Name: Técnica menos invasiva para la fractura mandibular no estabilizada en modelos murinos (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-09-27T13:25:00.000+00:00
Duration: 4 min 13 s
Description: Aprende una técnica menos invasiva para crear fracturas mandibulares no estabilizadas en ratones. Este método minimiza la pérdida ósea y el daño tisular para estudiar la reparación endocondral ósea.

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<meta charset="utf8"></head><body>Protocolo estandarizado de fractura mandibular para la reparación ósea en ratones

<ol><li>Thompson, Z., Miclau, T., Hu, D., Helms, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+for+intramembranous+ossification+during+fracture+healing%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ortho+Res%22%5BJournal%5D)">A model for intramembranous ossification during fracture healing.</a> J Ortho Res. 20 (5), 1091-1098 (2002).</li>
<li>Bahney, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+biology+of+fracture+healing%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ortho+Res%22%5BJournal%5D)">Cellular biology of fracture healing.</a> J Ortho Res. 37 (1), 35-50 (2019).</li>
<li>Yu, Y. Y., Lieu, S., Hu, D., Miclau, T., Colnot, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Site+specific+effects+of+zoledronic+acid+during+tibial+and+mandibular+fracture+repair%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Site specific effects of zoledronic acid during tibial and mandibular fracture repair.</a> PLoS One. 7 (2), e31771(2012).</li>
<li>Landry, P. S., Marino, A. A., Sadasivan, K. K., Albright, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+soft-tissue+trauma+on+the+early+periosteal+response+of+bone+to+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Trauma%22%5BJournal%5D)">Effect of soft-tissue trauma on the early periosteal response of bone to injury.</a> J Trauma. 48 (3), 479-483 (2000).</li>
<li>Colnot, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skeletal+cell+fate+decisions+within+periosteum+and+bone+marrow+during+bone+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Miner+Res%22%5BJournal%5D)">Skeletal cell fate decisions within periosteum and bone marrow during bone regeneration.</a> J Bone Miner Res. 24 (2), 274-282 (2009).</li>
<li>Julien, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+contribution+of+skeletal+muscle+mesenchymal+progenitors+to+bone+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Direct contribution of skeletal muscle mesenchymal progenitors to bone repair.</a> Nat Commun. 12 (1), 2860(2021).</li>
<li>McGuire, C., Boudreau, C., Prabhu, N., Hong, P., Bezuhly, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Piezosurgery+versus+conventional+cutting+techniques+in+craniofacial+surgery%3A+A+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">Piezosurgery versus conventional cutting techniques in craniofacial surgery: A systematic review and meta-analysis.</a> Plast Reconstr Surg. 149 (1), 183-195 (2022).</li>
<li>Wong, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chondrocyte-to-osteoblast+transformation+in+mandibular+fracture+repair%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Res%22%5BJournal%5D)">Chondrocyte-to-osteoblast transformation in mandibular fracture repair.</a> J Orthop Res. 39 (8), 1622-1632 (2021).</li>
<li>Vercellotti, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technological+characteristics+and+clinical+indications+of+piezoelectric+bone+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Minerva+Stomatol%22%5BJournal%5D)">Technological characteristics and clinical indications of piezoelectric bone surgery.</a> Minerva Stomatol. 53, 207-214 (2004).</li>
<li>Wong, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chondrocyte-to-osteoblast+transformation+in+mandibular+fracture+repair%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Res%22%5BJournal%5D)">Chondrocyte-to-osteoblast transformation in mandibular fracture repair.</a> J Orthop Res. 39 (8), 1622-1632 (2021).</li>
<li>Tian, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIF-1%CE%B1+regulates+osteoclast+activation+and+mediates+osteogenesis+during+mandibular+bone+repair+via+CT-1%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Dis%22%5BJournal%5D)">HIF-1α regulates osteoclast activation and mediates osteogenesis during mandibular bone repair via CT-1.</a> Oral Dis. 28 (2), 428-441 (2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Buprenorfina : Buprecare 0.3 mg/kg</td><td>Elevador Animalcare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>OBWEGESER ancho 6mm Largo 17,5cm&nbsp;</td><td>Pinzas Collin Medical</td><td>HA 5905</td><td></td></tr><tr><td>: Placa de almohadilla MORIA 11 cm N&deg; 5</td><td>MORIA</td><td>9906</td><td></td></tr><tr><td>Mesa calefactora Bioseblab 55 cm x 33 cm</td><td>Bioseblab</td><td>707</td><td></td></tr><tr><td>Portaagujas HOLDER : Micro Halsey Needle Holder - Metal&nbsp;</td><td>LABODERM</td><td>21,100</td><td></td></tr><tr><td>Neo Clear&nbsp;</td><td>Merck Millipore, Darmstadt, Alemania</td><td>109843&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Ocry Gel Tube 10 g (lubricante ocular)</td><td>tvm lab&nbsp; &nbsp;</td><td>3.70045E+12</td><td></td></tr><tr><td>Piezotome 2 ASS FINAL</td><td>ACTEON</td><td>X57402</td><td></td></tr><tr><td>Inserto piezotomo Piezocision PZ3</td><td>ACTEON</td><td>F87574</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras micro&nbsp;</td><td>MORIA</td><td>MC52</td><td></td></tr><tr><td>Suturas de seda PERMA HAND SEIDE&nbsp; / MERSILK</td><td>ETHICON</td><td>REF 18501G&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras rectas</td><td>MORIA</td><td>4877A</td><td></td></tr><tr><td>Vetflurano (isoflurano) 250 ml</td><td>VIRBAC</td><td>VET066 (Centravet)</td><td></td></tr></tbody></table>

técnica menos invasiva para la fractura mandibular no estabilizada en modelos murinos

Less-Invasive Technique for Non-stabilized Mandibular Fracture in Mouse Models

En cuanto a los procedimientos quirúrgicos in vivo , para realizar de forma óptima este procedimiento de fractura mandibular no estabilizada en un modelo de ratón, se requiere un aprendizaje y formación específicos.
Esta técnica de fractura mandibular no estabilizada permite estudiar el proceso de reparación ósea endocondral. Tras la eutanasia, se recogieron muestras mandibulares en paraformaldehído al 4% (24 h). Después de la descalcificación completa con EDTA pH 8, las secciones se incrustaron en parafina. Se realizaron cortes seriados sagitales, desparafinados en solución de desparafinación y luego rehidratados antes de la tinción con rojo sirus/azul alcián, utilizando protocolos estándar. Las imágenes histológicas confirmaron la formación de un callo blando con una plantilla cartilaginosa (Figura 5). La cicatrización ósea se completa a las 4 semanas después de la fractura, como lo demuestran los análisis de micro-TC. Sugerimos estudiar el proceso de reparación ósea en diferentes puntos clave desde el inicio de la formación del callo (p. ej., cada 7 días (día 7, 14, 21) o más dependiendo del objetivo del estudio) hasta el final de la cicatrización ósea (es decir, el día 28), con análisis histomorfológicos y morfométricos micro-TC.
Sobre la base de un análisis retrospectivo de este procedimiento realizado en 58 ratones de tipo salvaje (fondo C57BL/6J), la tasa de éxito del protocolo es del 86,3% y una tasa de exclusión del 13,7%. La exclusión se debió a la muerte espontánea prematura en el postoperatorio precoz (3%), a la decisión de eutanasia en ratones que presentaban una puntuación crítica (1%; puntuación &gt; 3 y/o en caso de pérdida de peso &gt; 20%), o en caso de posición anormal de la osteotomía, con división anormal del ángulo mandibular (5%), o cuando la fractura estaba a nivel de los molares (n=1/58). En este último caso se observó infección, con desdoblamiento anormal de la fractura a nivel molar (n= 1/58; Tabla 2).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66824/66824fig01.jpg"> 
Figura 1: Imagen del abordaje cutáneo submandibular de la rama ascendente mandibular. El borde inferior de la mandíbula se fractura con un inserto de piezotomo, lo que permite una pérdida ósea mínima (flecha). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66824/66824fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66824/66824fig02.jpg"> 
Figura 2: Tinción de la mandíbula del ratón. Vista lateral de la mandíbula de un ratón salvaje de 6 semanas de edad (teñida con rojo alizarina / azul alcián): 1. Cóndilo, 2. Apófisis coronoides, 3. Muesca coronoides, 4. Apófisis angular, 5. Borde posterior de la rama, 6. Borde basilar (o inferior) de la mandíbula. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66824/66824fig02large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66824/66824fig03.jpg"> 
Figura 3: Radiografía del cráneo del ratón. Radiografías laterales del cráneo de un ratón de 6 semanas de edad de tipo salvaje (vista sagital) que muestran el aspecto de la mandíbula de un ratón no fracturado (izquierda) y el aspecto de la mandíbula de un ratón fracturado y la dirección de la fractura mandibular no estabilizada (flechas), desde el borde inferior hasta la escotadura coronoides, situada anteriormente al cóndilo (derecha). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66824/66824fig03large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66824/66824fig04.jpg"> 
Figura 4. Radiografía del cráneo del ratón en condiciones subóptimas. Radiografías laterales del cráneo de un ratón de 6 semanas de edad de tipo salvaje (vista sagital) que muestran una fractura anormal del ángulo mandibular (flechas). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66824/66824fig04large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66824/66824fig05.jpg"> 
Figura 5: Resultados representativos. Resultados a los 14 días post-fractura en un ratón de tipo salvaje (C57BL/6J). Vistas coronales 3D representativas de una tomografía computarizada reconstruida del sitio de la fractura mandibular, que muestra el callo óseo (flechas blancas). Imágenes representativas del cartílago calloso (tinción Rojo Sirus/Azul Alcián) que confirman la presencia de un proceso de reparación ósea endocondral. Abreviaturas: B = Hueso, C = Cartílago. Barra de escala: 200 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66824/66824fig05large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
			<td>0</td>
			<td>1</td>
			<td>2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aspecto animal</td>
			<td>Normal</td>
			<td>Reducción de inodoros</td>
			<td>Pelos alborotados, espalda arqueada</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Comportamiento</td>
			<td>Normal</td>
			<td>Hipomovilidad</td>
			<td>Hipomovilidad, reducción de la ingesta de alimentos, pérdida de peso &gt; 10 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Signos clínicos</td>
			<td>Normal</td>
			<td>Inflamación de la cicatriz</td>
			<td>Cicatriz abierta, infección</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabla 1. Escala de puntuación de bienestar postoperatorio. 
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
			<td>n = 58 ratones</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tasa de éxito</td>
			<td>86.3 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tasa de exclusión:</td>
			<td>13.7 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Muerte espontánea prematura</td>
			<td>3%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puntuación crítica &lt; 3, y/o pérdida de peso &gt; 20 %</td>
			<td>1%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fractura anormal dividida en el ángulo mandibular</td>
			<td>5%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>División anormal de la fractura, a nivel de los molares</td>
			<td>1.7 %</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabla 2. Tasas de éxito y exclusión del protocolo.

Técnica menos invasiva para la fractura mandibular no estabilizada en modelos murinos

Non-stabilized fractures can be made at mandibular sites in mice, thus making it possible to analyze bone repair using an endochondral ossification mode. ...

less-invasive-technique-for-non-stabilized-mandibular-fracture-mouse

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

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