Name: Síndrome de Sjögren primario asociado con adenocarcinoma de pulmón: sondeo de los posibles mecanismos patogénicos comunes y verificación experimental (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-09-20T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 21 s
Description: Explore los mecanismos patogénicos compartidos entre el síndrome de Sjögren primario y el adenocarcinoma de pulmón mediante análisis bioinformático y verificación experimental. Este estudio integra bases de datos GEO y análisis de expresión génica.

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<meta charset="utf8"></head><body>Dianas moleculares clave que relacionan el síndrome de Sjögren primario y el adenocarcinoma de pulmón

<table><tbody><tr><td>Marcador de proteína preteñido de 3 colores</td><td>Epizyme</td><td>WJ103</td><td>Western Blot</td></tr><tr><td>Tampón de dilución de anticuerpos</td><td>Epizyme</td><td>PS119</td><td>Western Blot</td></tr><tr><td>BCA Kit de cuantificación de proteínas</td><td>Epizyme</td><td>ZJ101</td><td>Western Blot</td></tr><tr><td>Cytoscape 3.7.1 software</td><td>Instituto Nacional de Ciencias Médicas Generales (NIGMS), Institutos Nacionales de Salud (NIH)</td><td>Versión 3.7.1.</td><td>Software de código abierto para el análisis y la visualización de redes biológicas</td></tr><tr><td>ECL fluido luminoso</td><td>Epizyme</td><td>SQ203</td><td>Western Blot</td></tr><tr><td>Tampón de electroforesis</td><td>Epizyme</td><td>PS105S</td><td>Western Blot</td></tr><tr><td>Prisma GraphPad 10.0</td><td>GraphPad</td><td>versión 10.0</td><td>Análisis</td></tr><tr><td>de datos HRP-conjugado Cabra anti-Conejo IgG (H + L) (AS014)</td><td>abclonal</td><td>AS014</td><td>Western Blot</td></tr><tr><td>JAK2</td><td>Tecnología de señalización celular</td> de anticuerpos <td>3230T</td> Ratón Western <td>Blot</td></tr><tr><td>IL-1 y beta; Kit ELISA</td><td>Beijing&nbsp; 4A&nbsp; Biotech Co., Ltd</td><td>CME0015</td> Ratón <td>ELISA</td></tr><tr><td>IL-6 ELISA Kit Pekín</td><td>&nbsp; 4A&nbsp; Biotech Co., Ltd</td><td>CME0006</td><td></td></tr><tr><td>Cóctel de inhibidores de fosfatasa ELISA (100 veces)</td><td>Epizyme</td><td>GRF102</td><td>Western Blot</td></tr><tr><td>Phospho-JAK2 (Tyr1007/1008)</td><td>Tecnología de señalización celular</td> de anticuerpos <td>3776S</td><td>Western Blot</td></tr><tr><td>Phospho-STAT3 (Tyr705)</td><td>Tecnología de señalización celular</td> de anticuerpos <td>9145S</td> Western <td>Blot</td></tr><tr><td>Cóctel de inhibidores de proteasa (100 veces)</td><td>Epizyme</td><td>GRF101</td><td>Western Blot</td></tr><tr><td>Tampón de bloqueo rápido sin proteínas (5 veces)</td><td>Epizyme</td><td>PS108</td><td>Western Blot</td></tr><tr><td>Membrana de PVDF</td><td>Millipore</td><td>IPVH00010</td><td>Western Blot</td></tr><tr><td>Software R</td><td>R Foundation for Statistical Computing</td><td>No aplicable</td><td>Software de análisis estadístico y lenguaje de programación utilizado para aplicaciones de análisis de datos, visualización y aprendizaje automático</td></tr><tr><td>Ensayo de inmunoprecipitación por radio</td><td>Epizyme</td><td>PC101</td><td>Western Blot</td></tr><tr><td>Sistema de transcripción inversa</td><td>Promega</td><td>A3500</td><td>PCR</td></tr><tr><td>SDS-PAGE</td><td>Epizyme</td><td>LK303</td><td>Western Blot</td></tr><tr><td>SDS-PAGE Tampón de carga de proteínas (5&times;)</td><td>Epizyme</td><td>LT103</td><td>Western Blot</td></tr><tr><td>STAT3</td><td>Tecnología de señalización celular</td> de anticuerpos <td>9139S</td><td>Western Blot</td></tr><tr><td>SYBR Green Realtime PCR Master Mix</td><td>TOYOBO</td><td>QPK-201</td><td></td></tr><tr><td>PCR TBST (10 veces)</td><td>Epizyme</td><td>PS103</td><td>Western Blot</td></tr><tr><td>Búfer de transferencia Western Blot (10&times;)</td><td>Epizyme</td><td>PS109</td><td>Western Blot</td></tr><tr><td>&beta;-Anticuerpo de actina</td><td>abclonal</td><td>AC026</td><td>Western Blot</td></tr></tbody></table>

síndrome de sjögren primario asociado con adenocarcinoma de pulmón: sondeo de los posibles mecanismos patogénicos comunes y verificación experimental

Primary Sjogren's Syndrome Associated with Lung Adenocarcinoma: Probing the Potential Common Pathogenic Mechanisms and Experimental Verification

Se identificaron un total de 3290 DEG de los 23348 genes en GSE84884 (pSS), incluidos 2659 genes regulados al alza y 631 genes regulados a la baja (Figura 1A). Para GSE51092 (pSS), se identificaron un total de 3290 DEG de los 11409 genes, incluidos 667 genes regulados al alza y 587 genes regulados a la baja (Figura 1B). La base de datos GeneCards obtuvo 102 DEG relacionados con pSS ováricos, y la puntuación de correlación de los criterios de detección fue de ≥20. La unión y deduplicación de los DEG relacionados con pSS obtenidos de GEO y GeneCards dio como resultado 453 DEG (pSS-DEGs). Se identificaron un total de 7154 DEG de los 25440 genes en GSE32863 (LUAD), incluidos 3934 genes regulados al alza y 3220 genes regulados a la baja (Figura 1C). En GSE75037 (LUAD), se identificaron un total de 11235 DEG de los 25440 genes, incluidos 6125 genes regulados al alza y 5110 genes regulados a la baja (Figura 1D). La base de datos GeneCards obtuvo 600 DEG relacionados con LUAD de ovario, y la puntuación de correlación de los criterios de detección fue de ≥20. La unión y deduplicación de los DEG relacionados con LUAD obtenidos de GEO y GeneCards dio como resultado 7478 DEG (LUAD-DEGs). Se seleccionaron un total de 233 DEG compartidos (pSS-LUAD-DEGs) entre pSS-DEGs y LUAD-DEGs y se visualizaron utilizando diagramas de Venn (Tabla suplementaria 1 y Figura 1E).
Con respecto al análisis de enriquecimiento de la vía KEGG, las 10 vías de señalización más significativas de pSS-LUAD-DEG identificadas se relacionaron con las vías metabólicas después de eliminar las vías de señalización relacionadas con la enfermedad. Específicamente, estas vías incluyen la vía de señalización PI3K-Akt, la vía de señalización MAPK, la interacción del receptor de citocina-citocina, la necrotosis, la regulación del citoesqueleto de actina, la vía de señalización FoxO, la vía de señalización del receptor tipo NOD, la senescencia celular, la diferenciación de células Th17 y la vía de señalización JAK-STAT (Figura 2A). Se visualizaron las 10 principales vías de señalización KEGG y pSS-LUAD-DEGs, como se muestra en la Figura 2B.
El análisis de enriquecimiento de GO de pSS-LUAD-DEG reveló los siguientes 10 procesos biológicos principales (Figura 3), y se enriquecieron en componente celular (CC): respuesta al virus, respuesta inmune innata, respuesta de defensa al virus, respuesta de defensa al simbionte, regulación del proceso viral, regulación del ciclo de vida viral, regulación negativa del proceso viral, regulación negativa de la replicación del genoma viral, regulación de la replicación del genoma viral, respuesta inmune innata antiviral; proceso biológico (BP): lado de la membrana, lado externo de la membrana plasmática, matriz extracelular, estructura encapsulante externa, matriz extracelular que contiene colágeno, trímero de colágeno, balsa de membrana, microdominio de membrana, balsa de membrana plasmática, caveola; función molecular (MF): unión al receptor de citocinas, actividad de citocinas, actividad reguladora del receptor de señalización, unión a la superfamilia de receptores del factor de necrosis tumoral, actividad activadora del receptor de señalización, unión al receptor del factor de necrosis tumoral, actividad del ligando del receptor, actividad de homodimerización de proteínas, actividad de la proteína quinasa del receptor transmembrana, actividad de la proteína quinasa.
La red PPI comprendía 99 nodos y 466 bordes (Figura 4A). Los 20 genes con grados más altos en la red PPI son STAT3, STAT1, TP53, TNF, IL6, IFNG, EGFR, ISG15, CCNA2, IL10, JAK2, MX1, IL1B, IFIT1, AKT1, SMAD3, ASPM, CCNB2, NUSAP1 y CEP55, que sirven como genes centrales (Figura 4B).
Se realizó un análisis de la curva ROC para evaluar la precisión diagnóstica de los 20 genes hub (Figura 5). Los valores del área bajo la curva (AUC) para las curvas ROC de STAT3, STAT1, TP53, TNF, IL6, IFNG, EGFR, ISG15, CCNA2, IL10, JAK2, MX1, IL1B, IFIT1, AKT1, SMAD3, ASPM, CCNB2, NUSAP1 y CEP55 fueron 0,543, 0,840, 0,724, 0,892, 0,965, 0,529, 0,721, 0,763, 0,933, 0,784, 0,836, 0,648, 0,936, 0,689, 0,662, 0,548, 0,960, 0,939, 0,934 y 0,953 para GSE32863 (Figura 5A, D), y 0,620, 0,811, 0,676, 0,878, 0,955, 0,546, 0,642, 0,765, 0,945, 0,759, 0,804, 0,625, 0,938, 0,753, 0,641, 0,540, 0,958, 0,945, 0,908 y 0,941 para GSE75037 (figura 5B,E). Además, para el conjunto de validación GSE31210 (Figura 5C,F), los valores de AUC fueron 0,505, 0,676, 0,819, 0,688, 0,863, 0,540, 0,720, 0,665, 0,814, 0,562, 0,766, 0,661, 0,806, 0,528, 0,607, 0,652, 0,906, 0,927, 0,910 y 0,898. Los valores de AUC para IL6, CCNA2, JAK2, IL1B, ASPM, CCNB2, NUSAP1 y CEP55 fueron de &gt;0,7, lo que sugiere que los ocho tienen importancia diagnóstica.
En los tejidos pulmonares de ratones BALB/c y ratones NOD/Ltj, solo se detectó una pequeña cantidad de expresión de factores proinflamatorios IL-6 e IL-1β. Tras la estimulación con PM2.5, la expresión de IL-6 e IL-1β aumentó significativamente, observándose una elevación notablemente mayor en los ratones NOD/Ltj en comparación con los ratones BALB/c (Figura 6).
Tras la estimulación con PM2.5, los niveles de expresión de JAK2/STAT3 no cambiaron significativamente en los tejidos pulmonares de los ratones BALB/c y los ratones NOD/Ltj. Sin embargo, los niveles de p-JAK2 y p-STAT3 aumentaron significativamente. Los ratones NOD/Ltj mostraron una expresión significativamente mayor de p-JAK2 y p-STAT3 en comparación con los ratones BALB/c después de la estimulación con PM2.5 (Figura 7).
Después de la estimulación de PM2.5, la expresión de ARNm de ASPM y NUSAP1 no cambió significativamente tanto en los ratones BALB/c como en los ratones NOD/Ltj, pero la expresión de ARNm de CCNA2, CCNB2 y CEP55 aumentó (Figura 8). En particular, la expresión de ARNm de CCNA2, CCNB2 y CEP55 fue significativamente mayor en los ratones NOD/Ltj en comparación con los ratones BALB/c después de la estimulación con PM2.5.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67421/67421fig01.jpg"> 
Figura 1: El mapa de volcanes y el diagrama de Venn de los DEGs. (A) El mapa de volcanes de GSE84844. (B) El mapa volcánico de GSE51092. (C) El mapa volcánico de GSE32863. (D) El mapa volcánico de GSE75037. (E) Diagrama de Venn de pSS-DEGs y LUAD-DEGs. Los genes regulados al alza están coloreados en rojo; Los genes regulados a la baja están coloreados en verde. Abreviaturas: pSS = Síndrome de Sjögren primario; LUAD = adenocarcinoma de pulmón; DEGs = genes expresados diferencialmente. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67421/67421fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67421/67421fig02.jpg"> 
Figura 2: Enriquecimiento de la vía KEGG de pSS-LUAD-DEGs. (A) Mapa de enriquecimiento de TOP10 KEGG de pSS-LUAD-DEGs. (B) La asociación entre las vías de señalización TOP10 KEGG con pSS-LUAD-DEGs. Abreviaturas: KEGG = Enciclopedia de Genes y Genomas de Kioto; pSS = Síndrome de Sjögren primario; LUAD = adenocarcinoma de pulmón; DEGs = genes expresados diferencialmente. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67421/67421fig02large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67421/67421fig03.jpg"> 
Figura 3: Análisis de enriquecimiento de GO de pSS-LUAD-DEGs. Abreviaturas: GO = Ontología de genes; pSS = Síndrome de Sjögren primario; LUAD = adenocarcinoma de pulmón; DEGs = genes expresados diferencialmente. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67421/67421fig03large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67421/67421fig04.jpg"> 
Figura 4: Red PPI de pSS-LUAD-DEGs. (A) Visualización de la red PPI. Los tonos más rojos indican una conectividad más fuerte del nodo. (B) Los 20 genes con grados más altos en la red PPI. Abreviaturas: PPI = interacción proteína-proteína; pSS = Síndrome de Sjögren primario; LUAD = adenocarcinoma de pulmón; DEGs = genes expresados diferencialmente. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67421/67421fig04large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67421/67421fig05.jpg"> 
Figura 5: Análisis de la curva ROC de los genes hub. (De la A a la F) Análisis de la curva ROC de genes hub en GSE32863, GSE75037 y GSE31210. Abreviaturas: ROC = Característica de funcionamiento del receptor. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67421/67421fig05large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67421/67421fig06.jpg"> 
Figura 6: Impacto de PM2.5 en los factores proinflamatorios en los tejidos pulmonares de ratón. (A) Expresión de IL-6 en tejidos pulmonares de ratón de cada grupo. (B) Expresión de IL-1β en tejidos pulmonares de ratón de cada grupo. a. grupo de control en blanco; b. grupo pSS; c. Grupo PM2.5; d. Grupo pSS-PM2.5. * p &lt; 0,05 en comparación con el grupo de control en blanco; # p &lt; 0,05 en comparación con el grupo pSS; Δ p &lt; 0,05 en comparación con el grupo PM2,5. Abreviaturas: PM2.5 = material particulado 2.5. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67421/67421fig06large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67421/67421fig07.jpg"> 
Figura 7: El impacto de PM2.5 en la vía de señalización JAK2/STAT3 en tejidos pulmonares de ratón. (A) Expresión de p-JAK2, JAK2, p-STAT3, STAT3 y β-actina en tejidos pulmonares de ratón de cada grupo. (B) La proporción de p-JAK2/JAK2 en los tejidos pulmonares de ratón de cada grupo. (C) La proporción de p-STAT3/STAT3 en los tejidos pulmonares de ratón de cada grupo. a. grupo de control en blanco; b. grupo pSS; c. Grupo PM2.5; d. Grupo pSS-PM2.5. * p &lt; 0,05 en comparación con el grupo de control en blanco; # p &lt; 0,05 en comparación con el grupo pSS; Δ p &lt; 0,05 en comparación con el grupo PM2,5. Abreviaturas: PM2.5 = material particulado 2.5. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67421/67421fig07large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67421/67421fig08.jpg"> 
Figura 8: El impacto de PM2.5 en los genes relacionados con LUAD en tejidos pulmonares de ratón. (A) Expresión de ARNm de CCNB2 en tejidos pulmonares de ratón de cada grupo. (B) Expresión de ARNm de CCNA2 en tejidos pulmonares de ratón de cada grupo. (C) Expresión de ARNm de ASPM en tejidos pulmonares de ratón de cada grupo. (D) Expresión de ARNm de NUSAP1 en tejidos pulmonares de ratón de cada grupo. (E) Expresión de ARNm de CEP55 en tejidos pulmonares de ratón de cada grupo. a. grupo de control en blanco; b. grupo pSS; c. Grupo PM2.5; d. Grupo pSS-PM2.5. * p &lt; 0,05 en comparación con el grupo de control en blanco; # p &lt; 0,05 en comparación con el grupo pSS; Δ p &lt; 0,05 en comparación con el grupo PM2,5. Abreviaturas: PM2.5 = material particulado 2.5. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67421/67421fig08large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
Tabla complementaria 1: Lista de los DEG compartidos (pSS-LUAD-DEGs) seleccionados entre pSS-DEGs y LUAD-DEGs. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67421/Supplementary%20Table%201.zip" target="_blank">Haga clic aquí para descargar este archivo.</a>
Fichero de codificación suplementario 1: Código R para filtrar DEGs. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67421/DEGs_R_code.zip" target="_blank">Haga clic aquí para descargar este archivo.</a>

Síndrome de Sjögren primario asociado con adenocarcinoma de pulmón: sondeo de los posibles mecanismos patogénicos comunes y verificación experimental

This study aimed to probe the potential common pathogenic mechanisms linking primary Sjogren's syndrome (pSS) and lung adenocarcinoma (LUAD) through ...

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