Name: Entrega de nanopartículas de una carga útil de oligonucleótidos en un modelo animal de glioblastoma multiforme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-09-27T13:45:00.000+00:00
Duration: 9 min 2 s
Description: Aprende a entregar nanopartículas de óxido de hierro con carga de oligonucleótidos en modelos de glioblastoma multiforme. Este método permite cruzar la barrera hematoencefálica y acumular fármacos en el tumor.

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<meta charset="utf8"></head><body>Nanopartículas de óxido de hierro para la administración de terapia guiada por imágenes en el glioblastoma murino

<ol><li>Tan, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+glioblastoma%3A+State+of+the+art+and+future+directions%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J+Clin%22%5BJournal%5D)">Management of glioblastoma: State of the art and future directions.</a> CA Cancer J Clin. 70 (4), 299-312 (2020).</li>
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<table><tbody><tr><td>Ratones "J:NU" desnudos atímicos</td><td>Laboratorio Jackson</td><td>RRID:IMSR_JAX:007850</td><td>Modelo de ratón inmunodeprimido</td></tr><tr><td>0.25% Tripsina</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td>Reactivo de cultivo celular para tubo</td>de</tr><tr><td>microcentrífuga U251 1.7 mL</td><td>DOT Scientific</td><td>RN1700-GMT</td><td>Para recolección de tejidos</td></tr><tr><td>10 y micro; L, Jeringa Neuros, Modelo 1701 RN, calibre 33, Punta Estilo 4</td><td>Hamilton</td><td>65460-06</td><td>Jeringa para la implantación intracraneal de células tumorales</td></tr><tr><td>3M Vetbond</td><td>3M</td><td>1469SB</td><td>Adhesivo tisular para el cierre de la zona quirúrgica</td></tr><tr><td>4% Paraformaldehído&nbsp;</td><td>Thermo Scientific</td><td>J199943-K2 Solución de fijación de</td><td>tejidos</td></tr><tr><td>Toallita con alcohol isopropoilo al 70 %</td><td>Cardinal</td><td>MW-APL</td><td>Toallita antiséptica tópica para la implantación de tumores y la inyección de venas de cola</td></tr><tr><td>Aperio Versa</td><td>Leica</td><td></td><td>Para el escaneo de portaobjetos de secciones de tejido teñidas</td></tr><tr><td>Betadine Surgical Scrub Purdue 6761815101</td><td></td><td></td><td>Antiséptico tópico para la implantación de</td></tr> <tr><td>tumoresBioSpec 70/30</td><td>Bruker</td><td></td><td>Escáner de resonancia magnética</td></tr><tr><td>Cera</td> ósea <td>Medline DYNJBW25</td><td></td><td>Cera ósea para sellar el sitio de implantación</td></tr><tr><td>Fresas para Micro taladro</td><td>F.S.T.</td><td>19007-05</td><td>Fresa de perforación utilizada para hacer un agujero en el cráneo para la implantación de tumores</td></tr><tr><td>DAPI Fluoromount-G</td><td>SouthernBiotech</td><td>0100-20 Medios de</td><td>montaje de tejidos que contienen tinción de DAPI</td></tr><tr><td>Dulbecco' s Medio Eagle modificado (DMEM)</td><td>Gibco</td><td>11995-065</td><td>Medios de cultivo celular para pinzas</td></tr><tr><td>de Graefe extrafinas</td> U251 <td>F.S.T.</td><td>11150-10</td><td>Herramienta quirúrgica para la implantación de tumores Suero</td></tr><tr><td>fetal bovino</td><td>Corning</td><td>35-010-CV Suplemento de</td><td>medios de cultivo celular para U251</td></tr><tr><td>Tijeras finas - Afiladas 10,5 cm</td><td>F.S.T.</td><td>14060-10</td><td>Herramienta quirúrgica para la implantación de tumores</td></tr><tr><td>Glydo (lidocaína)</td><td>Sagent</td><td>673-76</td><td>Analgésico tópico para el sitio quirúrgico</td></tr><tr><td>Ideal Micro Drill</td><td>CellPoint Scientific</td><td>67-1200A</td><td>Taladro utilizado para hacer un agujero en el cráneo para la implantación de tumores</td></tr><tr><td>Jeringa de insulina 1CC 29G X 1/2 "</td><td>Becton, Dickinson</td><td>324704</td><td>Jeringa para inyección de D-Luciferina e inyección en la vena de cola de nanopartículas</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Covetrus</td><td>11695067772</td><td>Anethesia</td></tr><tr><td>Vaporizador de isoflurano</td><td>SOMNI Scientific</td><td>VS6002</td><td>Aparato de anestesia</td></tr><tr><td>IVIS SpectrumCT Sistema de imagen in vivo</td><td>PerkinElmer/Revvity</td><td>128201</td><td>Escáner de imágenes de bioluminiscencia y fluorescencia</td></tr><tr><td>IVISbrite D-Luciferina Sal de potasio</td><td>PerkinElmer/Revvity</td><td>122799-100MG</td><td>Sustrato para la obtención de imágenes de bioluminiscencia</td></tr><tr><td>Ketaset (Ketamina)</td><td>Zoetis</td><td>10004027</td><td>Anestésico para la cirugía de implantación de tumores</td></tr><tr><td>Ketofen (Ketoprofeno)</td><td>Zoetis</td><td></td><td>10004031 Analgésico para la cirugía de implantación de tumores</td></tr><tr><td>Leica CM1950</td><td>Leica</td><td>CM1950</td><td>Para la criosección de muestras incrustadas en OCT</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Gibco</td><td>14190-144</td><td>Reactivo de cultivo celular y solución de suspensión celular para la implantación de U251</td></tr><tr><td>Penicilina-estreptomicina</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td>Antibiótico para medios de cultivo celular para U251</td></tr><tr><td>Pomada veterinaria Puralube</td><td>MWI Veterinary</td><td>27505</td><td>Pomada oftálmica para los ojos para la protección durante la implantación del tumor</td></tr><tr><td>Ruler</td><td>F.S.T.</td><td>18000-30</td><td>Se utiliza para medir el sitio de perforación para la implanación</td></tr><tr><td>Tissue-Tek Cryomold&nbsp; Intermedio 15 x 15 x 5 mm</td><td>Sakura</td><td>4566</td><td>Molde de recolección para la recolección de muestras de tejido</td></tr><tr><td>Tissue-Tek&nbsp;O.C.T. Compound</td><td>Sakura</td><td>4583</td><td>Compuesto de congelación para la recolección</td></tr><tr><td>de muestras de tejido U-251 MG línea celular</td><td>humana Millapore Sigma 9063001</td><td></td><td>línea celular de glioblastoma humano</td></tr><tr><td>Solución inyectable de xilacina, 100 mg/ml</td><td>Covetrus</td><td>1XYL006</td><td>Paralítico para cirugía de implantación tumoral</td></tr></tbody></table>

entrega de nanopartículas de una carga útil de oligonucleótidos en un modelo animal de glioblastoma multiforme

Nanoparticle Delivery of an Oligonucleotide Payload in a Glioblastoma Multiforme Animal Model

Se sintetizó y caracterizó MN-anti-miR10b, como se describió anteriormente11. La microscopía electrónica de transmisión de MN-anti-miR10b muestra la morfología y polidispersidad de la nanoplataforma (Figura 1B). Esta nanoplataforma tiene un tamaño promedio de 25,12 ± 0,34 nm con un potencial zeta de 13,18 ± 1,47 mV (Figura 1C,D). En estos estudios, se implantaron ortotópicamente células de glioblastoma humano U251 a ratones atímicos desnudos siguiendo el protocolo descrito anteriormente. Se realizaron inyecciones intravenosas sistémicas de MN-anti-miR10b a 20 mg Fe/kg. Los ratones fueron sacrificados y los tejidos se recolectaron 7 días después de la dosis final del nanofármaco. Las señales de fluorescencia y bioluminiscencia Cy5.5 en ratones inyectados con MN-anti-miR10b mostraron una clara colocalización (Figura 2A,B), lo que indica la entrega de las nanopartículas al tumor, mientras que los ratones de control no mostraron señal de fluorescencia. Las imágenes de fluorescencia ex vivo mostraron la localización de las nanopartículas en los principales órganos de eliminación, como el hígado y los riñones, lo que se espera para este tipo de nanopartículas (Figura 2C). En un estudio separado, a los ratones se les implantaron ortotópicamente células GBM, como se mencionó anteriormente, y se les sometió a imágenes de resonancia magnética in vivo. Se obtuvieron imágenes ponderadas deT2* y mapas deT2* antes de la administración de las nanopartículas y 24 h después de una dosis única de 20 mg Fe/kg. Una disminución característica en la señal de resonancia magnética ponderada enT2 demuestra el potencial de MN-anti-miR10b como agente de contraste de resonancia magnética para atravesar la barrera hematoencefálica y su acumulación en la región tumoral (Figura 3). Después de las imágenes in vivo, se realizó una microscopía de fluorescencia para verificar aún más la entrega de nanopartículas al tumor. Como se describió anteriormente, los tejidos se seccionaron y se prepararon para la microscopía con tinción con DAPI. Se mostró una señal de fluorescencia Cy5.5 en la región tumoral, confirmando el parto (Figura 4).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66986/66986fig01.jpg"> Figura 1. Caracterización de MN-anti-miR10b. (A) Una estructura esquemática de un MN-anti-miR10b. La nanoplataforma consiste en un núcleo de óxido de hierro cubierto con dextrano, marcado con un colorante óptico Cy5.5 y conjugado con oligonucleótido terapéutico (anti-miR10b). Creado con BioRender.com. (B) Microscopía electrónica de transmisión de MN-anti-miR10b. (C) El tamaño hidrodinámico de la construcción es de 25,12 ± 0,34 nm. (D) El potencial zeta de MN-anti-miR10b es de 13,18 ± 1,47 mV. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66986/66986fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66986/66986fig02.jpg"> Figura 2. Estudios in vivo y ex vivo en modelo GBM. (A) Las imágenes de bioluminiscencia in vivo (izquierda) y las imágenes de fluorescencia (derecha) muestran la colocalización de la señal de nanopartículas magnéticas en la región tumoral. (B) Las imágenes de bioluminiscencia y fluorescencia ex vivo de cerebros extirpados confirman la colocalización de la señal. (C) La biodistribución de los órganos muestra acumulación en los principales órganos de eliminación. B: Cerebro; H: Corazón; Lu: Pulmones; Li: Hígado; S: Bazo; K: Riñones; M: Músculo; (n=6 para todos los grupos). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66986/66986fig02large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66986/66986fig03.jpg"> Figura 3. In vivo Resonancia magnética en modelo GBM. Imágenes ponderadas T2* (fila superior) y mapas T2* (fila inferior) obtenidas antes (izquierda) y 24 h después de la inyección (derecha) de MN-anti-miR10b. La disminución de la intensidad de la señal en la imagen posterior a la inyección es indicativa de acumulación de óxido de hierro (n = 3). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66986/66986fig03large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66986/66986fig04.jpg"> Figura 4. Microscopía de fluorescencia ex vivo de tejidos tumorales. Las imágenes microscópicas representativas muestran la acumulación de nanopartículas. Azul - DAPI, Magenta - Cy5.5. Barra de escala = 100 μm; (n=6 para todos los grupos). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66986/66986fig04large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>

Entrega de nanopartículas de una carga útil de oligonucleótidos en un modelo animal de glioblastoma multiforme

Glioblastoma multiforme (GBM) is the most common and aggressive form of primary brain malignancy for which there is no cure. The blood-brain barrier is a ...

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Aprende a entregar nanopartículas de óxido de hierro con carga de oligonucleótidos en modelos de glioblastoma multiforme. Este método permite cruzar la barrera hematoencefálica y acumular fármacos en el tumor.

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