Name: Visualización intraoperatoria de la inyección subretiniana y el desprendimiento de retina en ratas (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 16 s
Description: Aprenda a realizar inyecciones subretinianas con visualización intraoperatoria en ratas para estudios de desprendimiento de retina. Este protocolo mejora la reproducibilidad y seguridad en investigaciones de neurociencia retinal.

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<ol><li>Guymer, R. H., Campbell, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Age-related macular degeneration.</a> Lancet. 401 (10386), 1459-1472 (2023).</li>
<li>Hartong, D. T., Berson, E. L., Dryja, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinitis+pigmentosa%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Retinitis pigmentosa.</a> Lancet. 368 (9549), 1795-1809 (2006).</li>
<li>Cheung, N., Mitchell, P., Wong, T. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetic+retinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Diabetic retinopathy.</a> Lancet. 376 (9735), 124-136 (2010).</li>
<li>Murakami, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoreceptor+cell+death+and+rescue+in+retinal+detachment+and+degenerations%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Photoreceptor cell death and rescue in retinal detachment and degenerations.</a> Prog Retin Eye Res. 37, 114-140 (2013).</li>
<li>Russell, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+and+safety+of+voretigene+neparvovec+%28AAV2-hRPE65v2%29+in+patients+with+RPE65-mediated+inherited+retinal+dystrophy%3A+A+randomised%2C+controlled%2C+open-label%2C+phase+3+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Efficacy and safety of voretigene neparvovec (AAV2-hRPE65v2) in patients with RPE65-mediated inherited retinal dystrophy: A randomised, controlled, open-label, phase 3 trial.</a> Lancet. 390, 849-860 (2017).</li>
<li>Gagliardi, G., Ben M'Barek, K., Goureau, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoreceptor+cell+replacement+in+macular+degeneration+and+retinitis+pigmentosa%3A+A+pluripotent+stem+cell-based+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Photoreceptor cell replacement in macular degeneration and retinitis pigmentosa: A pluripotent stem cell-based approach.</a> Prog Retin Eye Res. 71, 1-25 (2019).</li>
<li>Zeng, R., Zhang, Y., Shi, F., Kong, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+experimental+mouse+model+of+retinal+detachment%3A+Complete+functional+and+histologic+recovery+of+the+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">A novel experimental mouse model of retinal detachment: Complete functional and histologic recovery of the retina.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 53, 1685-1695 (2012).</li>
<li>Matsumoto, H., Miller, J. W., Vavvas, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+detachment+model+in+rodents+by+subretinal+injection+of+sodium+hyaluronate%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Retinal detachment model in rodents by subretinal injection of sodium hyaluronate.</a> J Vis Exp. 79, e50660(2013).</li>
<li>Timmers, A. M., Zhang, H., Squitieri, A., Gonzalez-Pola, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subretinal+injections+in+rodent+eyes%3A+Effects+on+electrophysiology+and+histology+of+rat+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">Subretinal injections in rodent eyes: Effects on electrophysiology and histology of rat retina.</a> Mol Vis. 7, 131-137 (2001).</li>
<li>Benner, J. D., Hay, A., Landers, M. B., Hjelmeland, L. M., Morse, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrinolytic-assisted+removal+of+experimental+subretinal+hemorrhage+within+7+days+reduces+outer+retinal+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Fibrinolytic-assisted removal of experimental subretinal hemorrhage within 7 days reduces outer retinal degeneration.</a> Ophthalmology. 101, 672-681 (1994).</li>
<li>Secondi, R., Kong, J., Blonska, A. M., Staurenghi, G., Sparrow, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fundus+autofluorescence+findings+in+a+mouse+model+of+retinal+detachment%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Fundus autofluorescence findings in a mouse model of retinal detachment.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 53, 5190-5197 (2012).</li>
<li>Becker, S., Wang, H., Stoddard, G. J., Hartnett, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+subretinal+injection+on+retinal+structure+and+function+in+a+rat+oxygen-induced+retinopathy+model%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">Effect of subretinal injection on retinal structure and function in a rat oxygen-induced retinopathy model.</a> Mol Vis. 23, 832-843 (2017).</li>
<li>Sene, A., Apte, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation-induced+photoreceptor+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Exp+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">Inflammation-induced photoreceptor cell death.</a> Adv Exp Med Biol. 1074, 203-208 (2018).</li>
<li>Zhang, Z. Y., Sun, Y. J., Song, J. Y., Fan, B., Li, G. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+models+and+examination+methods+of+retinal+detachment%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Bull%22%5BJournal%5D)">Experimental models and examination methods of retinal detachment.</a> Brain Res Bull. 169, 51-62 (2021).</li>
<li>Machemer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+retinal+detachment+in+the+owl+monkey.+IV.+The+reattached+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Experimental retinal detachment in the owl monkey. IV. The reattached retina.</a> Am J Ophthalmol. 66, 1075-1091 (1968).</li>
<li>Dentel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adaptive+optics+flood+illumination+ophthalmoscopy+in+nonhuman+primates%3A+Findings+in+normal+and+short-term+induced+detached+retinae%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmol+Sci%22%5BJournal%5D)">Adaptive optics flood illumination ophthalmoscopy in nonhuman primates: Findings in normal and short-term induced detached retinae.</a> Ophthalmol Sci. 3 (4), 100316(2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Atipemazol (Antidorm 4,27 mg/mL)</td><td>Axience SAS, Pantin, Francia</td><td>/</td><td>Awakening</td></tr><tr><td>Cloranfenicol-retinol (Ophtalon 10 mg/g)</td><td>TVM, Lempdes, Francia</td><td>FR/V/3787889 6/1989</td><td>Cuidados postoperatorios</td></tr><tr><td>Cubrecubreobjetos Mini 8mm</td><td>World Precision Instruments, Sarasota,</td> <td>FL/</td><td>https://www.wpiinc.com/var-1040-cover-slips-pkg-100.html?srsltid=AfmBOoraZfMhuUuY_7rQbM5YKfqM2VR1PT0L-UHQ5uQUdjaeZuogbKP1&utm_source=chatgpt.com</td></tr><tr><td>Hidroxipropilmetilcelulosa</td><td>FCI S.A.S., París, Francia</td><td>/</td><td>Liberación subretiniana viscosa</td></tr><tr><td>Ketamina (Ketamidor 100 mg/mL)</td><td>Axience SAS, Pantin, Francia</td><td>/</td><td>Anestesia</td></tr><tr><td>general Lumera 700</td><td>Carl Zeiss, Oberkochen, Alemania</td><td>https://www.zeiss.com/meditec/en/products/surgical-microscopes/ophthalmic-microscopes/opmi-lumera-700.html?utm_source=chatgpt.com</td><td>Microscopio oftálmico</td></tr><tr><td>Medetomidina (Domitor 0,85 mg/mL)</td><td>Vetoquinol S.A., París, Francia</td><td>https://www.vetoquinol.com/en</td><td>Anestesia general</td></tr><tr><td>Microinyector Micro 4</td><td>World Precision Instruments, Sarasota, FL</td><td>Inyección</td> <td>SYS-MICRO4</td></tr><tr><td>Oxibuprocaína 1,6 mg/0,4 mL</td><td>Th&eacute; a, Clermont-Ferrand, Francia</td><td>https://www.laboratoires-thea.com/en/chlorhydrate-doxybuprocaine-thea?utm_source=chatgpt.com</td><td>Anestesia local</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Life Technologies Europe B.V., Bleiswijk, Países Bajos</td><td>14190-094</td><td>Jeringa acuosa de administración subretiniana</td></tr><tr><td>(10 o 20 &micro; L)</td><td>Hamilton, Reno, NV</td><td>80300</td><td>Gel inyectable</td></tr><tr><td>de lágrimas (Lubrithal)</td><td>Dechron, Shrewsbury, Reino Unido</td><td>https://www.dechra.ca/our-products/ca/companion-animal/dog/non-prescription/lubrithal?utm_source=chatgpt.com</td> Protección de la <td>córnea</td></tr><tr><td>Tropicamida (Mydriaticum 1 mg/mL)</td><td>Th&eacute; a, Clermont-Ferrand, Francia/</td><td></td><td>Dilatación de la pupila</td></tr></tbody></table>

visualización intraoperatoria de la inyección subretiniana y el desprendimiento de retina en ratas

Intraoperative Visualization of Subretinal Injection and Retinal Detachment in Rats

El éxito de una inyección subretiniana se basa en la administración precisa y exclusiva en el espacio subretiniano (es decir, entre los fotorreceptores y las capas de EPR) a través de la retinotomía, evitando la hemorragia subretiniana, ya que la sangre es tóxica para los fotorreceptores y las células EPR. El éxito del parto se confirma mediante la visualización intraoperatoria (Figura 2L), la fotografía del fondo de ojo postoperatorio inmediata y la tomografía de coherencia óptica (OCT). La fotografía del fondo de ojo descarta la hemorragia subretiniana, mientras que las electrotomografías computarizadas (OCT) confirman el desprendimiento de retina (RD) con líquido subretiniano transparente (Figura 1 y Figura 3). Además, la fotografía del fondo de ojo puede identificar el contacto con el cristalino o las cataratas inducidas que pueden pasar desapercibidas durante el procedimiento (Figura 3C, D). Tanto la fotografía como la OCT pueden estimar el tamaño del área desprendida o ampolla (Figura 1B-E).
Varios factores influyen en el tamaño de la ampolla: (1) Ubicación del lugar de inyección: cuanto más lejos esté el sitio de inyección del disco óptico, menor será el área desprendida; (2) Volumen inyectado: Un volumen de inyección de 20-25 μL puede desprender aproximadamente la mitad de la retina en ratas; (3) Calidad del desprendimiento de retina: En los modelos de degeneración de la retina (por ejemplo, P23H, RCS), el desprendimiento puede ser un desafío debido al aumento de la resistencia entre los fotorreceptores y las células del EPR causado por procesos degenerativos, como la gliosis y la acumulación de material subretiniano. En tales casos, los desprendimientos de retina inducidos suelen ser planos, y las tomografías computarizadas son cruciales para delinear claramente el área desprendida.
Puede producirse una hemorragia intravítrea menor en el lugar de la inyección porque los microvasos de la retina no siempre pueden evitarse por completo (Figura 3E). Sin embargo, estas hemorragias no suelen extenderse al espacio subretiniano.
En casos de desprendimiento insuficiente, el problema debe reconocerse intraoperatoriamente, lo que requiere una reinyección inmediata a través de la retinotomía preformada. Durante una sesión experimental con 20 ratas, dos cirujanos (uno experimentado y otro principiante) realizaron el método paso a paso. El cirujano experimentado logró el éxito en 9 de cada 10 procedimientos, mientras que el principiante tuvo éxito en 6 de cada 10.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67483/67483fig1.jpg"> 
Figura 1: Resumen del proceso y resultados. (A) Representación esquemática del proceso de inyección subretiniana en un ojo de rata, mostrando el volumen significativo del cristalino. (B,C) Fotografía del fondo de ojo inmediatamente después de la inyección (B) y 6 días después de la inyección (C). Las puntas de flecha indican el lugar de inyección. El área de desprendimiento de retina está delimitada por una línea discontinua. (D,E) Tomografía de coherencia óptica B-scan inmediatamente después de la inyección (D) y 6 días después de la inyección (E). ON: nervio óptico. Ampliación: 1x. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67483/67483fig1large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67483/67483fig2.jpg"> 
Figura 2: Pasos del protocolo de inyección subretiniana. El protocolo se demuestra en una rata Long Evans de 8 semanas de edad bajo anestesia general. Para obtener una descripción detallada de cada paso, consulte el video o la sección "Protocolo" en el texto. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67483/67483fig2large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67483/67483fig3.jpg"> 
Figura 3: Ejemplos de varios resultados de la fotografía de fondo de ojo postoperatorio. (A) Apariencia postoperatoria normal con una menor dispersión de pigmento en el lugar de la inyección (flecha). (B) Aspecto postoperatorio normal con una pequeña burbuja de aire intravítreo en el lugar de la inyección. Estas pequeñas burbujas de aire se originan en la jeringa y son inofensivas, incluso en el espacio subretiniano. (C,D) El contacto con el cristalino que produce una opacificación menor (C) o significativa (D) del cristalino (cataratas). (E,F) Sangrado intravítreo menor (E) o más extenso (F) localizado cerca del sitio de la inyección, sin diseminación al espacio subretiniano. (G) Sangrado en el lugar de la inyección, que se extiende predominantemente hacia el espacio subretiniano. En este caso, la retinotomía causó una lesión de un vaso sanguíneo de la retina. (H) Hemorragia intravítrea extensa resultante de la penetración escleral. Ampliación: 1x. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67483/67483fig3large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>

Visualización intraoperatoria de la inyección subretiniana y el desprendimiento de retina en ratas

Subretinal injection, the delivery of a solution between the photoreceptors and the retinal pigment epithelium (RPE), creates a subretinal space where ...

intraoperative-visualization-subretinal-injection-retinal-detachment

Research

Investigación

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Fuente: Park, S. W., et al. Abordaje limbal-inyección subretiniana de vectores virales para terapia génica en el epitelio pigmentario de la retina de ratones. J. Vis. Exp. (2015)El video describe el método para la inyección subretiniana de vectores virales en el epitelio pigmentario de la retina (EPR) en un modelo de ratón. Detalla el procedimiento desde la anestesia y la preparación ocular hasta la administración precisa del vector lentiviral, asegurando la integración y expresión génica en el...

Inyección subretiniana de vectores virales en el epitelio pigmentario de la retina en un modelo de ratón

Creación de los desprendimientos de retina experimentales con una altura reproducible y sostenida de desprendimiento, y sin hemorragia subretinal, es importante para el estudio de la fisiopatología de la pérdida de células de fotorreceptores en la enfermedad de la retina y la evaluación de las intervenciones terapéuticas potenciales. Aquí, se presenta un procedimiento de este tipo en detalle.

Desprendimiento de Retina modelo en roedores por inyección subretiniana de Hialuronato de Sodio

Aquí presentamos un protocolo aceptado por la comunidad en formato multimedia para inyectar subretinialmente un bolo de células EPR en ratas y ratones. Este enfoque se puede utilizar para determinar los potenciales de rescate, los perfiles de seguridad y las capacidades de supervivencia de las células EPR injertadas tras la implantación en modelos animales de degeneración de la retina.

Realizar Subretinal Inyecciones en roedores administrar células de la retina epitelio pigmentario en Suspensión

La inyección directa en el nervio óptico de la rata es útil para la investigación regenerativa. Demostramos una técnica mínimamente invasiva para la inyección directa en el nervio óptico de una rata que no implica abrir el cráneo. Con este método, las complicaciones quirúrgicas se minimizan y la recuperación es más rápida.

Técnica mínimamente invasiva para la inyección en nervio óptico de la rata

Las inyecciones subretinianas son la técnica más común para administrar grandes agentes terapéuticos, como proteínas y vectores virales, a los fotorreceptores y al epitelio pigmentario de la retina. Aquí se describe un método alternativo en ratones que se dirige con éxito al espacio subretiniano con un daño colateral mínimo y tiempos de recuperación rápidos.

Un método alternativo de inyección y validado para acceder al espacio subretiniano<i&gt; vía</i&gt; Un enfoque posterior transescleral

Inyección subretinal se ha aplicado extensamente en estudios preclínicos de terapia de reemplazo de la célula de vástago para la degeneración macular relacionada con la edad. En este artículo visualizado, describimos una técnica de inyección subretinal menos riesgoso, reproducible y exacto modificado vía trans-escleral para entregar las células en los ojos de rata.

Desarrollo de un protocolo de refinado para Trans-escleral transplante Subretinal de células epiteliales del pigmento retiniano humano a ojos de rata

Aquí nos muestran un nuevo enfoque al uso de tomografía de coherencia óptica de dominio espectral de alta resolución (HR-SD-OCT) para facilitar la presentación de los agentes de terapia génica en el espacio subretinal, evaluar su cobertura areal y caracterizan la vitalidad del fotorreceptor.

Tomografía de coherencia óptica ultraalta resolución ratón para facilitar la inyección Intraocular en investigación de retina la terapia génica

Las células epiteliales del pigmento retiniano podrían servir como una terapia de reemplazo celular para la forma avanzada de la degeneración macular seca relacionada con la edad. Este protocolo describe la generación de un modelo de grandes ojos de atrofia geográfica y el transplante subretinal de células epiteliales del pigmento retiniano derivados de células madre embrionarias humanas en este modelo de la enfermedad.

Transplante subretinal de células epiteliales del pigmento retiniano derivado de células madre embrionarias humanas en un modelo de grandes ojos de atrofia geográfica

Este protocolo describe una técnica única que utiliza un abordaje transconjuntival para acceder al nervio óptico de rata para inyecciones.

Abordaje transconjuntival para inyección en el nervio óptico de la rata

Este estudio presenta una metodología para la administración de terapias en la retina y los nervios ópticos de la rata adulta. Además, se introduce un método único de recuperación de tejido para una colección en bloque de arriba hacia abajo del nervio óptico y la retina en una rata adulta.

Administración Terapéutica Ocular y Recuperación Avanzada de Tejido en Ratas Adultas

Aprenda a realizar inyecciones subretinianas con visualización intraoperatoria en ratas para estudios de desprendimiento de retina. Este protocolo mejora la reproducibilidad y seguridad en investigaciones de neurociencia retinal.

Visualización intraoperatoria de la inyección subretiniana y el desprendimiento de retina en ratas

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