Modelos de heridas de ratón y preparación de suspensiones unicelulares

Nuestra investigación se centró principalmente en el impacto de los cordones umbilicales de los vehículos extracelulares derivados de MSC en la cicatrización de heridas a nivel de una sola célula. Y el objetivo principal de esta parte del estudio es establecer un modelo de masa de lesión estable, aguda y de espesor completo, que es una base crucial para nuestros experimentos. El proceso de cicatrización de heridas es extremadamente complejo, ya que implica la interacción sincronizada de varias células en el tiempo y el espacio.

La secuenciación de células individuales se ha convertido en el último método para estudiar el ingenio celular y predecir la diferenciación celular y las trayectorias de desarrollo durante la curación ósea. Y la obtención de la suspensión unicelular de alta calidad a partir de tejidos distorsionados es la clave de esta investigación. Nuestro protocolo crea un modelo de ratones más estable y de espesor completo en ratones lesionados, evitando el ciclo del cabello y los problemas de tensión lateral, y evita que el rascado del ratón y la actividad natural afecten los resultados.

Y, además, utilizamos las enzimas mezcladas para una disociación eficiente de los tejidos, lo que produce suspensiones unicelulares de alta calidad. Para empezar, asigne aleatoriamente ratones a grupos de control y experimentales y alójelos en una instalación animal específica libre de patógenos. Proporcione a los ratones acceso sin restricciones a alimentos estándar y agua del grifo del autoclave.

Asegure suavemente el ratón en posición prona y limpie el abdomen con bastoncillos de algodón con alcohol. Después de anestesiar al ratón, aplique crema depilatoria en la espalda y espere dos minutos. Limpie suavemente la crema con una gasa húmeda para evitar dañar la piel.

A continuación, limpie la piel con una gasa estéril seca. Coloque el punzón de biopsia de piel en autoclave, las tijeras, las pinzas y el paño quirúrgico nuevo en una plataforma estéril. Coloque el ratón anestesiado en posición prona y desinfecte la piel dorsal con tres hisopos alternos de Betadine y alcohol al 70%.

Sumerge el sello en tinta y haz una marca en la parte central superior de la parte posterior del ratón. Con unas tijeras quirúrgicas, extirpe cuidadosamente toda la capa de piel de la espalda a lo largo de la marca circular, exponiendo la capa muscular por completo. Deje la herida abierta sin apósito, permitiendo que se forme una costra de forma natural.

Administrar 0,1 mililitros de clorhidrato de buprenorfina al 10% por vía subcutánea cerca de la herida. Vuelva a colocar el ratón en su jaula individual en posición prona. Después de la anestesia, observe y fotografíe la herida del ratón cada dos días para medir el tamaño de la herida.

Por vía subcutánea, inyecte 100 microgramos de exosoma derivado de células madre mesenquimales del cordón umbilical humano alrededor del sitio de la incisión de un ratón anestesiado del grupo de tratamiento. Inyecte 200 microlitros de PBS alrededor del sitio de la incisión del ratón del grupo de control. La colocación de heridas en ambos lados de un ratón dio como resultado diferencias notables en el área de la herida debido a la elasticidad de la piel del ratón.

El grupo de tratamiento con exosomas derivados de células madre mesenquimales del cordón umbilical humano mostró una curación más rápida en comparación con el grupo de control. La cicatrización completa se produjo más rápidamente en el modelo de sello que en el grupo de anillos metálicos suturados.