Name: Extracción de órganos terminales vestibulares en condiciones fisiológicas durante la laberintectomía (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-29T14:50:00.000+00:00
Duration: 3 min 8 s
Description: Aprende una técnica subacuática para extraer órganos vestibulares humanos durante laberintectomía en condiciones fisiológicas. Este método permite estudiar directamente tejido del oído interno y analizar la integridad de células ciliadas tipo uno en trastornos como la enfermedad de Ménière.

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<ol><li>Monsanto, R. D. C., Pauna, H. F., Paparella, M. M., Cureoglu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Otopathology+in+the+United+States%3A+History%2C+Current+Situation%2C+and+Future+Perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Otol+Neurotol%22%5BJournal%5D)">Otopathology in the United States: History, Current Situation, and Future Perspectives.</a> Otol Neurotol. 39 (9), 1210-1214 (2018).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>10x Solución salina tamponada con fosfato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5493</td><td></td></tr><tr><td>32% Paraformaldehyde Stock ThermoFisher</td><td>Scientific</td><td>50-980-495</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 Anticuerpo secundario anti-conejo</td><td>Jackson Immunoresearch</td><td>111545144</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 568 Anticuerpo secundario anti-ratón</td><td>Jackson Immunoresearch</td><td>115575146</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 Anticuerpo secundario anti-cabra</td><td>Jackson Immunoresearch</td><td>705607003</td><td></td></tr><tr><td>Solución salina equilibrada</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>14040117</td><td></td></tr><tr><td>Albúmina de suero bovino</td><td>Microscopio confocal Sigma-Aldrich</td><td>10711454001</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Nikon A1&nbsp;</td><td>A1</td><td></td></tr><tr><td>Cubierta de vidrio (18 mm x 18 mm, espesor #1.5</td>) <td>Corning&nbsp;</td><td>2850-18</td><td></td></tr><tr><td>Endo-Scrub 2 Funda de limpieza de lentes</td><td>Medtronic</td><td>IPCES2SYSKIT</td><td></td></tr><tr><td>Solución ácida de etilendiaminotetraacético (EDTA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E8008</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo antioncomodulina de cabra</td><td>R& D Systems</td><td>AF6345</td><td></td></tr><tr><td>Hopkins Telescopio de 0 grados</td> Karl <td>Storz</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mouse Anticuerpo anticalretinina</td><td>BD Biosciences</td><td>610908</td><td></td></tr><tr><td>ProLong Gold reactivo antidecoloración</td><td>Invitrogen</td><td>P10144</td><td></td></tr><tr><td>Conejo Anticuerpo antitenascina C</td><td>Millipore</td><td>AB19013</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>9036-19-5</td><td></td></tr></tbody></table>

extracción de órganos terminales vestibulares en condiciones fisiológicas durante la laberintectomía

Harvest of Vestibular End-Organs under Physiologic Conditions during Labyrinthectomy

Con esta técnica, el utrículo humano y las ampollas del canal lateral y superior se extrajeron intactos con un traumatismo mínimo (Figura 2). Como se puede observar en la Figura 2, las ampollas se pueden recolectar con una porción sustancial del conducto membranoso. El marcaje inmunofluorescente con anti-tenascina-C (proteína de la matriz extracelular) y anti-oncomodulina (pequeña proteína de unión al calcio de la familia de las proteínas parvalbúmina) mostró células ciliadas vestibulares tipo 1 intactas (Figura 3). La densidad de células ciliadas fue de 82 por 10.000 μm2. Estos resultados demuestran la utilidad de esta técnica para la recolección de tejido del oído interno humano con un traumatismo mínimo en el neuroepitelio.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67523/67523fig01.jpg"> 
Figura 1: Ilustración de la configuración quirúrgica. Ilustración de la configuración quirúrgica: Se muestra la cavidad mastoidea izquierda con los canales semicirculares lateral, superior y posterior. La cavidad mastoidea se sumerge en una solución salina equilibrada y se utiliza un endoscopio de cero grados para visualizar la cavidad mastoides, mientras que un taladro de diamante se utiliza para abrir el laberinto. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67523/67523fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67523/67523fig02.jpg"> 
Figura 2: Laberinto membranoso. El (A) utrículo humano y ampollas laterales y (B) del canal superior extraídos bajo un microscopio estereoscópico óptico con un aumento de 5x. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67523/67523fig02large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67523/67523fig03.jpg"> 
Figura 3: Utrículo. Proyecciones de intensidad máxima del marcaje inmunofluorescente del utrículo humano con un aumento de 40x tomadas con un microscopio confocal. Las hendiduras sinápticas del cáliz están marcadas con anticuerpos anti-tenascina-C (verde). Las células vestibulares de tipo 1 se tiñen con antioncomodulina (rojo). Barra de escala: 50 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67523/67523fig03large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>

Extracción de órganos terminales vestibulares en condiciones fisiológicas durante la laberintectomía

The living human inner ear is challenging to study because it is encased within dense otic capsule bone that limits access to biological tissue. ...

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