La eliminación parcial inmediata de los complejos cúmulo-ovocito: un enfoque refinado para la observación rápida de la fertilización in vitro

Nuestra investigación se centra en mejorar los resultados de la FIV mediante la evaluación de si la eliminación parcial inmediata de las compresiones de los ovocitos del cúmulo mejora la fertilización. La eficiencia de la observación afecta la raza de fertilización y la calidad del embrión, y optimiza los procedimientos de laboratorio. Nuestro objetivo es perfeccionar las técnicas de FIV para obtener mejores resultados clínicos.

Hemos establecido que en la extirpación parcial medial del cúmulo los ovocitos se comprime significativamente, lo que mejora la eficiencia de la observación de la fecundación en FIV. Esto conduce a mejorar el tiempo en la evaluación de los eventos de fertilización y potencialmente optimizar la calidad del embrión y los resultados de la FIV. Nuestro protocolo mejora la eficiencia de la FIV al reducir el tiempo de entrega y minimizar la exposición ambiental y potencialmente mejorar la calidad del embrión.

Ofrece un enfoque simplificado y eficaz en comparación con las técnicas tradicionales. Para empezar, coloque las placas de recogida de ovocitos en la incubadora a 37 grados centígrados durante la noche. Incubar 12 mililitros de medio manipulador de folículos en tubos de ensayo de fondo redondo de 14 mililitros a 37 grados centígrados durante la noche.

A continuación, transfiera los tubos a la gradilla de tubos de ensayo precalentada 30 minutos antes de la extracción de ovocitos. A continuación, agregue nueve mililitros de medio manipulador de folículos a un tubo de ensayo de fondo redondo de 14 mililitros e incube a 37 grados centígrados durante la noche. El día de la extracción de ovocitos, transfiera 4,5 mililitros del medio a una placa de recolección de ovocitos preincubada cubierta con dos mililitros de aceite de parafina al 100%.

A continuación, añada 4,5 mililitros de medio de fertilización a una placa de recogida de ovocitos e incube a 37 grados centígrados durante la noche. Después, añade un mililitro de medio de fertilización a un plato de seis centímetros cubierto con aceite 100% parafina. Para desafilar y redondear las puntas de las pipetas de vidrio pasteur, quémelas en una lámpara de alcohol durante unos cinco segundos.

Coloque un cabezal de succión en la punta de las pipetas pasteur para que pueda tocar el fondo del plato sin rayarse. Enjuague el vidrio más allá de sus pipetas en platos de 10 centímetros con medio de manipulación de folículos. Brevemente, use una aguja de calibre 17 para recuperar los ovocitos bajo la guía de una ecografía transvaginal.

Vierta el líquido folicular recogido en el tubo de ensayo de fondo redondo de 14 mililitros en un plato de 10 centímetros. Coloque el plato en una plataforma de temperatura constante. Observar el OCCC bajo un microscopio estereoscópico para confirmar la presencia de ovocitos y evaluar su madurez.

Confirmar si hay ovocitos en el OCCC y hacer una evaluación preliminar de la madurez de los ovocitos. Prepare previamente una pipeta de aspiración de silicona con una pipeta pasteur redonda pulida a la llama. Aspire el OCCC mientras eleva suavemente la placa de cultivo en la posición de nueve a 10:00 con el dedo anular izquierdo e inclinándola unos 15 grados hacia la izquierda.

Mientras escupe el OCCC aspirado en la posición de las 11:00 del plato, se alarga suavemente horizontalmente hacia la derecha. A continuación, observe el tamaño de las células de la granulosa alrededor del OCCC expandido. Ahora, utilice una pipeta pasteur para eliminar suavemente el exceso de células de granulosis con un corte rápido hacia abajo en la ubicación adecuada del OCCC alargado.

Transfiera el OCCC cortado a un plato de recolección, que contenga la solución de lavado de OCCC. Vierta el líquido folicular restante en un recipiente de muestra estéril. Para comenzar, evalúe la concentración, la motilidad y la morfología de los espermatozoides de la muestra de semen recolectada bajo un microscopio óptico.

A continuación, transfiera el pellet de esperma a un nuevo tubo de centrífuga y lávelo dos veces en el medio de fertilización. Incubarlos al 6% de dióxido de carbono y a 37 grados centígrados hasta que se necesiten. Después de eliminar el exceso de células de granulosis, agregue de seis a ocho OCCC y un mililitro de medio de fertilización a la placa de fertilización.

Inseminar los OCCC con espermatozoides modales en una sola gota, aproximadamente dos o tres horas después de la recuperación en la placa de fertilización. Para la fertilización a corto plazo, co-incube los OCCC con espermatozoides durante cuatro a seis horas. Después de la incubación, se extraen mecánicamente los cúmulos que rodean los ovocitos.

Aspirar los ovocitos con una pipeta con un diámetro interior ligeramente inferior al de los ovocitos para garantizar la eliminación completa de las células. Para confirmar la fertilización, observe la presencia de dos cuerpos polares. Los ovocitos, que muestran un segundo cuerpo polar, se consideran fecundados.

Para una fertilización regular, retire las células del cúmulo con las pipetas después de 18 a 20 horas de co-incubación para evaluar la fertilización. Cultive los ovocitos fertilizados durante tres a cinco días después de la extracción de ovocitos. Evaluar la fecundación a las 20 horas post-inseminación para determinar el número de pronúcleos.

Posteriormente, se cultiva cada cigoto individualmente en una gota mediana y se transfieren los embriones después de la fecundación a un medio de escisión. Transfiera los embriones del día tres al medio de blastocitos y evalúe el día cinco. Indique los datos continuos como la media y la desviación estándar, y exprese los datos ordinales como proporciones.

De las 47 pacientes que recibieron inseminación a corto plazo, no se observaron diferencias significativas en cuanto a la edad de las pacientes y el número de ovocitos recuperados. El tiempo promedio del procedimiento fue significativamente más corto en la extracción parcial del grupo OCC, en comparación con el grupo control, a pesar de que no se encontraron diferencias significativas en la tasa de escisión, la tasa óptima de embriones y la tasa óptima de blastocitos. En las pacientes sometidas a FIV tradicional, se observaron similitudes en la edad de las pacientes y en el número de ovocitos recuperados entre los dos grupos.

Aunque se observó un tiempo promedio de operación ligeramente más corto en la eliminación parcial del grupo OCCC, no se evidenció una diferencia estadísticamente significativa. Al igual que en el grupo anterior, no se identificaron discrepancias significativas en la tasa de escisión, la tasa óptima de embriones y la tasa óptima de blastocitos.