El protocolo de la Unidad de Accidente Cerebrovascular del Ratón con puntuación neurológica estandarizada para estudios traslacionales de accidente cerebrovascular del ratón

El modelo de ictus de ratón con oclusión intravascular traduce bien los tratamientos actuales de trombectomía y reperfusión, sin embargo, no traduce las rutinas efectivas de la unidad clínica de ictus. Aquí, en este video, demostramos nuestro concepto probado de unidad de accidente cerebrovascular traslacional del ratón y la escala de evaluación neurológica estandarizada. El primer método de nuestro protocolo se refiere a la unidad de trazo del ratón.

Evalúe diariamente el estado clínico del animal y calcule su puntuación de certificación de riesgo sumando los puntos como se muestra aquí. Adaptar la frecuencia e intensidad del apoyo en función del RSS y de la fase post-ictus del animal. Para un apoyo nutricional activo, agarre y sostenga al ratón suave pero firmemente desde el pelaje de su cuello.

Estabilice su mejilla con un dedo medio y deslice el dedo medio hacia la nariz del ratón contra su mejilla y mantenga la posición. Coloque la punta de la jeringa entre sus dientes hacia el lado interior de su mejilla. Dé aproximadamente 40 o 50 microlitros de alimento en gel cada vez.

Regrese el ratón suavemente a la jaula y repita la alimentación después de uno o dos minutos. A continuación, se demuestra el componente focal de la Escala Experimental de Ictus. Comience con la prueba uno para la paresia de las extremidades anteriores.

Levanta al ratón suavemente de la base de su cola y examina las extremidades delanteras. Puntuación cero para la extensión simétrica hacia adelante y la movilidad de las extremidades anteriores. Puntúe uno por flexión leve y movimiento reducido de la extremidad contralesional.

Puntuación dos para la flexión leve de la extremidad contralesional. Puntúe tres para la adherencia de la extremidad contralesional al tronco, y puntúe cuatro para la extremidad pléjica sin movimiento de la extremidad o del cuerpo. Ahora evalúe la paresia de las extremidades posteriores.

Continúe sosteniendo el mouse por la base de la cola como en la prueba uno. Examine las extremidades traseras, marque cero para la extensión simétrica y el movimiento de las extremidades posteriores. Puntúe uno para la asimetría de la extremidad posterior con disminución significativa del movimiento y la posición asimétrica de la extremidad posterior contralesional.

Continúa sosteniendo al ratón por la base de la cola para evaluar la simetría de su tronco. Puntúe cero para la flexión simétrica normal del tronco a ambos lados y sin flexión persistente del tronco de más de 30 grados con respecto al eje vertical. Puntúe uno para la marcada flexión del tronco más de 30 grados con respecto al eje vertical con predominio contralesional.

Ahora pruebe el comportamiento de círculos. Coloque el ratón suavemente sobre una superficie plana y deje que se mueva libremente durante al menos un minuto. Observa su patrón de movimiento.

Puntúa cero cuando el ratón se mueve rápido y linealmente. Anota uno por la tendencia a girar hacia un lado, pero no en círculos cerrados. Marca dos para círculos cerrados inconstantes a un lado.

Anota tres para círculos cerrados constantes a un lado y anota cuatro para pivotar, balancearse o no moverse en absoluto. Ahora pruebe la simetría del cuerpo. Continúe desde la prueba cuatro y deje que el mouse se mueva libremente sobre la superficie plana.

Observa su eje de la nariz a la cola. Puntúa cero para la postura normal, el tronco elevado desde el banco y la cola recta. Puntúa uno para una ligera asimetría cuando el cuerpo se dobla ligeramente hacia un lado y la cola está doblada distalmente.

Puntúa dos para asimetría moderada cuando el cuerpo se inclina o se dobla hacia el lado contralesional y la cola está doblada proximalmente. Puntúa tres para la asimetría prominente cuando el cuerpo está doblado, un lado se encuentra en el banco y la cola está claramente doblada. Y anota cuatro por asimetría extrema cuando el cuerpo está doblado y un lado está constantemente en el banco.

Ahora, para la prueba seis, continúe desde la prueba cinco y observe su marcha. Compruebe si hay déficits motores en la marcha. Puntúe cero para la marcha normal cuando las extremidades son flexibles, simétricas y rápidas.

Puntúa uno para la marcha rígida, inflexible y lenta sin cojear. Puntúa dos para una clara cojera con movimientos asimétricos. Anota tres por temblar, derrapar o caerte después de un empujón suave.

Anota cuatro por no caminar espontáneamente. Ahora pruebe el círculo obligatorio. Sostén al ratón por la base de su cola y elévalo ligeramente de la superficie para que camine sobre sus extremidades delanteras.

Observa su movimiento. Puntuación cero para el movimiento lineal normal. Anota uno por la tendencia a girar hacia un lado.

Anota dos cuando el ratón da vueltas hacia un lado en círculos cerrados completos. Anota tres cuando gira y su movimiento es lento. Y anotar cuatro cuando el ratón no avanza y la parte delantera del tronco queda en el banco.

Aquí describimos cómo ejecutar la prueba de postura. Coloque el mouse en la palma de su mano como se muestra en el video y gírelo suavemente hacia atrás y hacia adelante. Observe cómo el mouse mantiene su posición vertical y se equilibra contra las fuerzas laterales, su cuerpo no entra en contacto con la palma o los dedos.

Las imágenes de las diferentes puntuaciones de esa prueba no son útiles, ya que su puntuación depende en gran medida de la detección de movimientos rápidos y sutiles del ratón que se sienten con la mano y las señales visuales no son suficientes para la puntuación. Describimos cada partitura en forma de texto para su comodidad. Ahora evalúe la colocación de las extremidades delanteras.

Sostenga el mouse desde su espalda o desde la base de su cola y diríjalo hacia el rayo como un objetivo a alcanzar. Observe si hay un alcance simétrico. Luego, una vez que agarre la viga, aléjela suavemente y observe la liberación simétrica de las extremidades anteriores.

Puntúe cero para la extracción y liberación simétricas. Puntúa uno para cualquier asimetría. Ahora pruebe el déficit sensoriomotor de las extremidades anteriores.

Sostenga al ratón por la espalda como se muestra y estimule las patas delanteras sucesivamente con una punta fina. Puntúe cero para los movimientos normales de agarre rápido. Puntúe uno para el agarre ausente o claramente tardío de la pata delantera contralesional.

A continuación, pruebe su haz caminando. Coloque el mouse en la viga con su eje nariz-cola paralelo a ella y permita que se equilibre o camine sobre la viga. Observe el equilibrio, la paresia de las extremidades y las caídas.

Mantenga siempre la mano debajo del animal en caso de que se caiga. Puntúa cero cuando el ratón se equilibra con una postura firme y camina hacia un lado de la viga. Anota uno cuando se agarra al costado de la viga y no camina sobre él.

Tenga en cuenta que puede necesitar algún tiempo para mantener el equilibrio aún en la viga. Anota dos cuando una extremidad se cae de la viga. Anota tres cuando dos extremidades se caigan de la viga.

Puntúa cuatro cuando el ratón intenta mantener el equilibrio en la viga pero se cae después de 40 segundos. Tenga en cuenta que en esta prueba se debe observar al ratón durante un máximo de 60 segundos. Puntúa cinco cuando haya una caída que ocurra entre 20 y 40 segundos.

Y anota seis cuando no hace ningún intento de equilibrarse o colgarse de la viga. Evalúa la sensación de los bigotes. Coloque el ratón sobre una mesa de trabajo abierta y estimule con éxito sus bigotes con un bastoncillo de algodón fino y de punta larga.

Viniendo desde un ángulo ciego, observe su respuesta de giro. Puntúe cero para el giro rápido normal con estimulación bilateral. Puntúe uno para una respuesta contralesional más lenta.

Puntuación dos para ausencia de respuesta contralesional. Puntúe tres para la ausencia de respuesta contralesional y la respuesta ipsilesional más lenta. Y puntúa cuatro para la respuesta ausente bilateral.

Prueba de habilidad para escalar. Coloque el ratón en el centro de una superficie recubierta de goma en un ángulo de 45 grados y observe su respuesta mientras intenta trepar. Puntúa cero cuando el ratón sube rápidamente a la parte superior de la superficie.

Anota uno cuando sube con tensión y hay debilidad en las extremidades. Anota dos cuando se aferra a la pendiente y no resbala ni sube. Anota tres cuando se deslice por la pendiente a pesar de hacer un esfuerzo para evitar la caída.

Y anota cuatro cuando se desliza sin hacer ningún esfuerzo para evitar la caída. El protocolo de la unidad de ictus de ratón ha respaldado de forma reproducible la supervivencia de los ratones tras la oclusión filamentosa de la arteria cerebral media, manteniendo una tasa de supervivencia del 80%El ESS focal destaca en la detección de déficits neurológicos, la captura de la recuperación y el mantenimiento de la sensibilidad hasta seis meses después del ictus. Como complemento al ESS focal, puede utilizar una prueba de peldaños de escalera para detectar y cuantificar la debilidad de las extremidades anteriores y traseras durante un máximo de seis meses.