Name: Sistema de síntesis de proteínas libres de células para la construcción de células sintéticas (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-19T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 43 s
Description: Aprende a construir células sintéticas mediante síntesis de proteínas libres de células en microcompartimentos como GUVs. Este protocolo establece un sistema robusto para avanzar en la investigación de biología sintética sin células.

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<meta charset="utf8"></head><body>Protocolos CFPS para células sintéticas microcompartimentadas

<table><tbody><tr><td>1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfocolina(DOPC)</td><td>Avanti</td><td>850375P</td><td></td></tr><tr><td>1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfo-L-serina (sal sódica)(DOPS)</td><td>Avanti</td><td>840035P</td><td></td></tr><tr><td>1,4 ditiotreitol (DTT)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1.11474</td><td></td></tr><tr><td>1-palmitoil-2-oleoil-sn-glicero-3-fosfocolina (POPC)</td><td>Avanti</td><td>850457P</td><td></td></tr><tr><td>3,5-AMP cíclico (cAMP)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9501</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de 50 mL</td><td>Eppendorf</td><td>Tubos Eppendorf BioBased</td><td></td></tr><tr><td>50% peróxido de hidrógeno</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>516813</td><td></td></tr><tr><td>Acetato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A6283</td><td></td></tr><tr><td>Agar en polvo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>05040</td><td></td></tr><tr><td>Alanin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4349</td><td></td></tr><tr><td>Amicon Células Agitadas</td><td>MerckMillipore</td><td>UFSC05001</td><td></td></tr><tr><td>Acetato de amonio (NH4OAc)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7262</td><td></td></tr><tr><td>Arginina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4474</td><td></td></tr><tr><td>Asparagin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A0884</td><td></td></tr><tr><td>Aspartato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5474</td><td></td></tr><tr><td>ATP</td><td>Roche</td><td>11140965001</td><td></td></tr><tr><td>Atto 488 DOPE</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>67335</td><td></td></tr><tr><td>Atto 647N DOPE</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>42247</td><td></td></tr><tr><td>Matraz Erlenmeyer deflector</td><td>Shuniu</td><td>250 mL, 1000mL</td><td></td></tr><tr><td>Albúmina sérica bovina (BSA)</td><td>Roche</td><td>10711454001</td><td></td></tr><tr><td>Tubo centrífugo</td><td>Eppendorf</td><td>Tubos Eppendorf 3810X</td><td></td></tr><tr><td>Rack de tubos centrífugos</td><td>Eppendorf</td><td>0030119819</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de imagen de quimioluminiscencia y epifluorescencia</td><td>Uvitec</td><td>Alliance Q9 Advanced</td><td></td></tr><tr><td>Chloroform</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>288306</td><td></td></tr><tr><td>Confocal Microscopía de barrido láser (LSM)</td><td>ZEISS</td><td>LSM 780</td><td></td></tr><tr><td>Countess Portaobjetos de cámara de recuento de células</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>C10283</td><td></td></tr><tr><td>Cubreobjetos</td><td>Thermo Scientific</td><td>Menzel BB02400500A113MNZ0</td><td></td></tr><tr><td>creatina quinasa (CK)</td><td>Roche</td><td>10127566001</td><td></td></tr><tr><td>Fosfato de creatina (CP)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>10621714001</td><td></td></tr><tr><td>Plato de cultivo</td><td>Huanqiu</td><td>90 mm</td><td></td></tr><tr><td>Cystein</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5360</td><td></td></tr><tr><td>Cytidine 5'-trifosfato sódico sal (CTP)</td><td>aladdin</td><td>C101487</td><td></td></tr><tr><td>membrana de diálisis</td><td>Espectro</td><td>estándar RC Tubo MWCO: 12-14 kD</td><td></td></tr><tr><td>E.Z.N.A. Ciclo Pure Kit</td><td>Omega Bio-Tek</td><td>D6492-01</td><td></td></tr><tr><td>Electrocalentamiento Cultivador de temperatura estacionaria</td><td>Instrumento Yiheng</td><td>DHP-9602</td><td></td></tr><tr><td>Ácido etilendiaminotetraacético (EDTA)</td><td>Biosharp</td><td></td><td></td>1100027</tr><tr><td>Lector de placas fluorescentes</td><td>BioTek</td><td>Synergy 2</td><td></td></tr><tr><td>Aceite fluorado</td><td>Suzhou CChip instrumento científico</td><td>2%HFE7500</td><td></td></tr><tr><td>Ácido folínico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>47612</td><td></td></tr><tr><td>Prensa francesa</td><td>G.Heinemann</td><td>HTU-DIGI-Prensa</td><td></td></tr><tr><td>Glucosa</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7021</td><td></td></tr><tr><td>Glutamat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5667</td><td></td></tr><tr><td>Glutamina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5792</td><td></td></tr><tr><td>Glicerol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5516</td><td></td></tr><tr><td>Glycin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7126</td><td></td></tr><tr><td>Guanosina 5'-trifosfato Sal sódica hidrato (GTP)</td><td>Roche</td><td>10106399001</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>HiPrep Q FF 16/10</td><td>Cytiva</td><td>28936543</td><td></td></tr><tr><td>Histidina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H6034</td><td></td></tr><tr><td>Isoleucina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I5281</td><td></td></tr><tr><td>Isopropil-β-D-tiogalactopiranósido (IPTG)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I5502</td><td></td></tr><tr><td>K2HPO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8281</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5655</td><td></td></tr><tr><td>Leucina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L6914</td><td></td></tr><tr><td>Lisina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L5501</td><td></td></tr><tr><td>Acetato de magnesio tetrahidratado (Mg(OAc)2 )</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5661</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro de magnesio (MgCl2)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2670</td><td></td></tr><tr><td>Metionina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M8439</td><td></td></tr><tr><td>Microcentrífuga</td><td>Eppendorf</td><td>5424 R</td><td></td></tr><tr><td>Aceite mineral</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5904</td><td></td></tr><tr><td>Mini-PROTEAN Tetra Cell Systems</td><td>Bio-Rad</td><td>1645050</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga Multipropósito</td><td>Eppendorf</td><td>5810 R</td><td></td></tr><tr><td>NaN3</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S2002</td><td></td></tr><tr><td>Ácido nucleico &amp; Mediciones de ensayos UV de proteínas</td><td>IMPLEN</td><td>NanoPhotoPhotometer N60</td><td></td></tr><tr><td>NucleoBond Xtra Maxi kit para plásmido de grado de transfección DNA</td><td>MACHEREY-NAGEL</td><td>740414.5</td><td></td></tr><tr><td>Nunc-Immuno MicroWell 96 pocillos placas de poliestireno</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8616</td><td></td></tr><tr><td>PCR termociclador</td><td>Eppendorf</td><td>Mastercycler nexus</td><td></td></tr><tr><td>Peptona</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>83059</td><td></td></tr><tr><td>Fenilalanina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8740</td><td></td></tr><tr><td>Fosfoenolpiruvat (PEP)</td><td>GLPBIO</td><td>GC44635</td><td></td></tr><tr><td>PMSF</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>PMSF-RO</td><td></td></tr><tr><td>Polietilenglicol 8000 (PEG 8000)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>89510</td><td></td></tr><tr><td>Acetato de potasio(KOAc)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5708</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro de potasio( KCl)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9541</td><td></td></tr><tr><td>Glutamato de potasio (K-glutamato)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G1501</td><td></td></tr><tr><td>Hidróxido de potasio (KOH)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>221473</td><td></td></tr><tr><td>Prolin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8865</td><td></td></tr><tr><td>Piruvato quinasa (PK)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9136</td><td></td></tr><tr><td>Serina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S4311</td><td></td></tr><tr><td>Agitador</td><td>Zhichushakers</td><td>ZQZY-AF8</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro de sodio (NaCl)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5886</td><td></td></tr><tr><td>Hidróxido de sodio (NaOH)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5881</td><td></td></tr><tr><td>Sacarosa</td><td>aladdina</td><td>S112226</td><td></td></tr><tr><td>Ácido sulfúrico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>339741</td><td></td></tr><tr><td>Filtros de jeringa</td><td>Jinteng</td><td>0.45 μ m</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de ensayo</td><td>Shuniu</td><td>20 mL</td><td></td></tr><tr><td>TGX FastCast Acrylamida Kit, 12%</td><td>Bio-Rad</td><td>#1610175</td><td></td></tr><tr><td>ThermoMixer</td><td>Eppendorf</td><td>ThermoMixer C</td><td></td></tr><tr><td>Threonin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8441</td><td></td></tr><tr><td>Tris base</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>V900483</td><td></td></tr><tr><td>tRNA</td><td>Roche</td><td>10109550001</td><td></td></tr><tr><td>Triptona</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T7293</td><td></td></tr><tr><td>Triptófano</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8941</td><td></td></tr><tr><td>Tirosina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8566</td><td></td></tr><tr><td>UTP Sal trisódica (UTP)</td><td>aladdin</td><td>U100365</td><td></td></tr><tr><td>Bomba de vacío con sistema de agua circulante</td><td>Zhengzhou Greatwall Scientific Industrial and Trade Co.Ltd</td><td>SHB-<img alt="Ecuación 1" src="/files/ftp_upload/66626/66626eq01.jpg" style="margin: auto; "></td><td></td></tr><tr><td>Valin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>V4638</td><td></td></tr><tr><td>Mezcladores de vórtice</td><td>Kylin-Bell</td><td>Vortex QL-861</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de purificación de agua</td><td>MerckMillipore</td><td>Direct agua ultrapura (Tipo 1)</td><td></td></tr><tr><td>Extracto de levadura</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>70161</td><td></td></tr><tr><td>β-mercaptoetanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>444203</td><td></td></tr></tbody></table>

sistema de síntesis de proteínas libres de células para la construcción de células sintéticas

Cell-Free Protein Synthesis System for Building Synthetic Cells

Para cada nuevo lote de extracto celular y ARN polimerasa T7, se recomienda realizar un cribado básico de las concentraciones de Mg2+ y K+ para garantizar el rendimiento óptimo del sistema CFPS. La fluorescencia de la GFP de la superplegadora puede servir como indicador del rendimiento general del sistema CFPS en condiciones variables, como se ilustra en la Figura 1A, B. Además, en la Figura 1C se muestra una comparación paralela del rendimiento del sistema CFPS en diferentes compartimentos, lo que demuestra un rendimiento consistente en sistemas CFPS encapsulados, aunque con una ligera disminución de los GUV, posiblemente debido a la influencia de la sacarosa46. Además, las reacciones de CFPS se encapsularon con éxito en gotas (Figura 2), GUV (Figura 3) y encima de SLB (Figura 4).
La Figura 2A destaca la formación de gotas de emulsión, evidentes cuando la solución de aceite se volvió turbulenta. La expresión de proteínas fluorescentes verde/roja (GFP y mCherry) se capturó mediante una microscopía de barrido láser confocal. La Figura 3 mostró el éxito de la encapsulación de la reacción de CFPS dentro de GUV a través del simple proceso de transferencia de emulsión. El canal rojo indicaba los lípidos marcados; el canal verde mostró la expresión de GFP de superplegadora; y el canal amarillo representaba un tinte fluorescente inerte. La Figura 4A muestra la cámara SLB donde se podría depositar la reacción de CFPS. Dentro de esta cámara, se formó un SLB en la parte superior del cubreobjetos de vidrio, con la mezcla de reacción CFPS colocada sobre el SLB preformado, lo que permitió obtener imágenes a través de una microscopía de escaneo láser confocal. Como se indica en la Figura 4B, el SLB se visualizó mediante lípidos marcados, que se mostraron en verde, mientras que la pequeña GTPasa Cdc42 expresada con mCherry se mostró en magenta. La expresión in situ de mCherry-Cdc42 fue observable, junto con el proceso de focalización de membrana reversible, bajo el microscopio. Sin embargo, el sistema CFPS utilizado se complementó con maquinaria de prenilación, como se detalla en una publicación reciente47.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66626/66626fig01.jpg"> Figura 1: Optimización y comparación del sistema CFPS. Cribado de concentraciones de (A) Mg2+ y (B) K+ para el sistema CFPS a granel. (C) Un gráfico de barras que muestra los rendimientos de la expresión de proteínas en diferentes compartimentos. La fluorescencia de la superplegadora GFP se utilizó para determinar el rendimiento del sistema CFPS, medido por un lector de placas o un microscopio de barrido láser confocal. Abreviaturas: CFPS = síntesis de proteínas libres de células; GFP = proteína verde fluorescente; sfGFP = GFP de la supercarpeta; GUV = vesícula unilaminar gigante; SLB = bicapa lipídica soportada. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66626/66626fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66626/66626fig02.jpg"> Figura 2: Síntesis de proteínas libres de células en gotas. (A) Una foto de reacciones de CFPS encapsuladas en gotas de agua en aceite estabilizadas con surfactante. (B) Imágenes de campo claro y fluorescencia (C,D) de CFPS de (C) mCherry y (D) supercarpeta GFP encapsuladas en gotas visualizadas por microscopía de barrido láser confocal. Superfolder GFP se indica en verde; mCherry está indicado en magenta. Barras de escala = 20 μm. Abreviaturas: CFPS = síntesis de proteínas libres de células; GFP = proteína verde fluorescente. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66626/66626fig02large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66626/66626fig03.jpg"> Figura 3: Síntesis de proteínas libres de células en GUVs. (A) Una foto de reacciones de CFPS encapsuladas en GUVs. (B-D) Imagen de fluorescencia de CFPS encapsulados dentro de GUVs POPC, expresando GFP de supercarpeta. (B) La bicapa lipídica se marcó con un 0,05% de lípidos Atto647N-DOPE, se mostró en rojo, (C) un colorante inerte se mostró en amarillo, y (D) la supercarpeta GFP se indicó en verde. Barras de escala = 20 μm. Abreviaturas: CFPS = síntesis de proteínas libres de células; GFP = proteína verde fluorescente; GUV = vesícula unilaminar gigante; POPC = 1-palmitoil-2-oleoil-glicerol-3-fosfocolina; DOPE = 1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66626/66626fig03large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66626/66626fig04.jpg"> Figura 4: Síntesis de proteínas libres de células de la pequeña proteína GTPasa-Cdc42 en la parte superior de SLB. (A) Ilustración esquemática de la reconstitución de la orientación de la membrana de Cdc42 y la extracción de membrana dependiente de RhoGDI en SLB, visualizada por microscopía de barrido láser confocal. La maquinaria de prenilación se implementó a través de un extracto enriquecido con prenlytransferasa, que se detalla en otra parte. 47. (B) Una vista ortogonal de la pre y postprenilación de la mezcla de reacción sobre SLB. (C,D) Series temporales de la intensidad de mCherry-Cdc42 en la membrana (rosa) y en solución (negro) durante la focalización de la membrana (C) y la extracción de la membrana (D). Las barras de escala = 10 μm. (A-D) fueron adaptadas de Kai et al.47. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66626/66626fig04large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
Tabla 1: Lista de búferes. NOTA: Agregue β-mercaptoetanol y DTT justo antes de usar. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66626/66626_Table%201_rev.xlsx" target="_blank">Haga clic aquí para descargar esta tabla.</a>
Tabla 2: Esquema de pipeteo para el cribado de concentraciones de Mg2+ . <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66626/66626_Table%202_rev.xlsx" target="_blank">Haga clic aquí para descargar esta tabla.</a>
Tabla 3: Esquema de pipeteo para el cribado de concentración de K+ . <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66626/66626_Table%203_rev.xlsx" target="_blank">Haga clic aquí para descargar esta tabla.</a>
Tabla 4: Composición de la solución interna. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66626/66626_Table%204_rev.xlsx" target="_blank">Haga clic aquí para descargar esta tabla.</a>
Tabla 5: Composición de la solución externa. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66626/66626_Table%205_rev.xlsx" target="_blank">Haga clic aquí para descargar esta tabla.</a>
Tabla 6: Composición de la solución preinterna. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66626/66626_Table%206_rev.xlsx" target="_blank">Haga clic aquí para descargar esta tabla.</a>

Sistema de síntesis de proteínas libres de células para la construcción de células sintéticas

The Cell-Free Protein Synthesis (CFPS) system has been widely employed to facilitate the bottom-up assembly of synthetic cells. It serves as the host for ...

cell-free-protein-synthesis-system-for-building-synthetic-cells

Research

Investigación

JoVE Journal

Biochemistry

Bioquímica

Este protocolo de cinco días se esbozan todos los pasos, el equipo y el software complementario necesario para la creación y ejecución de un eficiente Escherichia coli endógeno basado sistema de expresión libre de células TX-TL a partir de cero. Con los reactivos, el protocolo de toma 8 horas o menos a la configuración de una reacción, recopilar y procesar datos.

Los protocolos para la implementación de un Escherichia coli Basado TX-TL-Cell de Libre Expresión de la biología sintética

En este documento se describen los métodos simples para la preparación de vesículas, la encapsulación de la transcripción y la maquinaria de traducción, y el seguimiento de la producción de proteínas. Los sistemas libres de células resultantes se pueden utilizar como un punto de partida para construir imita celulares cada vez más complejas.

La encapsulación de la transcripción en células libres y las máquinas de traducción en vesículas para la Construcción de Imitadores celulares

Se describe un sencillo procedimiento litográfico para la inmovilización de las moléculas de ADN del gen-longitud sobre una superficie, que puede utilizarse para llevar a cabo experimentos de expresión génica sin células en biochips.

Superficie-Inmovilización funcional de Genes utilizando litografía de desplazamiento de varias fases de la cadena

Este protocolo detalla los pasos, costos y equipamiento necesario para generar e. coli-basado en extractos celulares e implementar en vitro reacciones de la síntesis de proteína dentro de 4 días o menos. Para aprovechar la naturaleza flexible de esta plataforma para aplicaciones generales, se discuten las condiciones de reacción que pueden ser adaptadas y optimizadas.

Escherichia coli-base libres de células síntesis de la proteína: protocolos para una tecnología de plataforma robusta, flexible y accesible

Este protocolo describe el método, los materiales, el equipo y los pasos para la preparación ascendente de ARN y células sintéticas productoras de proteínas. El compartimento acuoso interno de las células sintéticas contenía el lisato bacteriano S30 encapsulado dentro de una bicapa lipídica (es decir, liposomas estables), utilizando un método de transferencia de emulsión de agua en aceite.

Preparación de células sintéticas productoras de proteínas mediante extractos bacterianos libres de células, liposomas y transferencia de emulsión

Presentamos un método rápido y rentable para producir el sistema TX-TL recombinante PURE libre de células utilizando equipos de laboratorio estándar.

Sistema OnePot PURE Cell-Free

El estudio describe un protocolo para crear grandes cantidades (μg-mg) de ADN para campañas de detección de proteínas a partir de fragmentos de genes sintéticos sin clonar ni usar células vivas. La plantilla mínima se digiere y circula enzimáticamente y luego se amplifica mediante amplificación de círculo de rodadura isotérmica. Las reacciones de expresión libre de células podrían realizarse con el producto no purificado.

Métodos rápidos y enzimáticos para la amplificación de plantillas mínimas y lineales para la creación de prototipos de proteínas utilizando sistemas libres de células

Las partes genéticas bien caracterizadas son necesarias para el diseño de nuevos circuitos genéticos. Aquí describimos un método rentable y de alto rendimiento para caracterizar rápidamente las partes genéticas. Nuestro método reduce el costo y el tiempo al combinar lisados libres de células, ADN lineal para evitar la clonación y manejo acústico de líquidos para aumentar el rendimiento y reducir los volúmenes de reacción.

Caracterización rápida de partes genéticas con sistemas libres de células

Este trabajo describe la preparación de extracto celular de Escherichia coli (E. coli) seguido de reacciones de síntesis de proteínas libres de células (CFPS) en menos de 24 horas. La explicación del protocolo de autoinducción libre de células (CFAI) detalla las mejoras realizadas para reducir la supervisión del investigador y aumentar las cantidades de extracto celular obtenido.

De las células a la síntesis de proteínas libres de células en 24 horas utilizando el flujo de trabajo de autoinducción sin células

Aquí se presenta un protocolo para la preparación y calibración tampón de extractos celulares de cepas knockout de exonucleasa V de Escherichia coli BL21 Rosetta2 (ΔrecBCD y ΔrecB). Este es un enfoque rápido, fácil y directo para la expresión en sistemas de síntesis de proteínas libres de células utilizando plantillas de ADN lineal.

Síntesis de proteínas libres de células a partir de extractos celulares deficientes en exonucleasa utilizando plantillas de ADN lineal

Presentamos un protocolo actualizado para la producción del sistema OnePot 'Protein synthesis Using Recombinant Elements' (PURE) y ribosomas crudos para la síntesis de proteínas libres de células, centrándonos en el control del crecimiento celular para minimizar las variaciones de lote a lote.

Refinamiento de OnePot PURE y producción de ribosomas crudos para la síntesis de proteínas libres de células reproducibles

Aprende a construir células sintéticas mediante síntesis de proteínas libres de células en microcompartimentos como GUVs. Este protocolo establece un sistema robusto para avanzar en la investigación de biología sintética sin células.

Sistema de síntesis de proteínas libres de células para la construcción de células sintéticas

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