Name: Aislamiento, expansión y diferenciación de progenitores fibro-adipogénicos a partir del modelo de ratón espinoso (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-15T12:20:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: Aprende a aislar progenitores fibro-adipogénicos de ratones espinosos mediante disociación enzimática y clasificación celular por fluorescencia. Este protocolo permite expandir y diferenciar FAPs en miotibroblastos y adipocitos para estudios de regeneración tisular.

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<meta charset="utf8"></head><body>Digestión del corazón y del músculo esquelético del ratón para el cultivo de progenitores fibroadipogénicos

<ol><li>Gaire, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spiny+mouse+%28Acomys%29%3A+An+emerging+research+organism+for+regenerative+medicine+with+applications+beyond+the+skin%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Spiny mouse (Acomys): An emerging research organism for regenerative medicine with applications beyond the skin.</a> NPJ Regen Med. 6, 1(2021).</li>
<li>Sandoval, A. G. W., Maden, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+in+the+spiny+mouse%2C+Acomys%2C+a+new+mammalian+model%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Genet.+Dev%22%5BJournal%5D)">Regeneration in the spiny mouse, Acomys, a new mammalian model.</a> Curr. Opin. Genet. Dev. 64, 31-36 (2020).</li>
<li>Judson, R. N., Zhang, R. H., Rossi, F. M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-resident+mesenchymal+stem%2Fprogenitor+cells+in+skeletal+muscle%3A+Collaborators+or+saboteurs%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+J%22%5BJournal%5D)">Tissue-resident mesenchymal stem/progenitor cells in skeletal muscle: Collaborators or saboteurs.</a> FEBS J. 280 (17), 4100-4108 (2013).</li>
<li>Uezumi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrosis+and+adipogenesis+originate+from+a+common+mesenchymal+progenitor+in+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Fibrosis and adipogenesis originate from a common mesenchymal progenitor in skeletal muscle.</a> J Cell Sci. 124, 3654-3664 (2011).</li>
<li>Joe, A. W. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+injury+activates+resident+fibro%2Fadipogenic+progenitors+that+facilitate+myogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Muscle injury activates resident fibro/adipogenic progenitors that facilitate myogenesis.</a> Nat Cell Biol. 12, 153-163 (2010).</li>
<li>Uezumi, A., Fukada, S. I., Yamamoto, N., Takeda, S., Tsuchida, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+progenitors+distinct+from+satellite+cells+contribute+to+ectopic+fat+cell+formation+in+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal progenitors distinct from satellite cells contribute to ectopic fat cell formation in skeletal muscle.</a> Nat Cell Biol. 122 (12), 143-152 (2010).</li>
<li>Soliman, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenic+Potential+of+Hic1-Expressing+Cardiac+Stromal+Progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Pathogenic Potential of Hic1-Expressing Cardiac Stromal Progenitors.</a> Cell Stem Cell. 26 (2), 205-220 (2020).</li>
<li>Hall, C., Gehmlich, K., Denning, C., Pavlovic, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complex+relationship+between+cardiac+fibroblasts+and+cardiomyocytes+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Heart+Assoc%22%5BJournal%5D)">Complex relationship between cardiac fibroblasts and cardiomyocytes in health and disease.</a> J Am Heart Assoc. 10, 1-15 (2021).</li>
<li>Gawriluk, T. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+ear-hole+closure+identifies+epimorphic+regeneration+as+a+discrete+trait+in+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of ear-hole closure identifies epimorphic regeneration as a discrete trait in mammals.</a> Nat Commun. 71 (7), 1-16 (2016).</li>
<li>Seifert, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skin+shedding+and+tissue+regeneration+in+African+spiny+mice+%28Acomys%29%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Skin shedding and tissue regeneration in African spiny mice (Acomys).</a> Nature. 489, 561(2012).</li>
<li>Koopmans, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemic+tolerance+and+cardiac+repair+in+the+spiny+mouse+%28Acomys%29%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Ischemic tolerance and cardiac repair in the spiny mouse (Acomys).</a> NPJ Regen Med. 6, 78(2021).</li>
<li>Peng, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+spiny+mice+%28Acomys%29+exhibit+endogenous+cardiac+recovery+in+response+to+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Adult spiny mice (Acomys) exhibit endogenous cardiac recovery in response to myocardial infarction.</a> NPJ Regen Med. 6, 74(2021).</li>
<li>Maden, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfect+chronic+skeletal+muscle+regeneration+in+adult+spiny+mice%2C+Acomys+cahirinus%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Perfect chronic skeletal muscle regeneration in adult spiny mice, Acomys cahirinus.</a> Sci Rep. 8, 8920(2018).</li>
<li>Riparini, G., Simone, J. M., Sartorelli, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FACS-isolation+and+culture+of+fibro-adipogenic+progenitors+and+muscle+stem+cells+from+unperturbed+and+injured+mouse+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">FACS-isolation and culture of fibro-adipogenic progenitors and muscle stem cells from unperturbed and injured mouse skeletal muscle.</a> J Vis Exp. (184), e63983(2022).</li>
<li>Low, M., Eisner, C., Rossi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibro%2Fadipogenic+progenitors+%28FAPs%29%3A+Isolation+by+FACS+and+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Fibro/adipogenic progenitors (FAPs): Isolation by FACS and culture.</a> Methods Mol Biol. 1556, 179-189 (2017).</li>
<li>Molina, T., Fabre, P., Dumont, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibro-adipogenic+progenitors+in+skeletal+muscle+homeostasis%2C+regeneration+and+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Open+Biol%22%5BJournal%5D)">Fibro-adipogenic progenitors in skeletal muscle homeostasis, regeneration and diseases.</a> Open Biol. 11 (12), 210110(2021).</li>
<li>Contreras, O., Rossi, F. M. V., Theret, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origins%2C+potency%2C+and+heterogeneity+of+skeletal+muscle+fibro-adipogenic+progenitors-time+for+new+definitions%5BTitle%5D)+AND+%22Skelet+Muscle%22%5BJournal%5D)">Origins, potency, and heterogeneity of skeletal muscle fibro-adipogenic progenitors-time for new definitions.</a> Skelet Muscle. 111 (11), 1-25 (2021).</li>
<li>Fitzgerald, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MME%2B+fibro-adipogenic+progenitors+are+the+dominant+adipogenic+population+during+fatty+infiltration+in+human+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Biol%22%5BJournal%5D)">MME+ fibro-adipogenic progenitors are the dominant adipogenic population during fatty infiltration in human skeletal muscle.</a> Commun Biol. 61 (6), 1-21 (2023).</li>
<li>Babaeijandaghi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DPPIV%2B+fibro-adipogenic+progenitors+form+the+niche+of+adult+skeletal+muscle+self-renewing+resident+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">DPPIV+ fibro-adipogenic progenitors form the niche of adult skeletal muscle self-renewing resident macrophages.</a> Nat Commun. 141 (14), 1-10 (2023).</li>
<li>Schutz, P. W., Cheung, S., Yi, L., Rossi, F. M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+activation+patterns+of+CD10%2B+fibro-adipogenic+progenitors+across+acquired+disease+states+in+human+skeletal+muscle+biopsies%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Cellular activation patterns of CD10+ fibro-adipogenic progenitors across acquired disease states in human skeletal muscle biopsies.</a> Free Neuropathol. 5, 3-3 (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.5M EDTA</td><td>Invitrogen</td><td>15575 &ndash; 038</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de microcentrífuga de 1,7 mL</td><td>VWR</td><td>87003-294</td><td></td></tr><tr><td>15&nbsp; mL tubo de centrífuga</td><td>Falcon</td><td>352096</td><td></td></tr><tr><td>1x Dulbecco' s Solución salina tamponada con fosfato (DPBS)</td><td>Gibco</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>20 mL jeringa</td><td>BD</td><td>309661</td><td></td></tr><tr><td>4&prime;,6-diamidino-2-fenilindol (DAPI)</td><td>Invitrogen</td><td>D3571</td><td></td></tr><tr><td>40&nbsp; &mu; m filtro de células</td><td>Falcon</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>48 pocillos placa de cultivo de tejidos de fondo plano</td><td>Falcon</td><td>53078</td><td></td></tr><tr><td>5 mL de polipropileno</td><td>Falcon</td><td>352063</td><td></td></tr><tr><td>5 mL de poliestireno tubo de fondo redondo con tapón de filtro</td><td>de células Falcon</td><td>352235</td><td></td></tr><tr><td>jeringa de 5 mL</td><td>BD</td><td>309646</td><td></td></tr><tr><td>50&nbsp; mL tubo de centrífuga</td><td>Falcon</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>60 mm Placa de Petri</td><td>Falcon</td><td>353002</td><td></td></tr><tr><td>placa de cultivo de tejidos de fondo V de 96 pocillos</td><td>Corning</td><td>3894</td><td></td></tr><tr><td>Acomys dimidiatus ratones (ratones espinosos)</td><td></td><td></td> <td>amablemente obsequiado por el Dr. Ashley W. Seifert (Universidad de Kentucky).</td></tr><tr><td>Tampón de lisado de cloruro de amonio y potasio (ACK)</td><td>Gibco</td><td>A10492-01</td><td></td></tr><tr><td>Anti-perilipina (1:100)</td><td>Sigma</td><td>P1873</td><td></td></tr><tr><td>Anti-SMA (1:100)</td><td>Invitrogen</td><td>14-9760-82</td><td></td></tr><tr><td>APC PDGFRa (1:800)</td><td>Abcam</td><td>ab270085</td><td></td></tr><tr><td>BD Aguja PrecisionGlide 18 g</td><td>BD</td><td>305195</td><td></td></tr><tr><td>BD Aguja PrecisionGlide 23 g</td><td>BD</td><td>305145</td><td></td></tr><tr><td>Albúmina sérica bovina</td><td>Sigma</td><td>A7906-100g</td><td></td></tr><tr><td>BV605 CD31 (1:500)</td><td>BD biosciences</td><td>744359</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C4901</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga</td><td>Eppendorf</td><td>5810R</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>Gibco</td><td>11320033</td><td></td></tr><tr><td>Donkey anti-ratón Alexa 555 (1:1000)</td><td>Invitrogen</td><td>A31570</td><td></td></tr><tr><td>Burro anti-conejo Alexa 647 (1:1000)</td><td>Invitrogen</td><td>A31573</td><td></td></tr><tr><td>Suero de burro</td><td>Sigma</td><td>S30-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Clasificadora FACS - MoFlo Astrios 5 láseres</td><td>Beckman reja</td><td>B52102</td><td></td></tr><tr><td>Suero fetal bovino</td><td>Gemini</td><td>100-500</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras finas</td><td>FST</td><td>14058-11</td><td></td></tr><tr><td>Fluoromount-G</td><td>SouthernBiotech</td><td>0100-01</td><td></td></tr><tr><td>Pinza</td><td>FST</td><td>11051-10</td><td></td></tr><tr><td>Hemostático</td><td>FST</td><td>91308-12</td><td></td></tr><tr><td>FGF-proteína recombinante básica humana (bFGF)</td><td>Gibco</td><td>13256029</td><td></td></tr><tr><td>proteína recombinante TGF beta 1 humana (TGFb1)</td><td>eBiosciences</td><td>14-8348-62</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora - Heracell 160i CO2</td><td>ThermoFisher</td><td>51033557</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio invertido - Revolve</td><td>ECHO</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Liberase</td><td>Roche</td><td>5401127001</td><td></td></tr><tr><td>Ratón MesenCult Diferenciación adipogénica 10x Suplemento STEMCELL technologies</td><td></td><td>5507</td><td></td></tr><tr><td>Reactivo de bloqueo de ratón contra ratón (MOM)</td><td>Vector Laboratories</td><td>MKB-2213</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehído</td><td>Sigma</td><td>P1648-500g</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina-Estreptomicina</td><td>Gibco</td><td>15140&ndash; 122</td><td></td></tr><tr><td>PicoLab Dieta para ratones 20</td><td>LabDiet</td><td>3005750-220</td><td></td></tr><tr><td>Yoduro de propidio (PI)</td><td>Invitrogen</td><td>P3566</td><td></td></tr><tr><td>Vial de transporte Tubo de 5 ml</td><td>Caplugs Evergreen</td><td>222-3005-080</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma</td><td>9036-19-5</td><td></td></tr></tbody></table>

aislamiento, expansión y diferenciación de progenitores fibro-adipogénicos a partir del modelo de ratón espinoso

Fibro-Adipogenic Progenitor Isolation, Expansion, and Differentiation from the Spiny Mouse Model

En la Figura 1 se resume el esquema de este protocolo para aislar y cultivar músculo esquelético y PAF cardíacos. Para la recolección de tejidos, el cambio de color del hígado de rojo oscuro a amarillo pálido suele ser indicativo de una perfusión exitosa. Con los rangos de edad especificados del ratón espinoso, el peso del corazón suele ser de alrededor de 200 mg, mientras que el músculo cuádriceps es de alrededor de 350 mg.
Durante cada cambio de tampón de digestión en los pasos 3.5-3.7, el tampón de digestión en los tubos de digestión aparece opaco a medida que las células se liberan del tejido. Al final de la digestión, la solución debe ser una suspensión relativamente homogénea con algunos trozos de tejido restantes. Asegúrese de terminar la digestión antes de que todos los tejidos estén completamente digeridos para evitar la digestión excesiva, lo que afectará negativamente la viabilidad de las células y los resultados del cultivo.
Los diagramas de flujo esperados para FACS se muestran en la Figura 2. Se espera que los FAPs representen alrededor del 2% de las células vivas y LIN. El porcentaje de eventos PI+ es un indicador de la calidad de la preparación de la muestra y debe ser inferior al 10%. En este estudio, se obtienen típicamente 150 mil FAP por corazón (solo ventrículos) y 100 mil FAP de dos músculos cuádriceps.
Una vez en la placa, las células suelen adherirse en un plazo de 72 horas, alcanzan el 80% de confluencia en 5 días y muestran una morfología típica de fibroblastos con proyecciones (Figura 5).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66717/66717fig01.jpg"> Figura 1: Representación esquemática del protocolo y tiempo aproximado requerido para cada paso. Recogida de tejidos: 10 min por ratón. Digestión de los tejidos: 1,5-2 h. Tinción celular: 45 min-75 min. Clasificación celular activada por fluorescencia: 2 h. Expansión de progenitores fibroadipogénicos (FAP): 4 días. Diferenciación de FAP: 48 h para la diferenciación fibrogénica, 6 días para la diferenciación adipogénica para las FAP del músculo esquelético y 14 días para las FAP cardíacas. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66717/66717fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66717/66717fig02.jpg"> Figura 2: Gráficos representativos de FACS para el aislamiento de FAP del músculo esquelético (arriba) y cardíaco (abajo). Haga <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66717/66717fig02large.jpg" target="_blank">clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66717/66717fig03.jpg"> Figura 3: Diferenciación de la FAP del músculo esquelético espinoso del ratón. (A) Control de la diferenciación fibrogénica. (B) Diferenciación fibragénica. (C) Control de diferenciación adipogénica. (D) Diferenciación adipogénica. Perilipina (verde), SMA (magenta), DAPI (azul), barra de escala = 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66717/66717fig03large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66717/66717fig04.jpg"> Figura 4: Diferenciación cardíaca de FAP en ratón espinoso. (A) Control de la diferenciación fibrogénica. (B) Diferenciación fibragénica. (C) Control de diferenciación adipogénica. (D) Diferenciación adipogénica. Perilipina (verde), SMA (magenta), DAPI (azul), barra de escala = 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66717/66717fig04large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66717/66717fig05.jpg"> Figura 5: Imágenes de campo claro de FAPs del músculo esquelético espinoso (A) y del corazón (B) del ratón después de 5 días de cultivo, antes de la diferenciación. Barra de escala = 360 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66717/66717fig05large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Mandos</td>
			<td>CD31 SC</td>
			<td>PDGFRα SC</td>
			<td>CD31 FMO</td>
			<td>PDGFRα FMO</td>
			<td>Muestra</td>
		</tr><tr><td>Anticuerpo CD31</td>
			<td>+</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>+</td>
			<td>+</td>
		</tr><tr><td>Anticuerpo PDGFRα</td>
			<td>-</td>
			<td>+</td>
			<td>+</td>
			<td>-</td>
			<td>+</td>
		</tr></tbody></table>Tabla 1: Guía esquemática para la configuración de cócteles de tinción de anticuerpos para controles y muestras. SC = control de un solo color, FMO = fluorescencia menos un control, + = con el anticuerpo correspondiente, - = sin el anticuerpo correspondiente.

Aislamiento, expansión y diferenciación de progenitores fibro-adipogénicos a partir del modelo de ratón espinoso

Due to its exceptional repair program, the spiny mouse is an emerging research model for regenerative medicine. Fibro-adipogenic progenitors are ...

fibro-adipogenic-progenitor-isolation-expansion-differentiation-from

Research

Investigación

JoVE Journal

Developmental Biology

Biología del Desarrollo

Aquí se informa un método para el aislamiento de las poblaciones de células progenitoras de adipocitos (APC) de tejido adiposo perivascular (PVAT) utilizando clasificación de células activadas magnéticamente (MCS). Este método permite un mayor aislamiento de APC por gramo de tejido adiposo cuando se compara con la Clasificación de Células Activadas por Fluorescencia (FACS).

Expansión y Adipogénesis Inducción de Progenitores Adipocíticos de Tejido Adiposo Perivascular Aislado por Clasificación de Células Magnéticas Activadas

Este protocolo describe el enfoque técnico para aislar subpoblaciones de células estromales adipogénicas y fibroinflamatorias de depósitos murinos de tejido adiposo blanco intraabdominal (WAT) mediante clasificación celular activada por fluorescencia o separación inmunomagnética de perlas.

Aislamiento de subpoblaciones de células estromales adipogénicas y fibroinflamatorias de depósitos adiposos intraabdominales murinos

Presentamos un método simple para aislar células progenitoras adiposas altamente viables de las almohadillas de grasa epidídmica del ratón usando clasificación celular activada por fluorescencia.

Preparación de células progenitoras adiposas de tejidos adiposos epidídicos del ratón

Este informe describe un protocolo para el aislamiento simultáneo de preadipocytes marrones y blancos primarios de ratones recién nacidos. Las células aisladas se pueden cultivar en cultivo e inducir a diferenciarse en adipocitos blancos y marrones completamente maduros. El método permite la caracterización genética, molecular y funcional de las células de grasa primarias en cultivo.

Aislamiento Y Diferenciación De Preadipocitos Blancos Y Marrones Primarios De Ratones Recién Nacidos

Este protocolo describe el aislamiento de preadipocitos de ratón de la grasa subcutánea, su diferenciación en adipocitos maduros y la inducción de resistencia a la insulina. La acción de la insulina se evalúa mediante la fosforilación/activación de los miembros de la vía de señalización de la insulina a través del western blot. Este método permite la determinación directa de la resistencia/sensibilidad a la insulina en adipocitos primarios.

Adipocitos diferenciados de ratón en cultivo primario: un modelo de resistencia a la insulina

La identificación precisa de las células progenitoras fibroadipogénicas (FAP) y las células madre musculares (MuSC) es fundamental para estudiar su función biológica en condiciones fisiológicas y patológicas. Este protocolo proporciona pautas para el aislamiento, purificación y cultivo de FAP y MuSC de músculos de ratones adultos.

FACS-aislamiento y cultivo de progenitores fibroadipogénicos y células madre musculares a partir de músculo esquelético de ratón imperturbable y lesionado

Los preadipocitos se aíslan de la fracción vascular estromal del tejido adiposo marrón interescapular de ratones recién nacidos y se diferencian en células que acumulan gotas de lípidos, expresan marcadores moleculares y muestran la morfología mitocondrial de los adipocitos marrones maduros. Estas células se analizan posteriormente mediante inmunofluorescencia y microscopía electrónica de transmisión.

Diferenciación e imagen de adipocitos marrones de la fracción vascular estromal de tejido adiposo interescapular de ratones recién nacidos

Este protocolo describe el aislamiento semiautomático de la fracción vascular estromal (SVF) del tejido adiposo murino para obtener preadipocitos y lograr la diferenciación de los adipocitos in vitro. El uso de un disociador de tejidos para la digestión de la colagenasa reduce la variación experimental y aumenta la reproducibilidad.

Aislamiento semiautomático de la fracción vascular estromal del tejido adiposo blanco murino utilizando un disociador tisular

En este trabajo se describe el aislamiento, cultivo e inducción adipogénica de preadipocitos derivados de la fracción vascular estromal a partir de tejido adiposo periaórtico de ratón, lo que permite estudiar la función del tejido adiposo perivascular y su relación con las células vasculares.

Aislamiento, cultivo e inducción adipogénica de preadipocitos derivados de la fracción vascular estromal a partir de tejido adiposo periaórtico de ratón

El tamaño y la fragilidad de los adipocitos maduros han limitado las técnicas y herramientas disponibles para su estudio y aislamiento. En este trabajo se describe un protocolo para el aislamiento de adipocitos murinos maduros, que puede adaptarse fácilmente a diferentes depósitos de adiposo y dietas de ratones.

Aislamiento y cultivo de adipocitos murinos primarios de ratones delgados y obesos

Aprende a aislar progenitores fibro-adipogénicos de ratones espinosos mediante disociación enzimática y clasificación celular por fluorescencia. Este protocolo permite expandir y diferenciar FAPs en miotibroblastos y adipocitos para estudios de regeneración tisular.

Aislamiento, expansión y diferenciación de progenitores fibro-adipogénicos a partir del modelo de ratón espinoso

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