Name: Preparación de muestras de organoides de retina para microscopía electrónica de transmisión (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-06-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 43 s
Description: Aprende a preparar organoides de retina para microscopía electrónica de transmisión. Este protocolo optimizado permite analizar la ultraestructura sináptica a nivel nanométrico con pasos reproducibles y accesibles.

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<meta charset="utf8"></head><body>Protocolo optimizado para la preparación de muestras de organoides de retina para TEM

<ol><li>Andreazzoli, M., Barravecchia, I., De Cesari, C., Angeloni, D., Demontis, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inducible+pluripotent+stem+cells+to+model+and+treat+inherited+degenerative+diseases+of+the+outer+retina%3A+3d-organoids+limitations+and+bioengineering+solutions%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Inducible pluripotent stem cells to model and treat inherited degenerative diseases of the outer retina: 3d-organoids limitations and bioengineering solutions.</a> Cells. 10 (9), 2489(2021).</li>
<li>Moser, T., Grabner, C. P., Schmitz, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensory+processing+at+ribbon+synapses+in+the+retina+and+the+cochlea%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Sensory processing at ribbon synapses in the retina and the cochlea.</a> Physiol Rev. 100 (1), 103-144 (2020).</li>
<li>Tom Dieck, S., Brandstätter, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ribbon+synapses+of+the+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Ribbon synapses of the retina.</a> Cell Tissue Res. 326 (2), 339-346 (2006).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Webvision%3A+The+organization+of+the+retina+and+visual%22">Webvision: The organization of the retina and visual</a>. Kolb, H., Fernandez, E., Nelson, R. , University of Utah Health Sciences Center, Webvision. Salt Lake City (UT). (1995).</li>
<li>Soto, F., Zhao, L., Kerschensteiner, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synapse+maintenance+and+restoration+in+the+retina+by+ngl2%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Synapse maintenance and restoration in the retina by ngl2.</a> Elife. 7, e30388(2018).</li>
<li>Kruczek, K., Swaroop, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pluripotent+stem+cell-derived+retinal+organoids+for+disease+modeling+and+development+of+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Pluripotent stem cell-derived retinal organoids for disease modeling and development of therapies.</a> Stem Cells. 38 (10), 1206-1215 (2020).</li>
<li>O'Hara-Wright, M., Gonzalez-Cordero, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+organoids%3A+A+window+into+human+retinal+development%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Retinal organoids: A window into human retinal development.</a> Development. 147 (24), dev189746 (2020).</li>
<li>Norrie, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinoblastoma+from+human+stem+cell-derived+retinal+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Retinoblastoma from human stem cell-derived retinal organoids.</a> Nat Commun. 12 (1), 4535(2021).</li>
<li>Luni, C., Serena, E., Elvassore, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human-on-chip+for+therapy+development+and+fundamental+science%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Human-on-chip for therapy development and fundamental science.</a> Curr Opin Biotechnol. 25, 45-50 (2014).</li>
<li>Chahine Karam, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+ipsc-derived+retinal+organoids+and+retinal+pigment+epithelium+for+novel+intronic+rpgr+variant+assessment+for+therapy+suitability%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pers+Med%22%5BJournal%5D)">Human ipsc-derived retinal organoids and retinal pigment epithelium for novel intronic rpgr variant assessment for therapy suitability.</a> J Pers Med. 12 (3), 502(2022).</li>
<li>Lo, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+strategies+for+glaucoma+and+optic+neuropathies%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Aspects+Med%22%5BJournal%5D)">Therapeutic strategies for glaucoma and optic neuropathies.</a> Mol Aspects Med. 94, 101219(2023).</li>
<li>Capowski, E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reproducibility+and+staging+of+3d+human+retinal+organoids+across+multiple+pluripotent+stem+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Reproducibility and staging of 3d human retinal organoids across multiple pluripotent stem cell lines.</a> Development. 146 (1), 171686(2019).</li>
<li>Cowan, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+types+of+the+human+retina+and+its+organoids+at+single-cell+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Cell types of the human retina and its organoids at single-cell resolution.</a> Cell. 182 (6), e1634 1623-1640 (2020).</li>
<li>Cora, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cleared+view+on+retinal+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">A cleared view on retinal organoids.</a> Cells. 8 (5), 391(2019).</li>
<li>Żak, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Light-induced+in+situ+transmission+electron+microscopy%E2%94%80development%2C+challenges%2C+and+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Lett%22%5BJournal%5D)">Light-induced in situ transmission electron microscopy─development, challenges, and perspectives.</a> Nano Lett. 22 (23), 9219-9226 (2022).</li>
<li>Tschulakow, A. V., Oltrup, T., Bende, T., Schmelzle, S., Schraermeyer, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+anatomy+of+the+foveola+reinvestigated%5BTitle%5D)+AND+%22PeerJ%22%5BJournal%5D)">The anatomy of the foveola reinvestigated.</a> PeerJ. 6, e4482(2018).</li>
<li>Syrbe, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((M%C3%BCller+glial+cells+of+the+primate+foveola%3A+An+electron+microscopical+study%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Müller glial cells of the primate foveola: An electron microscopical study.</a> Exp Eye Res. 167, 110-117 (2018).</li>
<li>Xiao, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rod+bipolar+cells+receive+cone+photoreceptor+inputs+through+both+invaginating+synapses+and+flat+contacts+in+the+mouse+and+guinea+pig+retinas%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Rod bipolar cells receive cone photoreceptor inputs through both invaginating synapses and flat contacts in the mouse and guinea pig retinas.</a> J Comp Neurol. 531 (11), 1184-1197 (2023).</li>
<li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+degeneration+in+rpgra+mutant+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Retinal degeneration in rpgra mutant zebrafish.</a> Front Cell Dev Biol. 11, 1169941(2023).</li>
<li>Yang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+%CE%B1-synuclein+in+the+mouse+retina+is+confined+to+inhibitory+presynaptic+elements%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Expression of α-synuclein in the mouse retina is confined to inhibitory presynaptic elements.</a> J Comp Neurol. 531 (10), 1057-1079 (2023).</li>
<li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+degeneration+of+photoreceptor+synapse+in+ccl2%2Fcx3cr1-deficient+mice+on+crb1%28rd8%29+background%5BTitle%5D)+AND+%22Synapse%22%5BJournal%5D)">Early degeneration of photoreceptor synapse in ccl2/cx3cr1-deficient mice on crb1(rd8) background.</a> Synapse. 67 (8), 515-531 (2013).</li>
<li>De Robertis, E., Franchi, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electron+microscope+observations+on+synaptic+vesicles+in+synapses+of+the+retinal+rods+and+cones%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biophys+Biochem+Cytol%22%5BJournal%5D)">Electron microscope observations on synaptic vesicles in synapses of the retinal rods and cones.</a> J Biophys Biochem Cytol. 2 (3), 307-318 (1956).</li>
<li>Frey, T. G., Mannella, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+internal+structure+of+mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Biochem+Sci%22%5BJournal%5D)">The internal structure of mitochondria.</a> Trends Biochem Sci. 25 (7), 319-324 (2000).</li>
<li>Gonzalez-Cordero, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recapitulation+of+human+retinal+development+from+human+pluripotent+stem+cells+generates+transplantable+populations+of+cone+photoreceptors%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Recapitulation of human retinal development from human pluripotent stem cells generates transplantable populations of cone photoreceptors.</a> Stem Cell Reports. 9 (3), 820-837 (2017).</li>
<li>Gao, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-specific+retinal+organoids+recapitulate+disease+features+of+late-onset+retinitis+pigmentosa%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Patient-specific retinal organoids recapitulate disease features of late-onset retinitis pigmentosa.</a> Front Cell Dev Biol. 8, 128(2020).</li>
<li>Afanasyeva, T. aV., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+look+into+retinal+organoids%3A+Methods%2C+analytical+techniques%2C+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">A look into retinal organoids: Methods, analytical techniques, and applications.</a> Cell Mol Life Sci. 78 (19-20), 6505-6532 (2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Placa de Petri de 100 mm</td><td>Corning</td><td>430167</td><td></td></tr><tr><td>Acetona</td><td>Microscopía Electrónica Ciencia</td><td>10000</td><td></td></tr><tr><td>B27 suplemento</td><td>Gibco</td><td>A3582801</td><td></td></tr><tr><td>Elevador de celdas</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-395251</td><td></td></tr><tr><td>Rejillas de cobre</td><td>Beijing Zhongjingkeyi Technology Co., Ltd.</td><td></td><td></td>AZH400HH</tr><tr><td>Software de Micrografía Digital</td><td>Gatan, Inc.</td><td></td><td>Software</td></tr><tr><td>Dispasa</td><td>StemCell Technologies</td><td>#07913</td><td>Proteasa bacteriana</td></tr><tr><td>DMEM/F12 medio</td><td>Gibco</td><td>#11320033</td><td></td></tr><tr><td>Molde de incrustación</td><td>Beijing Zhongjingkeyi Technology Co., Ltd.</td><td></td><td></td>GZ10592</tr><tr>Ciencia de <td>microscopía electrónica</td> <td>de resina Epon-812</td>#<td>14900</td><td></td></tr><tr><td>Suero fetal bovino (FBS)</td><td>Industrias biológicas</td><td>#04-0021A</td><td></td></tr><tr><td>Ciencia de microscopía electrónica</td><td>de glutaraldehído</td><td>16020</td><td></td></tr><tr><td>hiPSC</td><td>Shownin Biotechnology Co. Ltd.</td><td>RC01001-A</td><td></td></tr><tr><td>Citrato de plomo</td><td>Beijing Zhongjingkeyi Technology Co., Ltd.</td><td></td><td></td>GZ02618</tr><tr><td>L-GlutaMax</td><td>Life Technologies</td><td>#35050061</td><td>Sustituto de la L-glutamina</td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>356234</td><td></td></tr><tr><td>portaobjetos de microscopio</td><td>CITOTEST</td><td>80312-3161</td><td></td></tr><tr><td>N2 suplemento</td><td>Gibco</td><td>17502048</td><td></td></tr><tr><td>Na2HPO4&middot; 12H2O</td><td>Sigma</td><td>71650</td><td>Un componente de PB/PBS</td></tr><tr><td>NaH2PO4&middot; H2O</td><td>Sigma</td><td>71507</td><td>Un componente de PB/PBS</td></tr><tr><td>Aminoácidos no esenciales</td><td>Sigma</td><td>#M7145</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio óptico Microscopio</td><td>biológico binocular de laboratorio</td><td>Xsz-107bnii</td><td></td></tr><tr><td>OsO4</td><td>TED PELLA</td><td>4008-160501</td><td></td></tr><tr><td>Horno</td><td>Bluepard</td><td>BPG9040A</td><td></td></tr><tr><td>Microscopía electrónica de paraformaldehído</td><td>Ciencia</td><td>157-8</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina-estreptomicina</td><td>Gibco</td><td>#15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Microtomo semi/ultrafino</td><td>Reichert-Jung</td><td>396649</td><td></td></tr><tr><td>Taurina</td><td>Sigma</td><td>#T0625</td><td></td></tr><tr><td>azul de toluidina</td><td>Microscopios</td> electrónicos de transmisión Sangon Biotech <td>E670105-0100</td><td></td></tr><tr><td></td><td>HITACHI</td><td>H-7500</td><td></td></tr><tr><td>Acetato de uranilo</td><td>TED PELLA</td><td>CA96049</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-mercaptoetanol</td><td>Sigma</td><td>444203</td><td></td></tr></tbody></table>

preparación de muestras de organoides de retina para microscopía electrónica de transmisión

Preparing Retinal Organoid Samples for Transmission Electron Microscopy

El establecimiento de RO 3D a través de la diferenciación de iPSC proporciona una poderosa herramienta para estudiar los mecanismos de la enfermedad de la retina y la terapia de reemplazo con células madre. Aunque otros han demostrado las conexiones sinápticas en las RO funcional e inmunocitoquímicamente, la evidencia directa de sinapsis convencionales y en cinta es muy limitada. En este trabajo se presenta un método para investigar la ultraestructura de dos tipos de sinapsis en ROs mediante TEM. Después de 180 días de cultivo, las ósmosis inversas se fijaron, se teñieron, se incrustaron y se cortaron en rodajas ultrafinas. La observación de TEM reveló sinapsis en cinta en las terminales axonales de los fotorreceptores (Figura 1 y Figura 2), que se distribuyen en la OPL. Bajo TEM, cintas de bastones esférulan alrededor de la invaginación sináptica, formando un perfil en forma de herradura con células horizontales (Figura 1). Por lo general, los bastones tienen una sola cinta, pero los conos tienen varias cintas (Figura 2). Además, se observaron sinapsis químicas clásicas entre células amacrinas en la IPL (Figura 3). Según la TEM, la sinapsis química consta de tres partes: la presináptica, la hendidura sináptica y la postsináptica. Las membranas celulares correspondientes a las partes presináptica y postsináptica son ligeramente más gruesas que el resto de las partes, y el estrecho espacio entre las dos membranas se denomina hendidura sináptica. Hay muchas vesículas sinápticas en el citoplasma del sitio de la membrana presináptica. Este estudio confirma la presencia de conexiones sinápticas completas en ROs 3D derivadas de iPSC. Sin embargo, debe tenerse en cuenta que un enjuague incompleto entre pasos conduciría a la precipitación de partículas negras durante el proceso de preparación de la muestra (Figura 4).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66590/66590fig01.jpg"> Figura 1: Imágenes TEM de sinapsis de cinta de varilla en ROs. (A,B) Las células de bastón y horizontales forman un perfil en forma de herradura. Se observó una sola cinta (puntas de flecha) en cada esférula de la varilla en el OPL de las RO, rodeada de numerosas vesículas. Barras de escala = 0,2 μm. Abreviaturas: RO = organoides retinianos; HC = celda horizontal; OPL = capa plexiforme externa. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66590/66590fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66590/66590fig02.jpg"> Figura 2: Imágenes TEM de sinapsis de cinta de cono en RO. Tres sinapsis de cinta (puntas de flecha) eran obvias en un pedículo de cono en el OPL de las RO. Barra de escala = 0,2 μm. Abreviaturas: TEM = microscopía electrónica de transmisión; ROs = organoides retinianos; OPL = capa plexiforme externa. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66590/66590fig02large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66590/66590fig03.jpg"> Figura 3: Imagen TEM de sinapsis químicas en ROs. Se observó una sinapsis química convencional entre las células amacrinas en la capa IPL de ROs. La sinapsis química consta de tres partes: la presináptica, la hendidura sináptica y la postsináptica. Hay muchas vesículas sinápticas en el citoplasma del sitio de la membrana presináptica. Una flecha denota la dirección de la transmisión sináptica, lo que indica la transferencia de numerosas vesículas de un proceso AC1 a otro perfil AC2. Barra de escala = 0,2 μm. Abreviaturas: TEM = microscopía electrónica de transmisión; ROs = organoides retinianos; IPL = capa plexiforme interna; AC = células amacrinas. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66590/66590fig03large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66590/66590fig04.jpg"> Figura 4: Un ejemplo de un problema que puede ocurrir durante el proceso de preparación de la muestra. Hay muchas partículas negras (círculos) en el pedículo del cono debido a un enjuague incompleto entre pasos. Flechas: sinapsis de cinta. Barra de escala = 0,2 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66590/66590fig04large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>

Preparación de muestras de organoides de retina para microscopía electrónica de transmisión

Retinal organoids (ROs) are a three-dimensional culture system mimicking human retinal features that have differentiated from induced pluripotent stem ...

preparing-retinal-organoid-samples-for-transmission-electron

Research

Investigación

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Neurociencia

Los primates no humanos es una importante especie de traslación para nuestra comprensión del desarrollo y el envejecimiento. La organización anatómica de la retina de primates pueden proporcionar información importante sobre las condiciones normales y patológicas en los seres humanos.

La puerta de enlace para el cerebro: la disección de los ojos de Primates

Este artículo video demuestra el establecimiento de cultivos de retina organotípicos wholemount y un procedimiento citospina para el análisis de los efectos inducidos exógenamente. Organotípicos culturas wholemount imitar la...

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El protocolo descrito aquí es para la evaluación estructural de una preparación de retina de montaje completo. Esto incluye descripciones de la disección de tejidos, el montaje en un inserto de membrana de politetrafluoroetileno (PTFE) hidrofilizado, la carga en bolo con marcadores fluorescentes y una comparación de la fijación con carbodiimida y paraformaldehído para el análisis inmunohistoquímico de componentes celulares y sinápticos.

Protocolo optimizado para Retina Preparación Wholemount de la Imagen y la inmunohistoquímica

Presentamos un protocolo para estudiar la distribución de mitocondrias y retículo endoplasmático en células enteras después de la modificación genética utilizando microscopía electrónica correlativa de luz y volumen incluyendo ascorbato peroxidasa 2 y tinción de peroxidasa de rábano picante, seccionamiento en serie de células con y sin el gen objetivo en la misma sección, y la toma de imágenes en serie a través de microscopía electrónica.

Mitocondrias y endoplasmática retícula imagen por microscopía electrónica de luz y volumen correlativa

Este estudio tiene como objetivo desarrollar un nuevo modelo de cultivo de retina organotípico humano (HORC) que evite comprometer la integridad de la retina durante el manejo del explante. Esto se logra cultivando la retina con el vítreo resbanante y el epitelio-coroides pigmentario retiniano subyacente (RPE-coroides) y esclerótica.

Caracterización de una nueva técnica de cultivo de retina organotípica humana

Aquí presentamos un protocolo paso a paso para generar organoides retinianos humanos maduros y utilizarlos en un ensayo de toxicidad de fotorreceptores para identificar candidatos farmacéuticos para la enfermedad degenerativa de la retina relacionada con la edad telangiectasia macular tipo 2 (MacTel).

Pruebas de toxicidad en organoides retinianos humanos para el descubrimiento farmacéutico

Este protocolo describe un método eficiente para diferenciar las hiPSC en grupos de campo ocular y generar organoides neurorretinianos utilizando condiciones de cultivo simplificadas que involucran sistemas de cultivo adherentes y en suspensión. Otros tipos de células oculares, como el EPR y el epitelio corneal, también se pueden aislar de campos oculares maduros en cultivos de retina.

Generación de organoides retinianos a partir de células madre pluripotentes sanas y específicas de la enfermedad retiniana inducida por humanos

Este protocolo describe la generación de organoides hepáticos endodérmicos (eHEPOs) rápidos y reproducibles. Con este protocolo, los eHEPOs pueden producirse en 2 semanas y expandirse a largo plazo (más de 1 año) sin perder su diferenciación y funcionalidad.

Generación de organoides hepáticos endodérmicos funcionales

Este protocolo describe los pasos detallados de la microscopía inmunoelectrónica previa a la incorporación, con un enfoque en la exploración de los circuitos sinápticos y la localización de proteínas en la retina.

Investigación de circuitos retinianos y localización molecular mediante microscopía inmunoelectrónica previa a la inclusión

Este protocolo describe los pasos detallados para la preparación de muestras de retina para microscopía electrónica de volumen, centrándose en las características estructurales de los terminales fotorreceptores de la retina.

Preparación de muestras de retina para microscopía electrónica volumétrica

Este protocolo combina el aclaramiento óptico y el inmunomarcaje para obtener imágenes confocales de volumen completo de organoides de retina de montaje completo. Preserva la estructura 3D, lo que permite una visualización detallada de las vías neuronales clave, mejorando el estudio de la maduración de la retina, la organización espacial y sus posibles aplicaciones en el modelado de enfermedades y la medicina personalizada.

Visualización de organoides retinianos de montaje completo con resolución celular

Aprende a preparar organoides de retina para microscopía electrónica de transmisión. Este protocolo optimizado permite analizar la ultraestructura sináptica a nivel nanométrico con pasos reproducibles y accesibles.

Preparación de muestras de organoides de retina para microscopía electrónica de transmisión

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