Name: Cuantificación de la densidad microvascular pulmonar en ratones a través de los lóbulos (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-03T12:40:00.000+00:00
Duration: 10 min
Description: Aprende a cuantificar la densidad microvascular pulmonar en lóbulos de ratón mediante tinción con isolectina B4 y análisis con ImageJ. Este protocolo mejora la precisión en estudios de enfermedades respiratorias.

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<meta charset="utf8"></head><body>Evaluación de la microvasculatura pulmonar con tinción de isolectina B4 en ratones

<ol><li>Jia, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fgf-2+promotes+angiogenesis+through+a+srsf1%2Fsrsf3%2Fsrpk1-dependent+axis+that+controls+vegfr1+splicing+in+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biol%22%5BJournal%5D)">Fgf-2 promotes angiogenesis through a srsf1/srsf3/srpk1-dependent axis that controls vegfr1 splicing in endothelial cells.</a> BMC Biol. 19 (1), 173(2021).</li>
<li>Schneider, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+aging+lung%3A+Physiology%2C+disease%2C+and+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The aging lung: Physiology, disease, and immunity.</a> Cell. 184 (8), 1990-2019 (2021).</li>
<li>Rafii, S., Butler, J. M., Ding, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiocrine+functions+of+organ-specific+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Angiocrine functions of organ-specific endothelial cells.</a> Nature. 529 (7586), 316-325 (2016).</li>
<li>Lipskaia, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+telomerase+in+p21-positive+cells+counteracts+capillaries+rarefaction+in+aging+mice+lung%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Induction of telomerase in p21-positive cells counteracts capillaries rarefaction in aging mice lung.</a> bioRxiv. , (2022).</li>
<li>Hoshino, M., Takahashi, M., Aoike, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+vascular+endothelial+growth+factor%2C+basic+fibroblast+growth+factor%2C+and+angiogenin+immunoreactivity+in+asthmatic+airways+and+its+relationship+to+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Allergy+Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Expression of vascular endothelial growth factor, basic fibroblast growth factor, and angiogenin immunoreactivity in asthmatic airways and its relationship to angiogenesis.</a> J Allergy Clin Immunol. 107 (2), 295-301 (2001).</li>
<li>Ackermann, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+vascular+endothelialitis%2C+thrombosis%2C+and+angiogenesis+in+covid-19%5BTitle%5D)+AND+%22New+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Pulmonary vascular endothelialitis, thrombosis, and angiogenesis in covid-19.</a> New Engl J Med. 383 (2), 120-128 (2020).</li>
<li>Wertheim, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolating+pulmonary+microvascular+endothelial+cells+ex+vivo%3A+Implications+for+pulmonary+arterial+hypertension%2C+and+a+caution+on+the+use+of+commercial+biomaterials%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Isolating pulmonary microvascular endothelial cells ex vivo: Implications for pulmonary arterial hypertension, and a caution on the use of commercial biomaterials.</a> PLoS One. 14 (2), e0211909(2019).</li>
<li>Thomas, S. M., Bednarek, J., Janssen, W. J., Hume, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Air-inflation+of+murine+lungs+with+vascular+perfusion-fixation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Air-inflation of murine lungs with vascular perfusion-fixation.</a> J Vis Exp. (168), e62215(2021).</li>
<li>Ramasamy, S. K., Kusumbe, A. P., Adams, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+tissue+morphogenesis+by+endothelial+cell-derived+signals%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Regulation of tissue morphogenesis by endothelial cell-derived signals.</a> Trends Cell Biol. 25 (3), 148-157 (2015).</li>
<li>Amersfoort, J., Eelen, G., Carmeliet, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunomodulation+by+endothelial+cells+-+partnering+up+with+the+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immunomodulation by endothelial cells - partnering up with the immune system.</a> Nat Rev Immunol. 22 (9), 576-588 (2022).</li>
<li>Niethamer, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+the+role+of+pulmonary+endothelial+cell+heterogeneity+in+the+response+to+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Defining the role of pulmonary endothelial cell heterogeneity in the response to acute lung injury.</a> eLife. 9, e53072(2020).</li>
<li>Corliss, B. A., Mathews, C., Doty, R., Rohde, G., Peirce, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+to+label%2C+image%2C+and+analyze+the+complex+structural+architectures+of+microvascular+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Methods to label, image, and analyze the complex structural architectures of microvascular networks.</a> Microcirculation. 26 (5), e12520(2019).</li>
<li>Phillips, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+evaluating+the+murine+pulmonary+vasculature+using+micro-computed+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">A method for evaluating the murine pulmonary vasculature using micro-computed tomography.</a> J Surg Res. 207, 115-122 (2017).</li>
<li>Chadwick, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vessel+network+extraction+and+analysis+of+mouse+pulmonary+vasculature+via+x-ray+micro-computed+tomographic+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Comput+Biol%22%5BJournal%5D)">Vessel network extraction and analysis of mouse pulmonary vasculature via x-ray micro-computed tomographic imaging.</a> PLoS Comput Biol. 17 (4), e1008930(2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>4% Paraformaldehído</td><td>Biosharp</td><td>BL539A</td><td>Fijador de tejidos</td></tr><tr><td>4',6-diamidino-2-fenilindol</td><td>MCE</td><td>HY-D0814</td><td>Colorantes nucleicos</td></tr><tr><td>Alexa-647 Isolectina B4 conjugada con flúor Thermo</td><td></td><td>I32450</td><td>Microvasos de unión</td></tr><tr><td>Antifluorescente Sellador de tabletas</td><td>Abcam AB104135</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Líquido de reparación de antígenos</td> de fijación de muestras<td>Biosharp</td><td>BL151A</td><td>Reparación de sitios antigénicos Casete de</td></tr><tr><td>biopsia</td><td>ActivFlo</td><td>39LC-500-1</td><td>Fijación y posicionamiento de muestras de tejido</td></tr><tr><td>Albúmina sérica bovina</td><td>Sigma</td><td>B2064-50G</td><td>Solución de sellado</td></tr><tr><td>Placa fría</td><td>Leica</td><td>HistoCore Arcadia H&nbsp;</td><td>Congelación de muestras</td></tr><tr><td>horno de secado eléctrico a temperatura constante</td><td>Taisite</td><td>101-0AB</td><td>Reparación a alta temperatura</td></tr><tr><td>Hoja de micrótomo desechable Leica</td><td></td><td>14035838383</td><td>muestras de tejido de corte para preparar secciones</td></tr><tr><td>Incrustación de moldes</td><td>Shitai</td><td>26155166627</td><td>Fijación de muestras de tejido</td></tr><tr><td>etanol</td><td>Kelong</td><td>CAS 64-17-5</td><td>solución de deshidratación de tejidos</td></tr><tr><td>parafina calentada Estación de incrustación</td><td>Leica</td><td>EG1150</td><td>Incrustación de muestras de tssue en parafina</td></tr><tr><td>Baño de agua HistoCore</td><td>Leica</td><td>HI1220</td><td>Aplanar y fijar muestras de tejido</td></tr><tr><td>imageJ (Fiji)&nbsp;</td><td>NIH</td><td>1.54f</td><td>Herramienta cuantitativa</td></tr><tr><td>Bolígrafos de inmunohistoquímica</td><td>Biosharp</td><td>BC004</td><td>Agente bloqueante de agua</td></tr><tr><td>Pinzas médicas</td><td>Shanghái Equipo médico</td><td>N/A</td><td>Agarrar, manipular o mover muestras de tejido</td></tr><tr><td>Microscopio</td><td>Nikon</td><td>Ts2</td><td>Dispositivo de imagen</td></tr><tr><td>Medios de montaje</td><td>Jiangyuan</td> Fijación y conservación <td>insípidas</td><td> Secciones de tejido</td></tr><tr><td>Cera de parafina</td><td>SCHLEDEN</td><td>80200-0014</td><td>Fijación de la estructura</td></tr><tr><td>del tejido PBS</td><td>Beyotime</td><td>C0221A</td><td>tampón de lavado</td></tr><tr><td>Pentobarbital Sodio</td><td>Beijing Compañía de reactivos químicos</td><td>Q / H82-F158-2002</td><td>Anestésico</td></tr><tr><td>Microtomo Rotativo</td><td>Biobase</td><td>Bk-2258</td><td>Preparación de rodajas Tijeras</td></tr><tr><td>estériles</td><td>Shanghai Medical Equipo</td><td>N/A</td><td>segmentación de muestras de tejido</td></tr><tr><td>Bisturí quirúrgico</td><td>Shanghái Equipo médico</td><td>N/A</td><td>Corte de muestras de tejido</td></tr><tr><td>Triton&nbsp;</td><td>Solarbio</td><td>T8200</td><td>Solución de permeabilización</td></tr><tr><td>portaobjetos sin lavado</td><td>PLATINUM PRO</td><td>PRO-04</td><td>Muestras de fijación para tinción</td></tr><tr><td>Xileno</td><td>SUM</td><td>XK13-011-00031</td><td>Solución de desparafinado de tejidos</td></tr></tbody></table>

cuantificación de la densidad microvascular pulmonar en ratones a través de los lóbulos

Quantifying Pulmonary Microvascular Density in Mice Across Lobules

Para distinguir entre las lesiones en los bronquios principales y las pequeñas ramas de la vía aérea, es crucial asegurarse de que se observa la estructura continua de las lesiones en estos dos tipos de vías respiratorias. Esto se puede lograr siguiendo los procedimientos de corte e inclusión descritos en la Figura 1. Dados los numerosos lóbulos pulmonares de los ratones, que están orientados en varias direcciones y poseen una estructura similar a una malla, son más susceptibles al colapso e...

Cuantificación de la densidad microvascular pulmonar en ratones a través de los lóbulos

The abnormal alternation of pulmonary angiogenesis is related to lung microvascular dysfunction and is deeply linked to vascular wall integrity, blood ...

quantifying-pulmonary-microvascular-density-in-mice-across-lobules

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Investigación

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Biología

Un protocolo específico y rápido para investigar simultáneamente la función del corazón derecho, inflamación pulmonar, y la respuesta inmune que se describe como una herramienta de aprendizaje. Vídeo y figuras describen la fisiología y técnicas de microdisección en un equipo organizado-enfoque que es adaptable para ser utilizado para pequeñas y grandes estudios de tamaño.

Ventricular derecha sistólica mediciones de presión en combinación con la cosecha de pulmón y muestras de tejido inmune en ratones

El endotelio glicocalix / endotelial capa superficial está muy bien estudiada mediante microscopía intravital. Microscopía intravital es técnicamente difícil en un órgano en movimiento, como el pulmón. Se demuestra cómo simultánea campo claro y microscopía de fluorescencia se puede usar para estimar el espesor de capa de la superficie endotelial en un libremente...

Medición in vivo de la capa de ratón pulmonar superficie endotelial

La vasoconstricción pulmonar hipóxica (HPV) es un fenómeno fisiológico importante por el cual en la perfusión alveolar del pulmón de la hipoxia es emparejada a la ventilación. El segmento vascular principal que contribuye al HPV es la arteria intra-acinar. Aquí, describimos nuestro protocolo para el análisis del VPH de vasos pulmonares murinos con diámetros de 20-100 μm.

Análisis Videomorfométrico De La Vasoconstricción Pulmonar Hipóxica De Las Arterias Intrapulmonares Usando Cortes Murinos De Precisión Pulmonar Slices

La preparación aislada de pulmón perfundido con sangre hace que sea posible visualizar las redes de microvasos en la superficie del pulmón. A continuación se describe un método para cuantificar la permeabilidad de la microvasculatura individuales en pulmones aislados utilizando imágenes de fluorescencia en tiempo real.

La cuantificación individual Microvessel Permeabilidad en aislado de rata Blood-perfundido Preparación de pulmón

Describimos un medio para medir de forma rápida y sencilla la capacidad de difusión pulmonar en ratones y demostramos que es suficientemente sensible a los cambios fenotípicos en múltiples patologías pulmonares comunes.  Por lo tanto, esta métrica aporta relevancia traslacional directa a los modelos de ratón, ya que la capacidad de difusión también se mide fácilmente en humanos.

Función Fenotipificación ratón pulmonar En Vivo Con la capacidad de difusión pulmonar

Aquí presentamos un protocolo para medir de forma sencilla y fiable la curva presión-volumen pulmonar en ratones, demostrando que es lo suficientemente sensible como para detectar cambios fenotípicos en el parénquima en dos patologías pulmonares comunes, la fibrosis pulmonar y el enfisema. Esta métrica proporciona un medio para cuantificar los cambios estructurales del pulmón con la patología en desarrollo.

Medición de la curva de presión-volumen en mouse Pulmones

El área de superficie pulmonar interna (ISA) es un criterio crítico para evaluar la morfología pulmonar y la fisiología en las enfermedades pulmonares y la regeneración alveolar inducida por lesiones. Describimos aquí un método estandarizado que puede minimizar el sesgo de medición para ISA tanto en neumonectomía pulmonar como en modelos de ratón de implantación de prótesis.

Un método estandarizado para medir el área de la superficie pulmonar interna mediante neumonectomía y prótesis de ratón

La administración intratraal (IT) de agentes experimentales en ratones a menudo resulta en un parto asimétrico a los pulmones distales.  En este informe, describimos un enfoque intrabronquial directo (IB) para canalizar cada pulmón en ratones vivos de forma no operativa.  Este enfoque se puede utilizar para administrar selectivamente agentes a un pulmón o puede adaptarse para mejorar el suministro de agentes simétricos a ambos pulmones.

Administración intrabronquial directa para mejorar la deposición selectiva del agente dentro del pulmón del ratón

Presentamos un método bastante simple y sensible para la cuantificación precisa de la densidad de las vías biliares en el hígado del ratón. Este método puede ayudar a determinar los efectos de los modificadores genéticos y ambientales y la eficacia de las terapias potenciales en modelos de ratón de enfermedades biliares.

Determinación de la densidad del conducto biliar en el hígado del ratón

El objetivo de esta técnica es la visualización ex vivo de redes arteriales pulmonares de ratones postnatales y adultos tempranos a través de la inflación pulmonar y la inyección de un compuesto radioopaco a base de polímeros a través de la arteria pulmonar. También se discuten las posibles aplicaciones para los tejidos fundidos.

Fundición vascular de pulmones de ratón postnatales tempranos y adultos para imágenes micro-CT

Aprende a cuantificar la densidad microvascular pulmonar en lóbulos de ratón mediante tinción con isolectina B4 y análisis con ImageJ. Este protocolo mejora la precisión en estudios de enfermedades respiratorias.

Cuantificación de la densidad microvascular pulmonar en ratones a través de los lóbulos

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