658 (2014).</li>
<li>Montes, G. S., Junqueira, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+the+Picrosirius-polarization+method+for+the+study+of+the+biopathology+of+collagen%5BTitle%5D)+AND+%22Mem+Inst+Oswaldo+Cruz%22%5BJournal%5D)">The use of the Picrosirius-polarization method for the study of the biopathology of collagen.</a> Mem Inst Oswaldo Cruz. 86, Suppl 3 1-11 (1991).</li>
<li>Rittié, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+for+Picrosirius+Red-polarization+detection+of+collagen+fibers+in+tissue+sections%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Method for Picrosirius Red-polarization detection of collagen fibers in tissue sections.</a> Methods Mol Biol. 1627, 395-407 (2017).</li>
<li>Diehm, Y. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell-enriched+hybrid+breast+reconstruction+reduces+risk+for+capsular+contracture+in+a+hybrid+breast+model%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">Stem cell-enriched hybrid breast reconstruction reduces risk for capsular contracture in a hybrid breast model.</a> Plast Reconstr Surg. 152 (3), 572-580 (2023).</li>
<li>Rich, L., Whittaker, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagen+and+Picrosirius+Red+staining%3A+A+polarized+light+assessment+of+fibrillar+hue+and+spatial+distribution%5BTitle%5D)+AND+%22Braz+J+Morphol+Sci%22%5BJournal%5D)">Collagen and Picrosirius Red staining: A polarized light assessment of fibrillar hue and spatial distribution.</a> Braz J Morphol Sci. 22 (2), 97-104 (2005).</li>
<li>Datar, U. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinicopathologic+study+of+a+series+of+giant+cell+fibroma+using+picrosirius+red+polarizing+microscopy+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Iran+Med%22%5BJournal%5D)">Clinicopathologic study of a series of giant cell fibroma using picrosirius red polarizing microscopy technique.</a> Arch Iran Med. 17 (11), 746-749 (2014).</li>
<li>Nishat, R., Kumar, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagen+fibers+in+oral+submucous+fibrosis+-+A+polarizing+microscopy+study+using+two+special+stains%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+J+Pathol+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Collagen fibers in oral submucous fibrosis - A polarizing microscopy study using two special stains.</a> Indian J Pathol Microbiol. 62 (4), 537-543 (2019).</li>
<li>Lattouf, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Picrosirius+red+staining%3A+a+useful+tool+to+appraise+collagen+networks+in+normal+and+pathological+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">Picrosirius red staining: a useful tool to appraise collagen networks in normal and pathological tissues.</a> J Histochem Cytochem. 62 (10), 751-758 (2014).</li>
<li>López De Padilla, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Picrosirius+Red+staining%3A+Revisiting+its+application+to+the+qualitative+and+quantitative+assessment+of+collagen+type+I+and+type+III+in+tendon%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">Picrosirius Red staining: Revisiting its application to the qualitative and quantitative assessment of collagen type I and type III in tendon.</a> J Histochem Cytochem. 69 (10), 633-643 (2021).</li>
<li>Junqueira, L. C. U., Bignolas, G., Brentani, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Picrosirius+staining+plus+polarization+microscopy%2C+a+specific+method+for+collagen+detection+in+tissue+sections%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem+J%22%5BJournal%5D)">Picrosirius staining plus polarization microscopy, a specific method for collagen detection in tissue sections.</a> Histochem J. 11 (4), 447-455 (1979).</li>
<li>Zheng, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scar+collagen+deposition+in+the+airways+of+allografts+of+lung+transplant+recipients%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Scar collagen deposition in the airways of allografts of lung transplant recipients.</a> Am J Respir Crit Care Med. 155 (6), 2072-2077 (1997).</li>
<li>Astbury, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reliable+computational+quantification+of+liver+fibrosis+is+compromised+by+inherent+staining+variation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol+Clin+Res%22%5BJournal%5D)">Reliable computational quantification of liver fibrosis is compromised by inherent staining variation.</a> J Pathol Clin Res. 7 (5), 471-481 (2021).</li>
<li>Feingold, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diffuse+myocardial+fibrosis+among+healthy+pediatric+heart+transplant+recipients%3A+Correlation+of+histology%2C+cardiovascular+magnetic+resonance%2C+and+clinical+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Transplant%22%5BJournal%5D)">Diffuse myocardial fibrosis among healthy pediatric heart transplant recipients: Correlation of histology, cardiovascular magnetic resonance, and clinical phenotype.</a> Pediatr Transplant. 21 (5), 12986(2017).</li>
<li>vander Ploeg, E. A., Melgert, B. N., Burgess, J. K., Gan, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+potential+of+biomarkers+of+fibrosis+in+chronic+lung+allograft+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Rev+%28Orlando%29%22%5BJournal%5D)">The potential of biomarkers of fibrosis in chronic lung allograft dysfunction.</a> Transplant Rev (Orlando). 35 (3), 100626(2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Ácido acético</td><td>Honeywell, Charlotte, EE. UU.</td><td>33209</td><td></td></tr><tr><td>Axio Observer</td><td>Zeiss, Oberkochen, Alemania</td><td>4633000956 (número de serie)</td><td></td></tr><tr><td>Coverslip 1.5</td><td>Roth, Karlsruhe, Alemania</td><td>KCY5.1</td><td></td></tr><tr><td>Formaldehído 37%</td><td>Fisher Scientific, Leicestershire, Reino Unido</td><td>F/1501/PB15</td><td></td></tr><tr><td>Solución de hemalum de Meyer</td><td>Merck, Darmstadt, Alemania</td><td>109249</td><td></td></tr><tr><td>Picrosirius Red Solution</td><td>Morphisto, Offenbach am Main, Alemania</td><td>13422</td><td>alternativas que se pueden utilizar: ab150681, abcam, Cambridge, Reino Unido; SRS250 ScyTek Laboratories, Logan City, EE. UU.</td></tr><tr><td>Filtro polarizador</td><td>Zeiss, Oberkochen, Alemania</td><td>000000-1121-813</td><td></td></tr><tr><td>Microtomo rotativo, HistoCore AUTOCUT</td><td>Leica, Wetzlar, Alemania</td><td>149AUTO00C1, 14051956472</td><td></td></tr><tr><td>ROTI Medio de montaje Histokitt</td><td>Roth, Karlsruhe, Alemania</td><td>6638.1</td><td></td></tr><tr><td>ROTI Plast Paraaffin</td><td>Roth, Karlsruhe, Alemania</td><td>6642.5</td><td></td></tr><tr><td>Casetes de Rotilabo, POM</td><td>Roth, Karlsruhe, Alemania</td><td>K113.1</td><td></td></tr><tr><td>Superfrost Plus Portaobjetos de microscopio de adhesión</td><td>epredia, Portsmouth, Reino Unido</td><td>J1800AMNZ</td><td></td></tr><tr><td>Procesador de tejidos&nbsp;</td><td>Leica, Wetzlar, Alemania</td><td>TP 1020</td><td></td></tr><tr><td>Software</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fiji versión de software 2.14.0/1.54f</td> Software de imagen <td>de código</td><td></td><td></td>abierto</tr><tr><td>ZEN 3.4.91</td><td>Zeiss, Oberkochen, Alemania</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

tinción con rojo de picrosirius para la evaluación histopatológica semicuantitativa del depósito de colágeno en modelos murinos de rechazo crónico del aloinjerto pulmonar

Picrosirius Red Staining for Semiquantitative Histopathologic Evaluation of Collagen Deposition in Murine Models of Chronic Lung Allograft Rejection

El protocolo descrito anteriormente permite una evaluación semicuantitativa objetiva de la deposición de colágeno en el tejido pulmonar murino. El remodelado fibrótico es el sello fisiopatológico del rechazo crónico después del trasplante de pulmón. Por lo tanto, la tinción con rojo de Picrosirius se aplicó en modelos de rechazo de aloinjerto pulmonar crónico mediante trasplante de pulmón ortotópico murino izquierdo. El trasplante pulmonar incompatible con MHC importante de un donante BALB/c a un receptor C57BL/6 bajo in...

Tinción con rojo de Picrosirius para la evaluación histopatológica semicuantitativa del depósito de colágeno en modelos murinos de rechazo crónico del aloinjerto pulmonar

Fibrosis is the pathophysiologic hallmark of chronic rejection after lung transplantation and the foremost hurdle to long-term recipient survival. Several ...

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Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Este video describe la tinción roja picrosirius de tejidos fibróticos para detectar la deposición excesiva de colágeno en secciones de tejido fibrótico. La técnica de tinción ayuda a evaluar la expresión de colágeno en enfermedades del tejido conectivo.

Tinción de polarización roja de Picrosirius: una técnica para detectar fibrosis en secciones de tejido cardíaco mediante microscopía de campo claro

Aquí, presentamos un protocolo para estudiar la inmunología del rechazo. El modelo quirúrgico presentado reporta un tiempo quirúrgico corto y una técnica concisa. Dependiendo de la combinación de cepa donante-receptor, el riñón trasplantado puede desarrollar rechazo celular agudo o daño crónico del injerto, definido por fibrosis intersticial y atrofia tubular.

Ratón Trasplante de Riñón: Modelos de rechazo del aloinjerto

Streptococcus pneumoniae forma lesiones microscópicas discretas no purulentas en el corazón. Se describe el protocolo para un modelo murino de formación de microlesiones cardíacas. Se proporciona instrucción sobre la visualización de microlesiones mediante microscopía, la discriminación entre microlesiones tempranas y tardías, y los métodos para detectar la remodelación cardíaca en el corazón de los animales convalecientes.

Visualización de<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Dentro cardíacos microlesiones y la remodelación cardiaca posterior

El objetivo de este estudio fue desarrollar un modelo murino de cicatrización de la quemadura. Se indujo una quemadura térmica en la piel dorsal de los ratones utilizando una plantilla de latón precalentada. El tejido quemado fue desbridado y superpuesto con un injerto de piel cosechado de la cola de un ratón donante genéticamente similar.

Un modelo murino de una herida de quemadura reconstruida con un injerto de piel alogénico

Este protocolo describe un método para establecer un modelo de ratón de silicosis a través de la exposición repetida a suspensiones de sílice a través de un goteo nasal. Este modelo puede imitar de manera eficiente, conveniente y flexible el proceso patológico de la silicosis humana con alta repetibilidad y economía.

Un modelo de ratón de silicosis establecido por inhalación repetida de polvo de sílice cristalina

Establecimos un modelo de ratón de fibrosis hepática crónica, que proporciona un modelo animal adecuado para el estudio mecanicista de fibrosis hepática inducida por virus de la atresia biliar (BA) y una plataforma para futuros tratamientos de BA.

Un modelo de ratón de fibrosis hepática crónica para el estudio de la atresia biliar

Aquí, presentamos un protocolo para obtener imágenes intravitales del pulmón izquierdo del ratón trasplantado utilizando microscopía de dos fotones. Esto representa una herramienta valiosa para estudiar la dinámica celular y las interacciones en tiempo real después del trasplante de pulmón murino.

Microscopía intravital de dos fotones del pulmón de ratón trasplantado

Modelo murino de enfermedad hepática esteatótica asociada a disfunción metabólica (MASLD) con disfunción metabólica, cambios en la expresión génica hepática y alteraciones histopatológicas hepáticas que se asemejan a la MASLD humana, incluida la fibrosis que progresa a la fase 3 de fibrosis avanzada. Este modelo se puede utilizar en estudios de fisiopatología de MASLD y en estudios preclínicos de nuevas terapias.

Modelo murino de enfermedad hepática esteatótica asociada a disfunción metabólica con fibrosis

Este protocolo describe un método para inducir fibrosis pulmonar en ratones a través de la administración orofaríngea repetida de bleomicina, produciendo características patológicas muy parecidas a las de la fibrosis pulmonar idiopática.

Modelo murino refinado de fibrosis pulmonar idiopática

Antes de intentar la cirugía, un nuevo cirujano debería tener una formación básica en las técnicas quirúrgicas y los conceptos. Este artículo presenta consideraciones básicas quirúrgica con énfasis en los roedores.

Principios de la cirugía de roedores para el cirujano de Nueva

Aprenda a evaluar semicuantitativamente el depósito de colágeno en modelos murinos de rechazo pulmonar crónico mediante tinción con rojo de Picrosirius. Este método diferencia fibras gruesas y delgadas para caracterizar la fibrosis del injerto.

Tinción con rojo de Picrosirius para la evaluación histopatológica semicuantitativa del depósito de colágeno en modelos murinos de rechazo crónico del aloinjerto pulmonar (Video) | JoVE Journal

Tinción con rojo de Picrosirius para la evaluación histopatológica semicuantitativa del depósito de colágeno en modelos murinos de rechazo crónico del aloinjerto pulmonar

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