Name: Detección de compuestos de la medicina tradicional china para inhibir la actividad de UCHL3 basada en la tecnología de sonda de enzimas de acoplamiento molecular y desubiquitinación (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-22T14:40:00.000+00:00
Duration: 10 min 25 s
Description: Descubre cómo identificar inhibidores de UCHL3 a partir de Salvia miltiorrhiza mediante acoplamiento molecular y sondas enzimáticas. Este método computacional valida interacciones proteína-ligando para desarrollar fármacos.

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<meta charset="utf8"></head><body>Cribado virtual y validación de inhibidores de UCHL3 mediante acoplamiento molecular

<table><tbody><tr><td>30% Acrilamida</td><td>Beijing Lablead Biotech Co., Ltd</td><td>A3291</td><td></td></tr><tr><td>Persulfato de amonio</td><td>China National Medicines Corporation Ltd</td><td>10002616</td><td></td></tr><tr><td>Anti-rabbit IgG, HRP Linked Antibody&nbsp;#7074</td><td>Tecnología de señalización celular</td><td>7074P2</td><td></td></tr><tr><td>BeyoECL Plus</td><td>Beyotime</td><td>P0018S</td><td></td></tr><tr><td>Bradford Protein Assay Kit</td><td>Beyotime</td><td>P0006</td><td></td></tr><tr><td>ClonExpress Ultra Kit de clonación de un solo paso</td><td>Vazyme</td><td>C115-01</td><td></td></tr><tr><td>Danshensu</td><td>Shanghai yuanye Bio-Technology Co., Ltd</td><td>B20254</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Ameresco, Inc.</td><td>21K2356571</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de electroforesis</td><td>Liuyi Biotechnology</td><td>112-0630</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>Kit de purificación de proteínas con etiqueta His (perlas magnéticas de agarosa NTA-Ni)</td><td>Beyotime</td><td>P2247S</td><td></td></tr><tr><td>Membrana de PVDF Immun-Blot, rollo, 26 cm x 3,3 m</td><td>Bio-Rad Laboratories (Shanghai) Co., Ltd</td><td>1620177</td><td></td></tr><tr><td>Isopropilo alcohol</td><td>Macklin</td><td>I811925</td><td></td></tr><tr><td>M5 Escalera de proteínas prefabricada</td><td>Mei5 Biotechnology Co.Ltd</td><td>MF-212-01</td><td></td></tr><tr><td>Maestro</td><td>Schr&ouml; Dinger' s</td><td>https://www.schrodinger.com/platform/products/maestro/</td><td></td></tr> <tr><td>Alcohol metílico</td><td>China National Medicines Corporation Ltd</td><td>10014108</td><td></td></tr><tr><td>MF-Millipore</td><td>Millipore HAWP04700</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MyFug&nbsp; mini centrífuga</td><td>Sigma</td><td>Z764183</td><td></td></tr><tr><td>Pierce Rapid Gold Rapid Gold BCA Protein Assay</td><td>Thermo Scientific</td><td>A55860</td><td></td></tr><tr><td>PR-619</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>26065S</td> Tampón de dilución de anticuerpos primarios <td></td></tr><tr><td>para Western Blot</td><td>Macklin</td><td>P917820</td><td></td></tr><tr><td>Proteína de sulfona de vinilo HA-ubiquitina humana recombinante, CF</td><td>R& D Systems</td><td>U-212-025</td><td></td></tr><tr><td>Proteína AMC de ubiquitina humana recombinante, CF</td><td>R& D Systems</td><td>U-550-050</td><td></td></tr><tr><td>Leche descremada</td><td>Becton,Dickinson and Company</td><td>232100</td><td></td></tr><tr><td>Dodecil sulfato de sodio (SDS)</td><td>Ameresco, Inc.</td><td>205-788-1</td><td></td></tr><tr><td>TEMED</td><td>Ameresco, Inc.</td><td>2545C134</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Beijing Lablead Biotech Co., Ltd</td><td>0777-1</td><td></td></tr><tr><td>UCHL3 (D25E6) Tecnología</td><td>de señalización celular</td> mAb de conejo <td>8141T</td><td></td></tr></tbody></table>

detección de compuestos de la medicina tradicional china para inhibir la actividad de uchl3 basada en la tecnología de sonda de enzimas de acoplamiento molecular y desubiquitinación

Screening Traditional Chinese Medicine Compounds for Inhibiting UCHL3 Activity Based on Molecular Docking and Deubiquitinating Enzyme Probe Technology

Para descartar las moléculas pequeñas en la Salvia miltiorrhiza Bge que pueden inhibir eficazmente UCHL3, realizamos un acoplamiento molecular entre las moléculas pequeñas obtenidas del sitio web de TCMSP con UCHL3. Las 30 moléculas pequeñas principales en los resultados de acoplamiento y sus puntuaciones se muestran en la Tabla 1. Los resultados de acoplamiento para todas las moléculas pequeñas se presentan en la Tabla Suplementaria 1. Seleccionamos Danshensu como una molécula ...

Detección de compuestos de la medicina tradicional china para inhibir la actividad de UCHL3 basada en la tecnología de sonda de enzimas de acoplamiento molecular y desubiquitinación

Deubiquitinating enzymes&#160;(DUBs) play a pivotal role in modulating ubiquitination homeostasis, with UCHL3 being an archetypal cysteine DUB intricately ...

screening-traditional-chinese-medicine-compounds-for-inhibiting-uchl3

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Medicine

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Aquí describimos un ensayo de genes reporteros basado en células como una herramienta valiosa para examinar bibliotecas químicas en busca de compuestos que modulan los mecanismos de control postranscripcional ejercidos a través de 3' UTR.

Selección de alto rendimiento para moduladores químicos de genes post-transcripcionalmente regulados

El actual protocolo detalla un método para medir la actividad de las enzimas funcionalmente homóloga deubiquitinating. Sondas especializadas modifican covalentemente la enzima y permiten la detección. Este método tiene el potencial de identificar nuevas dianas terapéuticas.

Método para medir la actividad de enzimas deubiquitinating en líneas celulares y muestras de tejido

La interacción entre los canales HCN y su subunidad auxiliar ha sido identificado como un objetivo terapéutico en el trastorno depresivo mayor. Aquí, un método basado en la polarización de fluorescencia para identificar inhibidores de molécula pequeña de esta interacción proteína-proteína, se presenta.

Método para la identificación de inhibidores de moléculas pequeñas de la interacción proteína-proteína entre HCN1 y TRIP8b

Este papel utiliza un ensayo basado en la citometría de flujo para las bibliotecas de la pantalla de inhibidores químicos para la identificación de los inhibidores y los objetivos que influyen en la del receptor de células T de señalización. Los métodos descritos aquí pueden ampliarse también para proyecciones de alto rendimiento.

Identificación de mediadores del Receptor de células T de señalización a través de la proyección de las bibliotecas del inhibidor químico

El presente estudio proporciona protocolos detallados de ensayo de ubiquitilación in vitro para el análisis de la actividad catalítica de la ubiquitina ligasa E3. Las proteínas recombinantes se expresaron utilizando sistemas procariotas como el cultivo de Escherichia coli.

In vitro Análisis de la función E3 Ubiquitina Ligasa

Aquí, describimos un protocolo detallado para el uso de un ensayo reportero basado en luciferasa en un formato de cribado semiautomatizado de alto rendimiento.

Detección de fármacos basados en células para inhibidores de la 4B cisteína peptidasa relacionada con la autofagia

Este protocolo explica cómo medir el efecto de la variación genética asociada con los trastornos del neurodesarrollo sobre la actividad de la enzima desubiquitilante mediante la combinación de la purificación de proteínas recombinantes con ensayos de escisión de la cadena de ubiquitina.

Medición de la actividad enzimática de las enzimas desubiquitilantes asociadas a trastornos del neurodesarrollo mediante un ensayo de escisión de la cadena de ubiquitina in vitro

Este protocolo describe el uso de cromatografía líquida de ultra-alto rendimiento combinada con espectrometría de masas híbrida cuadrupolo-Orbitrap (UHPLC-Q-Orbitrap HRMS), combinada con farmacología de redes y acoplamiento molecular, para predecir y validar la base material de la fórmula Yiqi Qingjie (YQQJ) para el tratamiento de la nefropatía por IgA (IgAN).

Elucidación de la base material de la fórmula de Yiqi Qingjie contra nefropatía por IgA utilizando UHPLC-Q-Orbitrap HRMS integrado con farmacología de redes

Un enema es un tipo de terapia de medicina tradicional china (MTC) utilizada para tratar la pancreatitis aguda grave (SAP). La terapia consiste en instilar un líquido TCM en el recto y el colon a través del ano para mantener el líquido en el intestino, absorbiéndose a través de la mucosa intestinal. Este estudio tiene como objetivo estandarizar el procedimiento de enema para pacientes con SAP.

Enema de Medicina Tradicional China para Pacientes con Pancreatitis Aguda Severa

En este estudio, se presentan una serie de métodos para preparar muestras DESI-MSI de plantas, y se describe en detalle un procedimiento de instalación de ensamblaje DESI, adquisición de datos MSI y procesamiento. Este protocolo se puede aplicar en varias condiciones para adquirir información de metaboloma espacial en plantas.

Visualización de metabolitos identificados en el metaboloma espacial de la medicina tradicional china utilizando DESI-MSI

Descubre cómo identificar inhibidores de UCHL3 a partir de Salvia miltiorrhiza mediante acoplamiento molecular y sondas enzimáticas. Este método computacional valida interacciones proteína-ligando para desarrollar fármacos.

Detección de compuestos de la medicina tradicional china para inhibir la actividad de UCHL3 basada en la tecnología de sonda de enzimas de acoplamiento molecular y desubiquitinación (Video) | JoVE Journal

Detección de compuestos de la medicina tradicional china para inhibir la actividad de UCHL3 basada en la tecnología de sonda de enzimas de acoplamiento molecular y desubiquitinación

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