Name: Inyección intravenosa optimizada en pez cebra adulto (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-12-20T14:40:00.000+00:00
Duration: 5 min 17 s
Description: Aprenda una técnica optimizada de inyección intravenosa en pez cebra adulto para mejorar la supervivencia y el injerto celular. Este método avanza la investigación de enfermedades hematológicas y terapias regenerativas.

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<ol><li>Choi, T. Y., Choi, T. I., Lee, Y. R., Choe, S. K., Kim, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+an+animal+model+for+biomedical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as an animal model for biomedical research.</a> Exp Mol Med. 53 (3), 310-317 (2021).</li>
<li>Lieschke, G. J., Currie, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+human+disease%3A+zebrafish+swim+into+view%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Animal models of human disease: zebrafish swim into view.</a> Nat Rev Genet. 8 (5), 353-367 (2007).</li>
<li>Wu, J. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+xenograft+in+zebrafish+embryos%3A+a+new+platform+for+translational+research+in+gastric+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Patient-derived xenograft in zebrafish embryos: a new platform for translational research in gastric cancer.</a> J Exp Clin Cancer Res. 36 (1), 160(2017).</li>
<li>Welker, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correction%3A+Standardized+orthotopic+xenografts+in+zebrafish+reveal+glioma+cell-line-specific+characteristics+and+tumor+cell+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Correction: Standardized orthotopic xenografts in zebrafish reveal glioma cell-line-specific characteristics and tumor cell heterogeneity.</a> Dis Model Mech. 9 (9), 1063-1065 (2016).</li>
<li>Stoletov, K., Montel, V., Lester, R. D., Gonias, S. L., Klemke, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+imaging+of+the+dynamic+tumor+cell+vascular+interface+in+transparent+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">High-resolution imaging of the dynamic tumor cell vascular interface in transparent zebrafish.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 104 (44), 17406-17411 (2007).</li>
<li>Etchin, J. P. K. J., Look, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+a+model+for+the+study+of+human+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as a model for the study of human cancer.</a> Methods Cell Biol. 105, 309-337 (2011).</li>
<li>Khan, N., Mahajan, N. K., Sinha, P., Jayandharan, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+efficient+method+to+generate+xenograft+tumor+models+of+acute+myeloid+leukemia+and+hepatocellular+carcinoma+in+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Cells+Mol+Dis%22%5BJournal%5D)">An efficient method to generate xenograft tumor models of acute myeloid leukemia and hepatocellular carcinoma in adult zebrafish.</a> Blood Cells Mol Dis. 75, 48-55 (2019).</li>
<li>Corkery, D. P., Dellaire, G., Berman, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leukaemia+xenotransplantation+in+zebrafish--chemotherapy+response+assay+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Haematol%22%5BJournal%5D)">Leukaemia xenotransplantation in zebrafish--chemotherapy response assay in vivo.</a> Br J Haematol. 153 (6), 786-789 (2011).</li>
<li>He, B. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functions+of+flt3+in+zebrafish+hematopoiesis+and+its+relevance+to+human+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Functions of flt3 in zebrafish hematopoiesis and its relevance to human acute myeloid leukemia.</a> Blood. 123 (16), 2518-2529 (2014).</li>
<li>Wang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+IDH2%28R172K%29+and+IDH2%28R140Q%29+zebrafish+models+recapitulated+features+of+human+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Transgenic IDH2(R172K) and IDH2(R140Q) zebrafish models recapitulated features of human acute myeloid leukemia.</a> Oncogene. 42 (16), 1331(2023).</li>
<li>Fan, R. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+xenograft+model+for+studying+mechanism+and+treatment+of+non-small+cell+lung+cancer+brain+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Zebrafish xenograft model for studying mechanism and treatment of non-small cell lung cancer brain metastasis.</a> J Exp Clin Cancer Res. 40 (1), 371(2021).</li>
<li>LeBlanc, J., Bowman, T. V., Zon, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+whole+kidney+marrow+in+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Transplantation of whole kidney marrow in adult zebrafish.</a> J Vis Exp. (2), e159(2007).</li>
<li>Pugach, E. K., Li, P., White, R., Zon, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retro-orbital+injection+in+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Retro-orbital injection in adult zebrafish.</a> J Vis Exp. (34), e1645(2009).</li>
<li>Benjamin, D. C., Hynes, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+imaging+of+metastasis+in+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">Intravital imaging of metastasis in adult zebrafish.</a> BMC Cancer. 17 (1), 660(2017).</li>
<li>Hilligan, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+administration+of+BCG+protects+mice+against+lethal+SARS-CoV-2+challenge%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Intravenous administration of BCG protects mice against lethal SARS-CoV-2 challenge.</a> J Exp Med. 219 (2), e20211862(2022).</li>
<li>Moreo, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+administration+of+BCG+in+mice+promotes+natural+killer+and+T+cell-mediated+antitumor+immunity+in+the+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Intravenous administration of BCG in mice promotes natural killer and T cell-mediated antitumor immunity in the lung.</a> Nat Commun. 14 (1), 6090(2023).</li>
<li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+administration+of+IL-12+encoding+self-replicating+RNA-lipid+nanoparticle+complex+leads+to+safe+and+effective+antitumor+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Intravenous administration of IL-12 encoding self-replicating RNA-lipid nanoparticle complex leads to safe and effective antitumor responses.</a> Sci Rep. 14 (1), 7366(2024).</li>
<li>Saleem, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+best+practice+for+validating+tail+vein+injections+in+rat+with+near-infrared-labeled+agents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A new best practice for validating tail vein injections in rat with near-infrared-labeled agents.</a> J Vis Exp. (146), e59295(2019).</li>
<li>Rojas, A. M., Shiau, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain-localized+and+Intravenous+Microinjections+in+the+Larval+Zebrafish+to+Assess+Innate+Immune+Response%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Protoc%22%5BJournal%5D)">Brain-localized and Intravenous Microinjections in the Larval Zebrafish to Assess Innate Immune Response.</a> Bio Protoc. 11 (7), e3978(2021).</li>
<li>van Soest, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+static+immersion+and+intravenous+injection+systems+for+exposure+of+zebrafish+embryos+to+the+natural+pathogen+Edwardsiella+tarda%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Immunol%22%5BJournal%5D)">Comparison of static immersion and intravenous injection systems for exposure of zebrafish embryos to the natural pathogen Edwardsiella tarda.</a> BMC Immunol. 12, 58(2011).</li>
<li>Cianciolo Cosentino, C., Roman, B. L., Drummond, I. A., Hukriede, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+microinjections+of+zebrafish+larvae+to+study+acute+kidney+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Intravenous microinjections of zebrafish larvae to study acute kidney injury.</a> J Vis Exp. (42), e2079(2010).</li>
<li>Gerlach, G. F., Schrader, L. N., Wingert, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissection+of+the+adult+zebrafish+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Dissection of the adult zebrafish kidney.</a> J Vis Exp. (54), e2839(2011).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>esterilizador de vapor para autoclaves</td><td>HIRAYAMA&nbsp;</td><td>HRG-140</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga 5424</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Countess 3 Contador de células automatizado</td><td>Thermofisher</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Countess II FL</td><td>Invitrogen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Etilo 3-aminobenzoato sal de metanosulfonato (Tricaína)</td><td>Sigma-aldrich</td><td>MKCL9483</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 40 &micro; m Filtro de celdas</td><td>CORNING</td><td></td><td>Azul, Estéril, Empaquetado Individualmente, 50/Caja</td></tr><tr><td>FBS, Calificado</td><td>Gibco</td><td>26140079</td><td></td></tr><tr><td>FITC-Dextran (MW 10000)&nbsp;</td><td>MedChemExpress</td><td>60842-46-8</td><td></td></tr><tr><td>Aguja de inyección</td><td>Hamilton&nbsp;</td><td>HAMI207434</td><td>34 G, 10 mm</td></tr><tr><td>de longitud Micro jeringa</td><td>Hamilton&nbsp;</td><td>7635-01&nbsp;</td><td>10 y micro; Capacidad L, Modelo 701</td></tr><tr><td>RN Nikon SMZ18</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS pH 7.4 (1x)</td><td>Gibco</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina-Estreptomicina (5,000 U/mL)</td><td>Gibco&trade;</td><td>15070063</td><td>100x</td></tr><tr><td>Puntas de pipeta</td><td>Eppendorf&nbsp;</td><td>epTIPS</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta monocanal</td><td>Eppendorf&nbsp;</td><td>05-403-151</td><td></td></tr><tr><td>Agua destilada ultrapura</td><td>Invitrogen</td><td>10977015</td><td></td></tr></tbody></table>

inyección intravenosa optimizada en pez cebra adulto

Optimized Intravenous Injection in Adult Zebrafish

Para evaluar la efectividad y precisión de diferentes métodos de inyección en peces Casper adultos, se realizó un análisis comparativo utilizando técnicas intracardíacas, RO e IV (Figura 2A). Se inyectaron cantidades variables de células WKM de peces Tg(mpo: EGFP), cada una mezclada con colorante FITC-dextrano a concentraciones de 1 × 105 y 3 × 105 células. El éxito de cada método se determinó mediante la evaluación microscópica inmediata de la presencia de la señal de GFP después de la inyección. Los resultados revelaron variaciones significativas en el éxito de la entrega entre los métodos. El método de inyección intravenosa demostró la mayor efectividad, con señales de GFP detectadas en 41 de los 43 peces. En contraste, el método de ósmosis inversa mostró un éxito limitado, con inyecciones exitosas observadas en solo 3 de 37 peces. El método intracardiaco logró un parto exitoso en 11 de los 40 peces (Figura 2A). También se monitoreó la supervivencia de los peces trasplantados. Los peces inyectados a través de los métodos de ósmosis inversa e intracardiaco tuvieron tasas de supervivencia significativamente más bajas en comparación con los inyectados por vía intravenosa (Figura 2B). En particular, el número de células inyectadas influyó en las tasas de supervivencia entre los peces inyectados por vía intravenosa, y los receptores que recibieron 3 × 105 células mostraron una mejor supervivencia. Estos hallazgos ponen de manifiesto la eficacia y fiabilidad superiores del método de inyección intravenosa en la administración de células y sustancias en el pez cebra adulto.
La eficiencia del injerto de las células WKM en peces Casper receptores se evaluó minuciosamente mediante el monitoreo de la señal GFP de las células trasplantadas. En los peces que recibieron inyecciones intravenosas, las señales de GFP fueron detectables ya en el tercer día después del trasplante (Figura 2C), lo que indica un proceso de injerto rápido y eficaz. Por el contrario, los peces que se sometieron a ósis inversa e inyecciones intracardíacas mostraron una aparición tardía de la señal de GFP, lo que indica una tasa de injerto más lenta. Para el día 17 después del trasplante, las células trasplantadas habían repoblado predominantemente la médula renal, y las señales de GFP más pronunciadas se observaron en los peces inyectados por vía intravenosa (Figura 2C). El análisis citométrico de flujo de KM de los receptores subrayó aún más la eficacia del método de inyección intravenosa. En los receptores inyectados inicialmente con 3 × 105 células por vía intravenosa, aproximadamente el 18% de las células del KM eran GFP positivas, una proporción similar a la encontrada en la médula renal del pez donante Tg(mpo: EGFP) que no se había sometido a ningún trasplante (Figura 2D, E). Por el contrario, la inyección intracardíaca dio como resultado alrededor del 5% de células GFP positivas, mientras que el método de RO produjo solo alrededor del 2% de células GFP positivas en la médula renal de los receptores. Además, la tasa de injerto se correlacionó positivamente con el número de células inyectadas, lo que demuestra que las dosis celulares más altas condujeron a un mayor injerto. Estos resultados confirman la robustez de la técnica de inyección intravenosa para facilitar el injerto celular y la posterior repoblación de la médula renal.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67463/67463fig01v2.jpg"> 
Figura 1: Resultados de supervivencia después de la irradiación y la inyección intravenosa en pez cebra adulto. (A) Los peces casper fueron expuestos a una irradiación de hasta 35 Gy y monitorizaron la supervivencia durante 30 días, confirmando que 25 Gy era una dosis subletal (n = 10 para todos los grupos). (B) Diagramas esquemáticos que ilustran los sitios de inyección para el pez cebra Casper y TU, junto con ejemplos de peces inyectados con éxito. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67463/67463fig01largev2.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67463/67463fig02v2.jpg"> 
Figura 2: Comparación de inyecciones retroorbitarias, intracardíacas e intravenosas en pez cebra adulto. (A) Representaciones esquemáticas y resultados representativos de los métodos de inyección de ósmosis inversa, intracardíaca e intravenosa en pez cebra adulto. Los números en la esquina inferior derecha indican el recuento de peces inyectados con éxito o mal inyectados en relación con el número total intentado para cada método, la señal de GFP se verificó bajo el microscopio fluorescente inmediatamente después de la inyección. (B) Supervivencia global de los receptores después de ser trasplantados con diferentes números de células de médula renal del donante por diferentes métodos de inyección (IV-100K: n = 24; Intracardiaco-100K: n = 10; RO-100K: n = 12; IV-300K: n = 20; Intracardiaco-300K: n = 6; RO-300K: n = 8). (C) Observación de la eficiencia del injerto en receptores post-trasplante mediante métodos de RO, inyección intracardíaca e intravenosa (D) Gráfico representativo de citometría de flujo para las células GFP-positivas en KM de los receptores a los 17 días post-trasplante. (E) El porcentaje de células GFP+ en la KM de los receptores 17 días después del trasplante, así como en la KM de los peces donantes Tg(mpo:EGFP) sin irradiación (IV-100K: n = 30; Intracardiaco-100K: n = 28; RO-100K: n = 22; IV-300K: n = 22; Intracardiaco-300K: n = 26; RO-300K: n = 18). Los datos son medios ± s.e.m. Se realizó un ANOVA de un factor para D. Se realizó la prueba Log-Rank para B. *P &lt; 0,05, **P &lt; 0,01, ***P &lt; 0,001, ****P &lt; 0,0001. Barras de escala = 1 mm (A, C). Abreviaturas: RO = retroorbital; IV = intravenoso; GFP = proteína verde fluorescente; KM = médula renal; SSC-A = área de pico de dispersión lateral; FITC-A = área de pico de isotiocianato de fluoresceína. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67463/67463fig02largev2.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>

Inyección intravenosa optimizada en pez cebra adulto

Intravenous (IV) injection is widely recognized as the most effective and commonly utilized method for achieving systemic delivery of substances in ...

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Research

Investigación

JoVE Journal

Cancer Research

Investigación del cáncer

Aquí te mostramos cómo hacer retro-orbital de la inyección en adultos de pez cebra.

Retro-orbital de inyección en adultos de pez cebra

Se describe una técnica de microinyección de los aminoglucósidos, la gentamicina, en 2 días después de la fetilization (DPF) de larvas de pez cebra para inducir insuficiencia renal aguda (IRA). También describe un método para montar toda la inmunohistoquímica, plástico inclusión y corte de las larvas de pez cebra para visualizar el daño mediado por IRA.

Microinyecciones intravenosa de larvas de pez cebra para el Estudio de la lesión renal aguda

Demostramos inyección intraperitoneal en adultos de pez cebra. Nosotros usamos un 10 l microjeringa NanoFil controlado por un controlador Micro4 y III UltraMicroPump. Esta demostración incluye el uso de agua fría como un anestésico.

Inyección intraperitoneal en adultos de pez cebra

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Inyección intramuscular (IM): administración de compuesto en el músculo dorsal de un pez cebra adulto

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Inyección intraperitoneal: un método de administración de solución en la cavidad abdominal de un pez cebra adulto

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Inyección intratorácica: administración de compuestos al corazón del pez cebra adulto

Aquí se describe un protocolo para la inmunización del adulto pez cebra (Danio rerio) con una vacuna de ADN y demostrar la validación de un evento de éxito de la vacunación. Este método es adecuado para la investigación preclínica de candidatos vacunales en varios modelos de infección.

Inmunización de pez cebra adulto para la evaluación preclínica de vacunas basadas en ADN

Este método se basa en la inyección de 0,5 − 3 μL de solución en el tórax del pez cebra adulto. El procedimiento proporciona eficientemente proteínas y compuestos químicos en la proximidad del corazón del pez cebra sin dañar el órgano. El enfoque es adecuado para probar los efectos de factores exógenos en varios tejidos del corazón.

Inyección intratorácica para el estudio del corazón de pez cebra adulto

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Una técnica de inyección intraperitoneal en peces cebra adultos que minimiza el daño corporal y la mortalidad asociada

Este manuscrito proporciona el procedimiento detallado de la inyección de la arteria ilíaca (IIA), una técnica para administrar células cancerosas específicamente a los tejidos de las extremidades posteriores, incluidos los huesos, para establecer metástasis óseas experimentales. Aunque inicialmente se estableció con modelos de tumores de mama, este protocolo puede extenderse fácilmente a otros tipos de cáncer.

Intra-ilíaca Arteria inyección de Modelamiento eficiente y selectiva de microscópico metástasis en los huesos

Aprenda una técnica optimizada de inyección intravenosa en pez cebra adulto para mejorar la supervivencia y el injerto celular. Este método avanza la investigación de enfermedades hematológicas y terapias regenerativas.

Inyección intravenosa optimizada en pez cebra adulto

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