Name: Aislamiento de células estromales mesenquimales derivadas del cordón umbilical BAMBIhumano con altocontenido de MFGE8 (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-10T14:20:00.000+00:00
Duration: 6 min 5 s
Description: Aprende a aislar células estromales mesenquimales BAMBI alto MFGE8 alto del cordón umbilical humano mediante citometría de flujo. Este método permite caracterizar subpoblaciones específicas para aplicaciones en medicina regenerativa y terapias celulares.

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<meta charset="utf8"></head><body>Análisis funcional de subpoblaciones de BAMBIcon altocontenido de MFGE8y UC-MSC

<ol><li>Liechty, K. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+mesenchymal+stem+cells+engraft+and+demonstrate+site-specific+differentiation+after+in+utero+transplantation+in+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Human mesenchymal stem cells engraft and demonstrate site-specific differentiation after in utero transplantation in sheep.</a> Nat Med. 6 (11), 1282-1286 (2000).</li>
<li>Zhou, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Challenges+and+advances+in+clinical+applications+of+mesenchymal+stromal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hematol+Oncol%22%5BJournal%5D)">Challenges and advances in clinical applications of mesenchymal stromal cells.</a> J Hematol Oncol. 14 (1), 24(2021).</li>
<li>Xie, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tnf-alpha-mediated+m%286%29a+modification+of+elmo1+triggers+directional+migration+of+mesenchymal+stem+cell+in+ankylosing+spondylitis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Tnf-alpha-mediated m(6)a modification of elmo1 triggers directional migration of mesenchymal stem cell in ankylosing spondylitis.</a> Nat Commun. 12 (1), 5373(2021).</li>
<li>Mcguire, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cell-derived+interleukin-28+drives+the+selection+of+apoptosis+resistant+bone+metastatic+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cell-derived interleukin-28 drives the selection of apoptosis resistant bone metastatic prostate cancer.</a> Nat Commun. 12 (1), 723(2021).</li>
<li>Yuan, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cell+therapy+induces+flt3l+and+cd1c%28%2B%29+dendritic+cells+in+systemic+lupus+erythematosus+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cell therapy induces flt3l and cd1c(+) dendritic cells in systemic lupus erythematosus patients.</a> Nat Commun. 10 (1), 2498(2019).</li>
<li>Wang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Umbilical+cord+mesenchymal+stem+cell+transplantation+in+active+and+refractory+systemic+lupus+erythematosus%3A+A+multicenter+clinical+study%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Umbilical cord mesenchymal stem cell transplantation in active and refractory systemic lupus erythematosus: A multicenter clinical study.</a> Arthritis Res Ther. 16 (2), R79(2014).</li>
<li>Ortiz, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cell+engraftment+in+lung+is+enhanced+in+response+to+bleomycin+exposure+and+ameliorates+its+fibrotic+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cell engraftment in lung is enhanced in response to bleomycin exposure and ameliorates its fibrotic effects.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 100 (14), 8407-8411 (2003).</li>
<li>Phinney, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+heterogeneity+of+mesenchymal+stem+cells%3A+Implications+for+cell+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biochem%22%5BJournal%5D)">Functional heterogeneity of mesenchymal stem cells: Implications for cell therapy.</a> J Cell Biochem. 113 (9), 2806-2812 (2012).</li>
<li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+transcriptome+atlas+of+human+mesenchymal+stem+cells+exploring+cellular+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Single-cell transcriptome atlas of human mesenchymal stem cells exploring cellular heterogeneity.</a> Clin Transl Med. 11 (12), e650(2021).</li>
<li>Chen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+and+spatial+transcriptomics+decodes+wharton%27s+jelly-derived+mesenchymal+stem+cells+heterogeneity+and+a+subpopulation+with+wound+repair+signatures%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Sci+%28Weinh%29%22%5BJournal%5D)">Single-cell and spatial transcriptomics decodes wharton's jelly-derived mesenchymal stem cells heterogeneity and a subpopulation with wound repair signatures.</a> Adv Sci (Weinh). 10 (4), e2204786(2023).</li>
<li>Chen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissecting+heterogeneity+reveals+a+unique+bambi%28high%29+mfge8%28high%29+subpopulation+of+human+uc-mscs%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Sci+%28Weinh%29%22%5BJournal%5D)">Dissecting heterogeneity reveals a unique bambi(high) mfge8(high) subpopulation of human uc-mscs.</a> Adv Sci (Weinh). 10 (1), e2202510(2022).</li>
<li>Tsuji, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+different+cell-detaching+methods+on+the+viability+and+cell+surface+antigen+expression+of+synovial+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Effects of different cell-detaching methods on the viability and cell surface antigen expression of synovial mesenchymal stem cells.</a> Cell Transplant. 26 (6), 1089-1102 (2017).</li>
<li>Lai, T. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Different+methods+of+detaching+adherent+cells+and+their+effects+on+the+cell+surface+expression+of+fas+receptor+and+fas+ligand%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Different methods of detaching adherent cells and their effects on the cell surface expression of fas receptor and fas ligand.</a> Sci Rep. 12 (1), 5713(2022).</li>
<li>Avinash, K., Malaippan, S., Dooraiswamy, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+of+isolation+and+characterization+of+stem+cells+from+different+regions+of+oral+cavity+using+markers%3A+A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Methods of isolation and characterization of stem cells from different regions of oral cavity using markers: A systematic review.</a> Int J Stem Cells. 10 (1), 12-20 (2017).</li>
<li>Galvao, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rock+inhibition+drives+resolution+of+acute+inflammation+by+enhancing+neutrophil+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Rock inhibition drives resolution of acute inflammation by enhancing neutrophil apoptosis.</a> Cells. 8 (9), 964(2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>tubo de microcentrífuga de 0,6 mL</td><td>Corning&nbsp;</td>Tubos de microcentrífuga <td>Axygen MCT-060-A</td><td></td></tr><tr><td>de 1,5 mL Beijing</td><td>Labgic Technology</td><td>MCT-001-150</td><td></td></tr><tr><td>plato de cultivo celular de 100 mm&nbsp;</td><td>Beijing Labgic Technology</td><td>12311</td><td></td></tr><tr><td>Placa de 12 pocillos</td><td>Beijing Labgic Technology</td><td>11210</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de centrífuga de 15 mL</td><td>Nanjing Vazyme Material Technology</td><td>TCF00115</td><td></td></tr><tr><td>placa de 24 pocillos</td><td>Beijing Labgic Technology</td><td>11310</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de centrífuga de 50 mL</td><td>Nanjing Vazyme Material Technology</td><td>TCF00150</td><td></td></tr><tr><td>5 mL Tubos de fondo redondo</td><td>Corning</td><td>FALCON 352003</td><td></td></tr><tr><td>70 &mu; filtro de células m</td><td>Falcon</td><td>352350</td><td>Dilución: 1:1000</td></tr><tr><td>APC anti-humano CD79a (Ig&alpha;) Anticuerpo</td><td>BioLegend</td><td>333505</td><td>581 Dilución: 1:200</td></tr><tr><td>APC/Cyanine7 anti-humano CD73 (Ecto-5'-nucleotidasa) Anticuerpo</td><td>BioLegend</td><td>344022</td><td>G46-6 Dilución: 1:200</td></tr><tr><td>APC-Cy7 Mouse IgG1, &kappa; Control de isotipo</td><td>BD Bioscience</td><td>557873</td><td>MOPC-31C (Control de isotipo) Dilución: 1:200</td></tr><tr><td>BAMBI anticuerpo</td><td>Bioss</td><td>bs-12418R</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Violet 510 anti-ratón/humano CD44 Anticuerpo BioLegend</td><td></td><td>103044</td><td>5E10 Dilución: 1:200</td></tr><tr><td>Brilliant Violet 510 Rat IgG2b, &kappa; Anticuerpo Isotipo Ctrl</td><td>BioLegend</td><td>400646</td><td>MOPC-21 (control de isotipo) Dilución: 1:200</td></tr><tr><td>Anticuerpo monoclonal CD105 (endoglin)&nbsp; APC</td><td>eBioscience</td><td>17-1057-42</td><td>HM47 Dilución: 1:200</td></tr><tr><td>Portaobjetos de la cámara de recuento de células</td><td>Shanghái Centrífuga QIUJING</td><td>XB-K-25</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Beijing BAIYANG</td><td>BY-320C</td><td></td></tr><tr><td>ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix</td><td>Vazyme</td><td>Q711-02</td><td></td></tr><tr><td>Cloroformo</td><td>XILONG Scientific 13700908</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F-12 (1:1) básico (1x)</td><td>Gibco</td><td>C11330500BT</td><td></td></tr><tr><td>EDTA (0,5 M), pH 8,0, libre de rnasa</td><td>Invitrogen</td><td>AM9260G</td><td>Dilución: 1:1000</td></tr><tr><td>Etanol&nbsp; &nbsp;</td><td>XILONG Scientific 12803405</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Suero Fetal Bovino (FBS)</td><td>Gibco</td><td>10099-141C&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>FITC Ratón Anti-Humano CD34</td><td>BD Bioscience</td><td>555821</td><td>IM7 Dilución: 1:200</td></tr><tr><td>FITC Ratón Anti-Humano CD45</td><td>BD Bioscience</td><td>555482</td><td>AD2 Dilución: 1:200</td></tr><tr><td>FITC Ratón Anti-Humano HLA-DR</td><td>BD Bioscience</td><td>555811</td><td>SN6 Dilución: 1:200</td></tr><tr><td>Citómetro de flujo</td><td>BD Bioscience</td><td>FACSAria&trade; III Clasificador de CélulasAria</td><td></td></tr><tr><td>Flowjo</td><td>BD Bioscience</td><td>V10</td><td></td></tr><tr><td>Reactivo de Disociación Celular Suave</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>100-0485</td><td></td></tr><tr><td>Cabra Anti-Ratón IgG H& L (Alexa Fluor 488)</td><td>abcam</td><td>ab150113</td><td>HI30 Dilución: 1:200</td></tr><tr><td>Cabra Anti-Conejo IgG H& L (AlexaFluor 594)</td><td>abcam</td><td>ab150080</td><td>Dilución: 1:1000</td></tr><tr><td>HiScript II Q RT SuperMix para qPCR (+limpiador de ADNg)</td><td>Vazyme</td><td>R223-01</td><td></td></tr><tr><td>Microscopios invertidos</td><td>Nikon</td><td>ECLIPSE Ts2</td><td></td></tr><tr><td>Alcohol isopropílico</td><td>XILONG Scientific</td><td>12802505</td><td></td></tr><tr><td>anticuerpo MFGE8</td><td>Biorbyt</td><td>orb388429</td><td>Dilución: 1:100</td></tr><tr><td>Microcentrífuga</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>FRESCO 21</td><td></td></tr><tr><td>Ratón IgG1 kappa Control de isotipo APC</td><td>eBioscience</td><td>17-4714-42</td><td>P3.6.2.8.1 (Control de isotipo) Dilución: 1:200</td></tr><tr><td>Ratón IgG1 kappa Control de isotipo FITC</td><td>eBioscience</td><td>11-4714-42</td><td>eBMG2b (Control de isotipo) Dilución: 1:200</td></tr><tr><td>Ratón IgG2b kappa Control de Isotipo FITC</td><td>eBioscience</td><td>11-4732-42</td><td>RTK4530 (control de isotipo) Dilución: 1:200</td></tr><tr><td>PBS (10x)</td><td>Sangon Biotech (Shanghai)</td><td>E607016-0500</td><td></td></tr><tr><td>PE-Cy5 Ratón Anti-humano CD90&nbsp;</td><td>BD Bioscience</td><td>555597</td><td>P3.6.2.8.1 (control de isotipos) Dilución: 1:200</td></tr><tr><td>PE-Cy5 IgG1 de ratón y kappa; Control de isotipo</td><td>BD Bioscience</td><td>550618</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina-estreptomicina 100x</td><td>Cytiva</td><td></td><td>SV30010 Dilución: 1:100</td></tr><tr><td>Sistema de PCR en tiempo real</td><td>Applied Biosystems byThermo Fisher Scientific</td><td>Q6</td><td></td></tr><tr><td>Agua libre de ARNasa</td><td>QIAGEN</td><td>129112</td><td></td></tr><tr><td>Espectrofotómetro</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>NanoDrop One(840-317400)</td><td></td></tr><tr><td>Puntas de micropipeta estériles</td><td>Beijing Labgic Technology</td><td></td><td>Dilución: matraz de cultivo celular 1:100</td></tr><tr><td>T75</td><td>Beijing Labgic Technology</td><td>13212A</td><td></td></tr><tr><td>Thermal Cycler</td><td>Applied Biosystems byThermo Fisher Scientific</td><td>Veriti</td><td></td></tr><tr><td>Tri reactivo</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T9424</td><td></td></tr><tr><td>Typsin-EDTA Solution</td><td>Bio-Channel Biotechnology</td><td>BC-CE-005</td><td></td></tr><tr><td>CO2 con camisa al agua; Incubadora</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>3111</td><td></td></tr></tbody></table>

aislamiento de células estromales mesenquimales derivadas del cordón umbilical bambihumano con altocontenido de mfge8

Isolation of Human BAMBIhighMFGE8high Umbilical Cord-Derived Mesenchymal Stromal Cells

La Figura 1 muestra los perfiles de expresión de marcadores de superficie celular de UC-MSC humanas. Las MSC cultivadas fueron fuertemente positivas para la expresión de CD44, CD73, CD90 y CD105 y negativas para la expresión de CD14, CD34, CD45, CD79 y HLA-DR. LasBAMBI con altocontenido de MFGE8 se clasificaron a partir de las UC-MSC humanas cultivadas, y su expresión de BAMBI y MFGE8 se volvió a analizar mediante citometría de flujo después de la expansión durante 3-4 ...

Aislamiento de células estromales mesenquimales derivadas del cordón umbilical BAMBIhumano con altocontenido de MFGE8

Umbilical cord-derived mesenchymal stromal/stem cells (UC-MSCs) present low immunogenicity and potent immunomodulatory effects for treating various ...

isolation-human-bambihighmfge8high-umbilical-cord-derived-mesenchymal

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Este protocolo describe el aislamiento y la posterior expansión de células mesenquimales del estroma y las células endoteliales que forman colonias sin el uso de suero animal para generar pares con fines de trasplante autólogo experimental.

Aislamiento y suero animal expansión libre de cordón umbilical humano derivado de células mesenquimales del estroma (MSC) y endoteliales formadoras de colonias Células Progenitoras (ECFCs)

Las células madre mesenquimales (MSCs) tienen un potencial de diferenciación hacia el linaje osteoblástico cuando se estimulan con factores solubles o biomateriales específicos. Este trabajo presenta una opción novedosa para la administración de MSCs de la membrana amniótica humana (AM-hMSCs) que emplea la matriz ósea bovina Nukbone (NKB) como andamio.

El aislamiento de células madre mesenquimales humanas y su cultivo en la matriz del hueso poroso

Aquí, se presenta un protocolo para la disección de cordón umbilical humano umbilical (CU) y la muestra de placenta fetal en cable de forro (CL), gelatina de Wharton (WJ), la unión de cordón placenta (CPJ), y placenta fetal (FP) para el aislamiento y caracterización de células estromales mesenquimales (MSCs) utilizando la técnica de cultivo de explantes.

Aislamiento y caracterización de las células mesenquimales del estroma de cordón umbilical humano y fetal Placenta

Cordón umbilical humano (UC) puede obtenerse durante el período perinatal como consecuencia de la prematuro, término y entrega de postterm. En este protocolo, describimos el aislamiento y la caracterización de UC-derivados de células madre mesenquimales (MSCs-UC) de fetos/neonatos en 19-40 semanas de gestación.

Aislamiento y caracterización de humanas derivadas de cordón Umbilical las células madre mesenquimales de prematuros y recién nacidos a término

Este estudio presenta un procedimiento único de disección roma para preservar la integridad de la jalea de Wharton (WJ), lo que resulta en WJ menos dañado y una mayor cantidad y viabilidad de las células madre mesenquimales (MSC) recolectadas. El método demuestra un rendimiento y una capacidad proliferativa superiores en comparación con los métodos convencionales de disección aguda.

Aislamiento de células madre mesenquimales derivadas del cordón umbilical con alto rendimiento y bajo daño

En este informe, demuestran un sistema para aislar y cultivar células de donantes de la glándula mamaria de ratón, y ortotópicamente trasplante de estas células en ratones receptores para analizar estroma: interacciones epiteliales durante el desarrollo de tumores mamarios.

El trasplante de células del estroma mamario y células de carcinoma en los ratones C57BL/6J

Carcinoma asociados fibroblastos (CAF), rica en miofibroblastos presentes en el estroma tumoral, juegan un papel importante en la conducción de la progresión del tumor. Hemos desarrollado un modelo de tumor coimplantation xengraft para generar experimentalmente CAF a partir de fibroblastos humanos mamarios. El protocolo describe cómo establecer miofibroblastos CAF que adquirir la capacidad de promover la génesis tumoral.

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El método se describe el aislamiento y caracterización de células humanas de la Pulpa Dental madre (hDPSCs) mediante el uso de cualquiera de los...

Diferenciación de aislamiento, caracterización y comparativo de las células madre derivadas de la Pulpa Dental de los dientes permanentes mediante dos métodos diferentes

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El establecimiento de los sistemas primarios de células endometriales estromales de cultivo a partir de especímenes de histerectomía es una técnica biológica valiosa y un paso crucial antes de continuar con una amplia gama de objetivos de investigación. Aquí se describen dos métodos utilizados para establecer cultivos de estroma de los tejidos del endometrio resecado quirúrgicamente de pacientes humanos.

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Aprende a aislar células estromales mesenquimales BAMBI alto MFGE8 alto del cordón umbilical humano mediante citometría de flujo. Este método permite caracterizar subpoblaciones específicas para aplicaciones en medicina regenerativa y terapias celulares.

Aislamiento de células estromales mesenquimales derivadas del cordón umbilical BAMBI^{humano con alto}contenido de MFGE8

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