Name: Un modelo murino de transformación hemorrágica inducida por hiperglucemia aguda combinada con isquemia focal transitoria (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 35 s
Description: Aprende a establecer un modelo murino de transformación hemorrágica mediante oclusión/reperfusión de la arteria cerebral media en ratones C57BL/6 con hiperglucemia aguda. Este protocolo reproducible ofrece alta estabilidad y baja mortalidad para investigación preclínica en neurociencia.

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<meta charset="utf8"></head><body>Transformación hemorrágica mejorada por hiperglucemia en el accidente cerebrovascular inducido por tMCAO

<ol><li>Patel, P., Yavagal, D., Khandelwal, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperacute+management+of+ischemic+strokes%3A+JACC+focus+seminar%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Hyperacute management of ischemic strokes: JACC focus seminar.</a> J Am Coll Cardiol. 75 (15), 1844-1856 (2020).</li>
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</ol>

<a href="https://app.jove.com/t/6615">This corrects</a> the article <a href="https://dx.doi.org/10.3791/67371">10.3791/67371</a>

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/67371">A Mouse Model of Hemorrhagic Transformation Induced by Acute Hyperglycemia Combined with Transient Focal Ischemia</a>. The Protocol section was updated.

Erratum: A Mouse Model of Hemorrhagic Transformation Induced by Acute Hyperglycemia Combined with Transient Focal Ischemia

<table><tbody><tr><td>Cloruro de 2,3,5-trifeniltetrazolio (TTC)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>108380</td><td>El colorante para la tinción TTC</td></tr><tr><td>Placa de cultivo de 24 pocillos</td><td>Corning Incorporated</td><td>CLS3527</td><td>El recipiente para la tinción TTC Inyección de</td></tr><tr><td>glucosa al 30%</td><td>Kelun Pharmaceutical</td><td>H42021188</td><td>Inducción de hiperglucemia aguda</td></tr><tr><td>Paraformaldehído al 4% Wuhan</td><td>Servicebio Technology Co., Ltd. </td><td>G1101</td><td>Fijación tisular</td></tr><tr><td>5.0 Sutura absorbible de ácido poliglicólico</td><td>Jinhuan Medical Co., Ltd</td><td>KCR531</td><td>Equipo para cirugía</td></tr><tr><td>placa de cultivo de 96 pocillos</td><td>Corning Incorporated</td><td>CLS3596</td><td>Máquina de anestesia de medición de contenido EB</td></tr><tr><td></td><td>Midmark Corporation</td><td>VMR</td><td>Anestesia para</td></tr><tr><td>animales Medio de montaje antidecoloración con DAPI</td><td>Beyotime Biotech</td><td>P0131</td><td>Soporte para secciones de tejido</td></tr><tr><td>Automatización-deshidratación de tejidos&nbsp; Máquina </td><td>Leica Biosystems</td><td>TP1020</td><td>Deshidratar tejido</td></tr><tr><td>Microscopía confocal</td><td>Leica Biosystems</td><td>STELLARIS 5</td><td>Adquisición de imágenes</td></tr><tr><td>Gel de diclofenaco sódico</td><td>MaYinglong Pharmaceutical</td><td>H10950214</td><td>Analgesia para</td></tr><tr><td>animales Solución de tinción de eosina</td><td>Servicebio Technology</td><td>G1001</td><td>El colorante para H& Tinción E</td></tr><tr><td>Evans Blue</td><td>Aladdin</td><td>E104208</td><td>EB tinción</td></tr><tr><td>Gel ocular</td><td>Guangzhou Pharmaceutical</td><td>H44023098</td><td>Material para cirugía</td></tr><tr><td>Fitc-dextrano</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>60842-46-8</td><td>Evaluación de la permeabilidad BBB</td></tr><tr><td>Microscopio de fluorescencia</td><td>Olympus</td><td>BX51</td><td>Adquisición de imágenes</td></tr><tr><td>Micrótomo congelado</td><td>Leica Biosystems</td><td>CM1900</td><td>Uso para secciones congeladas</td></tr><tr><td>Glucómetro</td><td>YuWell</td><td>580</td><td>Medición de glucosa en sangre</td></tr><tr><td>Solución de tinción de hematoxilina</td><td>Servicebio</td><td>G1004</td><td>El colorante para H& E tinción</td></tr><tr><td>yodada</td><td>Lircon</td><td>20020059</td><td>Material para cirugía</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Rwd Life Science</td><td>R510-22-10</td><td>Anestesia para animales</td></tr><tr><td>Medidor de flujo sanguíneo láser doppler</td><td>Moor Instruments</td><td>moorVMS</td><td>Monitoreo del flujo sanguíneo</td></tr><tr><td>MCAO Suturas Rwd</td><td>Life Science</td><td>907-00023-01</td><td>Material para cirugía</td></tr><tr><td>Meloxicam</td><td>Boehringer-Ingelheim</td><td>J20160020</td><td>Analgesia para animales</td></tr><tr><td>Kit de instrumentos microquirúrgicos</td><td>Rwd Life Science</td><td>SP0003-M</td><td>Equipo para cirugía</td></tr><tr><td>Microtomo</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>HM325</td><td>Producción de secciones de tejidos</td>Cuchilla de</tr><tr><td>micrótomo</td><td>Leica Biosystems</td><td>819</td><td>Producción de secciones de tejidos</td></tr><tr><td>Ungüento de mupirocina</td><td>GlaxoSmithKline</td><td>H10930064</td><td>Antiinfeccioso para animales</td></tr><tr><td>Bálsamo neutro</td><td>Absin Bioscience</td><td>abs9177</td><td>Sello para H& Centro de inclusión de parafina de tinción</td></tr><tr><td></td><td>E Thermo Fisher Scientific</td><td>EC 350</td><td>Produce bloques de parafina</td></tr><tr><td>Pentobarbital sódico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3761</td><td>Eutanasia para animales</td></tr><tr><td>Solución salina tamponada con fosfato</td><td>Beyotime Biotech</td><td>C0221A</td><td>Enjuague para la sección de tejido</td></tr><tr><td>Escáner</td><td>EPSON</td><td>V330</td><td>Afeitadora</td></tr> <tr><td></td><td>de barrido de tejidosElectrodomésticos Shenzhen Codos Co., Ltd.</td><td>CP-9200</td><td>Equipo para cirugía</td></tr><tr><td>Espectrofotómetro</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>1510-02362 Medición del contenido de</td><td>EB</td></tr><tr><td>Solución de sacarosa</td><td>Shanghai Macklin Biochemical</td><td>57-50-1</td><td>Deshidratación para tejidos</td></tr><tr><td>Tissue-Tek O.C.T. Compound</td><td>Sakura</td><td>4583</td><td>Medio de inclusión tisular</td></tr><tr><td>Ácido tricloroacético</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T6399</td><td>EB Medición de contenido</td></tr></tbody></table>

un modelo murino de transformación hemorrágica inducida por hiperglucemia aguda combinada con isquemia focal transitoria

A Mouse Model of Hemorrhagic Transformation Induced by Acute Hyperglycemia Combined with Transient Focal Ischemia

El procedimiento experimental de este estudio se ilustra en la Figura 1. Brevemente, los ratones se sometieron a MCAO inducida por oclusión de hilos durante 60 minutos, seguido de reperfusión. La glucosa (30% en solución salina normal, 7,2 mL/kg de peso corporal) se administró por vía intraperitoneal 15 min antes de la MCAO. Los niveles de glucosa en sangre se midieron al inicio del estudio (antes de la inyección de glucosa), inmediatamente después de la MCAO, y en el momento de la reperfusión. Después de 24 h de reperfusión, los ratones fueron sacrificados y se recolectaron tejidos cerebrales para analizar el volumen del infarto, la fuga de la barrera hematoencefálica y la histopatología. Como se muestra en la Figura 2, los cuatro grupos mostraron niveles basales similares de glucosa en sangre. Sin embargo, los ratones que recibieron inyecciones de glucosa mostraron niveles de glucosa en sangre significativamente elevados en comparación con los de los grupos de solución salina. 
Como se muestra en la Figura 3A, no se observó ningún infarto visible en los cortes de cerebro en el grupo Sham + solución salina o Sham + glucosa, mientras que el infarto cerebral marcado se reveló claramente mediante la tinción de TTC en los cortes de cerebro de ambos grupos de MCAO. Además, los ratones inyectados con glucosa mostraron un mayor volumen de infarto en comparación con los inyectados con solución salina normal en los diferentes grupos de MCAO. De acuerdo con el análisis estadístico, el volumen de infarto fue de 20,8% ± 0,8% y 45,1% ± 1,6% en el grupo MCAO + suero fisiológico y MCAO + glucosa, respectivamente (Figura 3B).
Las observaciones macroscópicas no revelaron hemorragias en el hemisferio encefálico izquierdo ni en el grupo MCAO + solución salina ni en el grupo Sham + solución salina/glucosa. Por el contrario, se observaron múltiples hemorragias punteadas en el hemisferio cerebral isquémico del grupo MCAO + glucosa (Figura 4A). Las imágenes de escaneo de secciones coronales consecutivas del cerebro mostraron que las hemorragias en el grupo MCAO + glucosa se distribuyeron dentro de las regiones de infarto de la corteza y el cuerpo estriado (Figura 4A). Además, el análisis histológico mediante tinción con H&amp;E demostró una infiltración significativa de células sanguíneas en las regiones de infarto de la corteza y el cuerpo estriado en el grupo MCAO+glucosa (Figura 4B). Por el contrario, no se observó infiltración de células sanguíneas ni en el grupo MCAO+solución salina ni en el grupo Sham + solución salina/glucosa.
Como se ilustra en la Figura 5A, no se observó ninguna fuga de EB en los trozos de cerebro del grupo Sham + glucosa. Sin embargo, ambos grupos de MCAO mostraron una tinción azul distintiva debido a la fuga de EB. Además, en comparación con los ratones inyectados con solución salina, los inyectados con glucosa mostraron una mayor permeabilidad a la EB a las 24 h después de la MCAO. En comparación con el grupo Sham + solución salina, el grupo MCAO + solución salina mostró un aumento significativo en el contenido de EB (4,2 μg/g ± 1,8 μg/g frente a 28 μg/g ± 0,7 μg/g, p &lt; 0,01), que se elevó aún más en el grupo MCAO + glucosa (28 μg/g ± 0,7 μg/g frente a 65,5 μg/g ± 6,0 μg/g, p &lt; 0,01) (Figura 5B). Como se ilustra en la Figura 5C, la fuga de FITC-Dextrano fue más intensa en la corteza cerebral isquémica y el cuerpo estriado del grupo MCAO + glucosa en comparación con el grupo MCAO + solución salina.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67371/67371fig01.jpg"> 
Figura 1: Diagrama esquemático del procedimiento experimental. Los ratones fueron inyectados intraperitonealmente con glucosa al 30% o solución salina antes de la cirugía de MCAO, y la glucosa en sangre se controló durante el procedimiento. 24 h después de la reperfusión, los ratones fueron sacrificados para su análisis anatomopatológico e histológico. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67371/67371fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67371/67371fig02.jpg"> 
Figura 2: Cambios en los niveles de glucosa en sangre en varios momentos después de la inyección de glucosa al 30%. Los datos se presentan como media ± DE. N = 10-20. p &lt; 0,001 en comparación con el grupo Sham + solución salina. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67371/67371fig02large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67371/67371fig03.jpg"> 
Figura 3: La hiperglucemia empeoró el daño cerebral isquémico 24 h después de la reperfusión. (A) Imágenes representativas de cortes coronales teñidos con TTC, con tejido cerebral normal de color rojo rosado y áreas de infarto isquémico de color blanco grisáceo. Barra de escala = 5 mm. (B) Análisis estadístico del volumen del infarto. Los datos se presentan como media ± DE. N = 3. p &lt; 0,001 en comparación con el grupo Sham + solución salina, ##p &lt; 0,01 en comparación con el grupo MCAO + solución salina. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67371/67371fig03large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67371/67371fig04.jpg"> 
Figura 4: La hiperglucemia aumentó el riesgo de HTA a las 24 h después de la reperfusión. (A) Imágenes representativas de observación macroscópica y cortes coronales. El asterisco indicaba los focos hemorrágicos visibles. Barra de escala = 5 mm. (B) Imágenes representativas del medio cerebro teñidas con H&amp;E (arriba) e imágenes ampliadas (abajo). Barra de escala = 200 μm para imágenes de medio cerebro; Barra de escala = 20 μm para imágenes ampliadas. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67371/67371fig04large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67371/67371fig05.jpg"> 
Figura 5: La hiperglucemia agravó la disrupción de la BHE a las 24 h después de la reperfusión. (A) Imágenes representativas de la fuga azul de Evans. Barra de escala = 5 mm. (B) Análisis estadístico de la fuga de azul de Evans en los hemisferios isquémicos. Los datos se presentan como media ± DE, N = 3, **p &lt; 0,01, ***p &lt; 0,001 en comparación con el grupo Sham+solución salina, ##p &lt; 0,01 en comparación con el grupo MCAO + solución salina. (C) Imágenes representativas de la corteza cerebral y el cuerpo estriado isquémicos teñidos con FITC-Dextrano. Barra de escala = 10 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67371/67371fig05large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>

Un modelo murino de transformación hemorrágica inducida por hiperglucemia aguda combinada con isquemia focal transitoria

Hemorrhagic transformation (HT) is a serious complication that can occur as a result of thrombolytic therapy following ischemic stroke (IS), and it poses ...

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Este video muestra el procedimiento de replicar un accidente cerebrovascular trombótico en un modelo de ratón mediante el bloqueo de la arteria carótida común derecha y la exposición del ratón a un entorno con poco oxígeno. Este proceso reduce el flujo de sangre y oxígeno al cerebro, lo que provoca la formación de coágulos sanguíneos y daño cerebral.

Inducción de accidente cerebrovascular trombótico a través de hipoxia e isquemia en un modelo de ratón

Un modelo de ratón estándar de la hemorragia subaracnoidea por el Círculo de Willis intraluminal perforación se describe. Perforación de vasos y hemorragia subaracnoidea son monitoreados por el monitoreo de la presión intracraneal. Además diversos parámetros vitales se registran y se controlan para mantener las condiciones fisiológicas.

Un modelo murino de hemorragia subaracnoidea

Varios modelos murinos de oclusión de la arteria cerebral media (MCAO) son ampliamente utilizados en la investigación experimental cerebro. Aquí, nos demuestran el modelo de transcraneal permanente MCAO distal que produce infarto cortical consistente de un tamaño correspondiente a los daños impuesta por la mayoría de los accidentes cerebrovasculares isquémicos humanos.

Carrera Modelado en ratones: Coagulación permanente de la arteria cerebral media Distal

Los modelos de ictus tromboembólicos son herramientas vitales para optimizar la terapia de recanalización. Presentamos un modelo murino de ictus trombótico basado en el insulto hipóxico-isquémico cerebral transitorio (tHI), que desencadena trombosis e infarto, y responde favorablemente a la fibrinólisis mediada por el activador tisular del plasminógeno (tPA) en una ventana terapéutica similar a la de los pacientes con ictus.

Un accidente cerebrovascular trombótico Basado En transitoria cerebral por hipoxia-isquemia Modelo

Describimos un modelo de ratón de accidente cerebrovascular inducido por la oclusión de la arteria cerebral media utilizando una sutura recubierta de silicona. El protocolo se puede aplicar para inducir una oclusión permanente o una isquemia temporal, seguida de reperfusión.

La inducción de ictus isquémico y la isquemia-reperfusión en ratones con la técnica de oclusión de la arteria Medio y Visualización de un infarto Área

Entre trasplante de órganos sólidos abdominales, injertos pancreáticos son propensos a desarrollar daño de injerto asociada a lesiones reperfusión isquemia severa, llevando eventualmente a la pérdida temprana del injerto. Este protocolo describe un modelo de trasplante de páncreas murino utilizando una técnica sin sutura del manguito, ideal para el análisis de estos principios, deletéreos daños.

Modelo murino de trasplante de páncreas mediante una técnica modificada del pun ¢ o

La hemorragia incontrolada, una importante causa de mortalidad entre los pacientes con traumatismo, puede ser modelada usando una laceración hepática estándar en un modelo murino. Este modelo resulta en pérdida de sangre consistente, supervivencia, y permite la prueba de agentes hemostáticos. Este artículo proporciona el proceso paso a paso para realizar este valioso modelo.

El shock hemorrágico no controlado se modela a través de la laceración hepática en ratones con monitorización hemodinámica en tiempo real

Un modelo murino de isquemia-reperfusión cerebral es establecido para investigar la patofisiología del accidente cerebrovascular. Distal, ligar la arteria cerebral media derecha y la arteria carótida común derecha y restablecer el flujo sanguíneo después de 10 o 40 min de isquemia.

Oclusión de los vasos dos ratón modelo de isquemia-reperfusión Cerebral

Aquí, describimos un modelo de ratón de isquemia retiniana por oclusión bilateral transitoria de la arteria carótida común bilateral utilizando suturas simples y una abrazadera. Este modelo puede ser útil para entender los mecanismos patológicos de la isquemia retiniana causados por anomalías cardiovasculares.

Un modelo murino de lesión retiniana isquémica inducida por la oclusión bilateral transfronteriza de la arteria carótida común

En este trabajo, presentamos un protocolo para establecer un modelo de oclusión distal de la arteria cerebral media (dMCAO) mediante electrocoagulación transcraneal en ratones C57BL/6J y evaluamos el comportamiento neurológico y las características histopatológicas posteriores.

Inducción de ictus isquémico agudo en ratones mediante la técnica de oclusión de la arteria media distal

Aprende a establecer un modelo murino de transformación hemorrágica mediante oclusión/reperfusión de la arteria cerebral media en ratones C57BL/6 con hiperglucemia aguda. Este protocolo reproducible ofrece alta estabilidad y baja mortalidad para investigación preclínica en neurociencia.

Un modelo murino de transformación hemorrágica inducida por hiperglucemia aguda combinada con isquemia focal transitoria

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