Real-Time In Vitro Migration Assay for Primary Murine CD8+ T Cells

Allison T. Ryan; Ankit Dahal; Sana Mir; Minsoo Kim; Kihong Lim

doi:10.3791/66580

Ensayo de migración in vitro en tiempo real para linfocitos T murinos CD8+ primarios

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Immunology and Infection

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Real-Time In Vitro Migration Assay for Primary Murine CD8+ T Cells

Ensayo de migración in vitro en tiempo real para linfocitos T murinos CD8+ primarios

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06:42 min

May 24, 2024

DOI: 10.3791/66580-v

Allison T. Ryan^1,2, Ankit Dahal^1,2, Sana Mir^1,2, Minsoo Kim^1,2, Kihong Lim^1,2

¹Department of Microbiology and Immunology,University of Rochester, ²David H. Smith Center for Vaccine Biology and Immunology,University of Rochester

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This protocol provides a method for isolating primary murine T cells and conducting time-lapse microscopy to study T cell migration under controlled environmental conditions. The approach enables quantitative analysis of T cell dynamics.

Key Study Components

Area of Science

Neuroscience
Immunology
Cell Biology

Background

Understanding T-cell migration patterns is crucial for in vitro experimentation.
Live imaging techniques like intravital multiphoton microscopy provide insights into immune cell kinetics.
Microfluidic devices allow for precise control over the microenvironment.
The protocol aims to analyze signaling pathways relevant to T cell migration.

Purpose of Study

To enable informed in vitro experimentation regarding T cell behavior.
To decipher molecular interactions that impact T cell migration.
To provide a reliable method for studying dynamic cell migration events.

Methods Used

Isolation of primary murine T cells.
Time-lapse microscopy for observing T cell migration.
Use of microfluidic devices to control environmental conditions.
Quantitative analysis of T cell dynamics.

Main Results

The method is simple and reproducible.
It allows for detailed analysis of T cell signaling pathways.
Provides insights into the biological roles of individual signals.
Ensures accessibility for research labs with basic microscopy equipment.

Conclusions

The protocol enhances understanding of T cell migration.
It supports targeted in vitro experiments.
The approach is reliable and easy to implement in research settings.

Frequently Asked Questions

What is the main focus of this study?

The study focuses on T-cell migration patterns under controlled environmental conditions.

How does this protocol improve T cell research?

It provides a reliable method for analyzing T cell dynamics and signaling pathways.

What equipment is needed for this protocol?

A bright field microscope with an attached digital camera is required.

Can this method be used in various research labs?

Yes, it is designed to be accessible for most research laboratories.

What are the benefits of using microfluidic devices?

They offer precise control over the microenvironment for T cell studies.

Is this protocol reproducible?

Yes, the method is simple and reproducible across different labs.

Este protocolo proporciona un método de aislamiento primario de células T murinas y microscopía de lapso de tiempo de la migración de células T en condiciones ambientales específicas con análisis cuantitativo.

El objetivo de nuestra investigación es comprender los patrones de migración de las células T en condiciones ambientales altamente definidas para permitir la experimentación in vitro informada y descifrar las interacciones moleculares que afectan la migración. Las imágenes en vivo, como la microscopía multifotónica intravital, se utilizan para la comprensión in vivo de la cinética de las células inmunitarias. Pero los dispositivos microfluídicos son una herramienta in vitro común que ofrece un control preciso sobre el microambiente que no se puede permitir en un espécimen vivo.

Nuestro protocolo nos permite analizar intrincadas vías de señalización y proporciona una mejor comprensión de los experimentos in vitro dirigidos para abordar aún más las funciones biológicas de las señales individuales de una manera específica para el tipo de célula. Nuestro método es simple, reproducible y de fácil acceso en laboratorios de investigación que tienen un microscopio de campo claro con una cámara digital conectada. Por lo tanto, nuestro enfoque garantiza un conjunto confiable de métodos para estudiar los eventos dinámicos de migración celular.

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