Name: Separación rápida y visualización de agentes fibrinogenolíticos activos en Sipunculus nudus mediante electroforesis en gel de fibrinógeno-poliacrilamida (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-19T13:50:00.000+00:00
Duration: 4 min 36 s
Description: Aprende a separar y visualizar agentes fibrinogenolíticos activos en Sipunculus nudus mediante electroforesis en gel de fibrinógeno-poliacrilamida. Este método simplificado acelera el desarrollo de fármacos trombolíticos.

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<meta charset="utf8"></head><body>Presentación de agentes fibrinogenolíticos en gusanos de maní con fibrinógeno-PAGE

<ol><li>Bikdeli, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((COVID-19+and+thrombotic+or+thromboembolic+disease%3A+Implications+for+prevention%2C+antithrombotic+therapy%2C+and+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">COVID-19 and thrombotic or thromboembolic disease: Implications for prevention, antithrombotic therapy, and follow-up.</a> J Am Coll Cardiol. 75 (23), 2950-2973 (2020).</li>
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<li>Abu-Tahon, M. A., Abdel-Majeed, A. M., Ghareib, M., Housseiny, M. M., Abdallah, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombolytic+and+anticoagulant+efficiencies+of+purified+fibrinolytic+enzyme+produced+from+Cochliobolus+hawaiiensis+under+solid-state+fermentation%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Appl+Biochem%22%5BJournal%5D)">Thrombolytic and anticoagulant efficiencies of purified fibrinolytic enzyme produced from Cochliobolus hawaiiensis under solid-state fermentation.</a> Biotechnol Appl Biochem. 70 (6), 1954-1971 (2023).</li>
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<li>Sharma, N., Sharma, R., Rajput, Y. S., Mann, B., Singh, R., Gandhi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Separation+methods+for+milk+proteins+on+polyacrylamide+gel+electrophoresis%3A+Critical+analysis+and+options+for+better+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22International+Dairy+Journal%22%5BJournal%5D)">Separation methods for milk proteins on polyacrylamide gel electrophoresis: Critical analysis and options for better resolution.</a> International Dairy Journal. 114, 104920(2021).</li>
<li>Xu, R., Ma, G., Chen, L., Cui, X. Preparation and application of natural fibrinolytic enzyme from peanut worm. , Available from: 
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</ol>

<table><tbody><tr><td>1&nbsp; M Tris-HCl (pH 6.8)</td><td>Solarbio</td><td>T1020</td><td></td></tr><tr><td>1.5 M Tris-HCl (pH 8.8)</td><td>Solarbio</td><td>T1010</td><td></td></tr><tr><td>30% Acrilamida/Bis-acrilamida</td><td>Biosharp</td><td>BL513B</td><td></td></tr><tr><td>Persulfato de amonio</td><td>XiLONG SCIENTIFIC</td><td>7727-54-0</td><td></td></tr><tr><td>Vaso de precipitados</td><td>PYREX</td><td>2-9425-02</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de centrífuga (1.5 mL)</td><td>Biosharp</td><td>BS-15-M</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora de temperatura constante</td><td>JINGHONG</td><td>JHS-400</td><td></td></tr><tr><td>Coomas Brillant Blue Solución de tinción</td><td>Beyotime</td><td>P0017F</td><td></td></tr><tr><td>Balanza analítica electrónica</td><td>DENVER</td><td>TP-213</td><td></td></tr><tr><td>Fibrinógeno</td><td>Solarbio</td><td>F8051</td><td></td></tr><tr><td>Puntas de pipeta de carga de gel, a granel</td><td>Biosharp</td><td>BS-200-GTB</td><td></td></tr><tr><td>Homogeneizador</td><td></td><td>AHS ATS-1500</td><td></td></tr><tr><td>Oscilador de rotación horizontal</td><td>NuoMi</td><td>NMSP-600</td><td></td></tr><tr><td>Milli-Q Referencia</td><td>Millipore</td><td>Z00QSV0CN</td><td></td></tr><tr><td>Mini-PROTEAN Tetra Cell</td><td>BIO-RAD</td><td>165-8000~165-8007</td><td></td></tr><tr><td>N,N,N',N'-Tetrametiletilendiamina</td><td>Sigma</td><td>T9281</td><td></td></tr><tr><td>Punta de pipeta (1 mL)</td><td>Punta</td> de pipeta <td>Axygene T-1000XT-C</td><td></td></tr><tr><td>(10 &micro; L)</td> Punta de pipeta <td>Axygene</td><td>T-10XT-C</td><td></td></tr><tr><td>(200 y micro; L)</td><td>Pipeta Axygene</td><td>T-200XT-C</td><td></td></tr><tr><td>(1 mL)</td><td>Pipeta Thermo Fisher Scientific</td><td>ZY18723</td><td></td></tr><tr><td>(10&micro; L)</td> <td>Pipeta Thermo Fisher Scientific</td><td>ZX98775</td><td></td></tr><tr><td>(200 y micro; L)</td> <td>Pipeta Thermo Fisher Scientific</td><td>ZY20280</td><td></td></tr><tr><td>(50 y micro; L)</td> <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>ZY15331</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga refrigerada</td><td>cence</td><td>H1650R</td><td></td></tr><tr><td>Dodecil sulfato de sodio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>V900859</td><td></td></tr><tr><td>Tris</td><td>Solarbio</td><td>T8060</td><td></td></tr><tr><td>Tris-HCl</td><td>Solarbio</td><td>T8230</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Solarbio</td><td>T8200</td><td></td></tr></tbody></table>

separación rápida y visualización de agentes fibrinogenolíticos activos en sipunculus nudus mediante electroforesis en gel de fibrinógeno-poliacrilamida

Rapid Separation and Display of Active Fibrinogenolytic Agents in Sipunculus nudus through Fibrinogen-Polyacrylamide Gel Electrophoresis

Después de la electroforesis, se mostraron claramente todas las bandas del marcador. Los carriles de carga 1x SDS-PAGE solo mostraron bandas de 10 kDa (azul de bromofenol). Las muestras de sFE y gusano del maní no mostraron ninguna banda observable (Figura 1). Aunque las bandas de las muestras no son visibles, el rendimiento del marcador y del azul de bromofenol indicó que la electroforesis fue exitosa y las muestras se separaron según su peso molecular.
Aunque todo el gel se volvió azul debido a la tinción, la decoloración hizo que el área donde el fibrinógeno fue degradado por los agentes fibrinogenolíticos fuera transparente. En comparación con el marcador, el sFE indicó una banda fibrinogenolítica activa cercana a 25 kDa. El homogeneizado del gusano del maní mostró 25 kDa, 33 kDa, 43 kDa y una serie de bandas mayores de 70 kDa (Figura 2). Los resultados indicaron que el sFE solo contenía un componente fibrinogenolítico de 25 kDa, pero el homogeneizado del gusano del maní contenía componentes de sFE y otros agentes fibrinogenolíticos. La Figura 1 complementaria es un ejemplo de una imagen en gel que muestra el marcador en azul profundo y las muestras objetivo como bandas brillantes.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66536/66536fig01.jpg"> Figura 1: Gel después de la electroforesis. M: Marcador; Carril 1: 1x búfer de carga SDS-PAGE; Carril 2: sFE; Carril 3: 1x búfer de carga SDS-PAGE; Carril 4: homogeneizado de gusanos de maní; Carril 5: 1x búfer de carga SDS-PAGE. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66536/66536fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66536/66536fig02.jpg"> Figura 2: Gel después de la decoloración. M: Marcador; Carril 1: 1x búfer de carga SDS-PAGE; Carril 2: sFE; Carril 3: 1x búfer de carga SDS-PAGE; Carril 4: homogeneizado de gusanos de maní; Carril 5: 1x búfer de carga SDS-PAGE. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66536/66536fig02large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
Figura complementaria 1: Imagen de gel que muestra el marcador en azul profundo y las muestras objetivo como bandas brillantes. M: Marcador; Carril 1: 1x búfer de carga SDS-PAGE; Carril 2: sFE; Carril 3: 1x búfer de carga SDS-PAGE; Carril 4: homogeneizado de gusanos de maní; Carril 5: 1x búfer de carga SDS-PAGE. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66536/Supplementary%20Figure%201.zip" target="_blank">Haga clic aquí para descargar este archivo.</a>

Separación rápida y visualización de agentes fibrinogenolíticos activos en Sipunculus nudus mediante electroforesis en gel de fibrinógeno-poliacrilamida

Fibrinogenolytic agents that can dissolve fibrinogen directly have been widely used in anti-coagulation treatment. Generally, identifying new ...

rapid-separation-display-active-fibrinogenolytic-agents-sipunculus

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Investigación

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Biochemistry

Bioquímica

Este video muestra el protocolo de un ensayo de angiogénesis in vitro que recapitula varias etapas de la angiogénesis. Time-lapse imágenes de germinación, la formación del lumen, ramas y anastomosis - las características clave de la angiogénesis - se muestran.

Optimizado de gel de fibrina bolas de ensayo para el Estudio de la angiogénesis

En este video, demostramos un método de electroforesis en gel bidimensional que separa proteínas individuales de una mezcla compleja de proteínas obtenidas de tejidos tumorales de adenoma hipofisario humano no funcional (NFPA). Las proteínas se separan en función de su carga eléctrica en la primera dimensión y se separan aún más en función de los pesos moleculares en la segunda dimensión.

Electroforesis bidimensional en gel de poliacrilamida: una técnica de separación para el análisis de proteínas en mezclas complejas de proteínas basada en la carga y el peso molecular

Este video demuestra el uso de un espectrofotómetro UV-visible para monitorear la formación de coágulos de fibrina insoluble en función del cambio en la turbidez de la solución. El espectrofotómetro UV-visible mide la absorbancia de la solución a lo largo del tiempo, lo que representa el cambio de turbidez debido a la formación de coágulos de fibrina insolubles.

Espectroscopía UV-visible para el seguimiento de la formación de coágulos de fibrina

El objetivo es fraccionar y aislar moléculas pequeñas bioactivas, péptidos de un extracto de planta complejo y proteínas de microbios patógenos mediante el empleo de un método de enfoque isoeléctrico de fase líquida (IEF). Además, se identificaron las moléculas separadas y se confirmó su bioactividad.

Separación de Moléculas Pequeñas Bioactivas, Péptidos de Fuentes Naturales y Proteínas de Microbios por Método de Enfoque Isoeléctrico Preparativo (IEF)

Este informe describe técnicas para aislar y purificar glicosaminoglicanos sulfatados (GAG) a partir de muestras biológicas y un enfoque de electroforesis en gel de poliacrilamida para aproximarse a su tamaño. Los GAG contribuyen a la estructura de los tejidos e influyen en los procesos de señalización a través de la interacción electrostática con las proteínas. La longitud del polímero GAG contribuye a su afinidad de unión por los ligandos cognados.

Detección de glicosaminoglicanos por electroforesis en gel de poliacrilamida y tinción de plata

Aquí, presentamos un método de purificación de afinidad de una enzima fibrinolítica de Sipunculus nudus que es simple, económico y eficiente.

Purificación por afinidad de una enzima fibrinolítica de Sipunculus nudus

El experimento utilizado aquí muestra un método de acoplamiento molecular combinado con un ensayo de desplazamiento térmico celular para predecir y validar la interacción entre moléculas pequeñas y proteínas objetivo.

Predicción y validación de dianas proteicas de compuestos de moléculas pequeñas

Las proteinasas son vitales para la patogénesis bacteriana, lo que permite la invasión y la evasión inmune. La extracción en un solo paso de proteínas citoplasmáticas y de membrana de bacterias en su forma activa es desgarradora. Este artículo en video demuestra la extracción de proteínas celulares completas de Leptospira para el análisis de zimografía para detectar y caracterizar gelatinasas.

Extracción y análisis zimográfico de gelatinasas bacterianas en un solo paso

Este trabajo describe un ensayo microfluídico que utiliza el esfuerzo cortante para desencadenar la formación de trombos en sangre y caracteriza el trombo mediante múltiples dimensiones de lectura. El ensayo puede medir la tendencia protrombótica de las muestras de sangre y, por tanto, es útil en el diagnóstico de enfermedades, el descubrimiento de fármacos, así como en estudios mecanicistas básicos relacionados con la trombosis.

Ensayo de Perfilado de Trombo: Una plataforma basada en microfluídica para caracterizar de forma exhaustiva la trombogénesis biomecánica

Este protocolo describe el Ensayo de Hemostasis de Nimega, que permite la medición simultánea y temporal de la generación de trombina y plasmina para proporcionar una evaluación integrada de la coagulación y la fibrinólisis. El ensayo tiene como objetivo mejorar la caracterización del equilibrio hemostático en entornos de investigación y clínicos más allá del alcance de las pruebas hemostáticas convencionales.

El ensayo de hemostasis de Nimega: medición simultánea fluorogénica de la generación de trombina y plasmina en un solo pozo

Aprende a separar y visualizar agentes fibrinogenolíticos activos en Sipunculus nudus mediante electroforesis en gel de fibrinógeno-poliacrilamida. Este método simplificado acelera el desarrollo de fármacos trombolíticos.

Separación rápida y visualización de agentes fibrinogenolíticos activos en Sipunculus nudus mediante electroforesis en gel de fibrinógeno-poliacrilamida (Video) | JoVE Journal

Separación rápida y visualización de agentes fibrinogenolíticos activos en Sipunculus nudus mediante electroforesis en gel de fibrinógeno-poliacrilamida

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