Name: Detección de autoanticuerpos anti-MDA5 mediante células HeLa e inmunocitoquímica con microscopía óptica (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-31T14:05:00.000+00:00
Duration: 10 min 55 s
Description: Aprende a detectar autoanticuerpos anti-MDA5 mediante inmunocitoquímica en células HeLa transfectadas. Este método mejora el diagnóstico de la enfermedad pulmonar intersticial asociada a miositis.

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<ol><li>Mehta, P., Machado, P. M., Gupta, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+and+managing+anti-MDA5+dermatomyositis%2C+including+potential+COVID-19+mimicry%5BTitle%5D)+AND+%22Rheumatol+Int%22%5BJournal%5D)">Understanding and managing anti-MDA5 dermatomyositis, including potential COVID-19 mimicry.</a> Rheumatol Int. 41 (6), 1021-1036 (2021).</li>
<li>Tansley, S. L., McHugh, N. J., Wedderburn, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+and+juvenile+dermatomyositis%3A+are+the+distinct+clinical+features+explained+by+our+current+understanding+of+serological+subgroups+and+pathogenic+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Adult and juvenile dermatomyositis: are the distinct clinical features explained by our current understanding of serological subgroups and pathogenic mechanisms.</a> Arthritis Res Ther. 15 (2), 211(2013).</li>
<li>Fujisawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+myositis-associated+interstitial+lung+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Medicina%22%5BJournal%5D)">Management of myositis-associated interstitial lung disease.</a> Medicina. 57 (4), 347(2021).</li>
<li>Sasaki, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+initiation+of+plasma+exchange+therapy+for+a+patient+with+anti-MDA5+autoantibody-positive+dermatomyositis+developing+rapidly+progressive+interstitial+lung+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Mod+Rheumatol+Case+Rep%22%5BJournal%5D)">Early initiation of plasma exchange therapy for a patient with anti-MDA5 autoantibody-positive dermatomyositis developing rapidly progressive interstitial lung disease.</a> Mod Rheumatol Case Rep. 5 (1), 87-92 (2021).</li>
<li>Go, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+benefit+associated+with+early+cyclosporine+treatment+for+dermatomyositis-associated+interstitial+lung+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Rheumatol+Int%22%5BJournal%5D)">Survival benefit associated with early cyclosporine treatment for dermatomyositis-associated interstitial lung disease.</a> Rheumatol Int. 36 (2), 125-132 (2015).</li>
<li>Tsuji, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multicenter+prospective+study+of+the+efficacy+and+safety+of+combined+immunosuppressive+therapy+with+high-dose+glucocorticoid%2C+tacrolimus%2C+and+cyclophosphamide+in+interstitial+lung+diseases+accompanied+by+anti-melanoma+differentiation-associated+gene+5-positive+dermatomyositis%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheumatol%22%5BJournal%5D)">Multicenter prospective study of the efficacy and safety of combined immunosuppressive therapy with high-dose glucocorticoid, tacrolimus, and cyclophosphamide in interstitial lung diseases accompanied by anti-melanoma differentiation-associated gene 5-positive dermatomyositis.</a> Arthritis Rheumatol. 72 (3), 488-498 (2020).</li>
<li>Hozumi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+assessment+of+myositis-specific+autoantibodies+in+polymyositis%2Fdermatomyositis-associated+interstitial+lung+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Respir+Med%22%5BJournal%5D)">Comprehensive assessment of myositis-specific autoantibodies in polymyositis/dermatomyositis-associated interstitial lung disease.</a> Respir Med. 122, 1-8 (2016).</li>
<li>Nakashima, R., Hosono, Y., Mimori, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+significance+and+new+detection+system+of+autoantibodies+in+myositis+with+interstitial+lung+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Lupus%22%5BJournal%5D)">Clinical significance and new detection system of autoantibodies in myositis with interstitial lung disease.</a> Lupus. 25 (8), 925-933 (2016).</li>
<li>Koga, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+diagnostic+utility+of+anti-melanoma+differentiation-associated+gene+5+antibody+testing+for+predicting+the+prognosis+of+Japanese+patients+with+DM%5BTitle%5D)+AND+%22Rheumatology%22%5BJournal%5D)">The diagnostic utility of anti-melanoma differentiation-associated gene 5 antibody testing for predicting the prognosis of Japanese patients with DM.</a> Rheumatology. 51 (7), 1278-1284 (2012).</li>
<li>Fuzzi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-MDA5+dermatomyositis%3A+an+update+from+bench+to+bedside%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Rheumatol%22%5BJournal%5D)">Anti-MDA5 dermatomyositis: an update from bench to bedside.</a> Curr Opin Rheumatol. 34 (6), 365-373 (2022).</li>
<li>Sato, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoantibodies+to+a+140-kd+polypeptide%2C+CADM-140%2C+in+Japanese+patients+with+clinically+amyopathic+dermatomyositis%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheum%22%5BJournal%5D)">Autoantibodies to a 140-kd polypeptide, CADM-140, in Japanese patients with clinically amyopathic dermatomyositis.</a> Arthritis Rheum. 52 (5), 1571-1576 (2005).</li>
<li>Tansley, S. L., Diederichsen, L. P., Zampeli, V. A., McHugh, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+reliability+of+immunoassays+to+detect+autoantibodies+in+patients+with+myositis+is+dependent+on+autoantibody+specificity%5BTitle%5D)+AND+%22Rheumatology%22%5BJournal%5D)">The reliability of immunoassays to detect autoantibodies in patients with myositis is dependent on autoantibody specificity.</a> Rheumatology. 59 (5), 1029-1034 (2020).</li>
<li>Chen, Y. L., Li, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positive+predictive+value+of+myositis+antibody+line+blot+testing+in+patients+with+suspected+idiopathic+inflammatory+myopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+Nerve%22%5BJournal%5D)">Positive predictive value of myositis antibody line blot testing in patients with suspected idiopathic inflammatory myopathy.</a> Muscle Nerve. 69 (3), 345-350 (2024).</li>
<li>Nombel, A., Pin, J. J., Fabien, N., Miossec, P., Coutant, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+performance+of+an+indirect+immunofluorescence+assay+for+the+detection+of+anti-MDA5+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedicines%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the performance of an indirect immunofluorescence assay for the detection of anti-MDA5 antibodies.</a> Biomedicines. 10 (12), 3125(2022).</li>
<li>Nakashima, R., Hosono, Y., Mimori, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+significance+and+new+detection+system+of+autoantibodies+in+myositis+with+interstitial+lung+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Lupus%22%5BJournal%5D)">Clinical significance and new detection system of autoantibodies in myositis with interstitial lung disease.</a> Lupus. 25 (8), 925-933 (2016).</li>
<li>Sato, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoantibodies+to+a+140-kd+polypeptide%2C+CADM-140%2C+in+Japanese+patients+with+clinically+amyopathic+dermatomyositis%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheum%22%5BJournal%5D)">Autoantibodies to a 140-kd polypeptide, CADM-140, in Japanese patients with clinically amyopathic dermatomyositis.</a> Arthritis Rheum. 52 (5), 1571-1576 (2005).</li>
<li>Chang, Y. C., Yang, L., Budhram, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positive+predictive+value+of+myositis+antibody+line+blot+testing+in+patients+with+suspected+idiopathic+inflammatory+myopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+Nerve%22%5BJournal%5D)">Positive predictive value of myositis antibody line blot testing in patients with suspected idiopathic inflammatory myopathy.</a> Muscle Nerve. 69 (5), 626-630 (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Placas de 24 pozos (1,9 cm&sup2;/pozo)</td><td>Corning</td><td>354541</td><td></td></tr><tr><td>Antimicoótico antibiótico</td><td>Gibco</td><td>15240062</td><td></td></tr><tr><td>Vasos</td><td>PYREX</td><td>1000-600</td><td></td></tr><tr><td>Tubos cónicos (15 mL)</td><td>Corning</td><td>430052</td><td></td></tr><tr><td>Tubos cónicos (50 mL)</td><td>Corning</td><td>430290</td><td></td></tr><tr><td>Agua destilada desionizada</td><td></td><td></td><td>Nuestra agua destilada desionizada se produce internamente mediante un sistema Milli-Q (Columna 1: Quantum TEX, SN: F4EB53476; Columna 2: Prepak, SN: F1CB11442)</td></tr><tr><td>Suero bovino fetal caracterizado</td><td>Cytiva</td><td>SH30396.03</td><td></td></tr><tr><td>cilindros graduados (50 mL)</td><td>VITLAB</td><td>64804</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxilina Gill II</td><td>Leica</td><td>3801522</td><td></td></tr><tr><td>Hyclone Dulbecco' s Eagle Medium modificado con glucosa alta</td><td>Cytiva</td><td>SH30243.02</td><td></td></tr><tr><td>Reactivo de transfección lipofectamina 2000</td><td>Invitrogen</td><td>11668019</td><td>Reactivo de transfección</td></tr><tr><td>MDA-5 (D74E4) Rabbit mAb</td><td>Tecnología de señalización celular</td><td>5321</td><td></td></tr><tr><td>Tubos microcentrífugas (tubos Eppendorf de 1,5 mL)</td><td>AXYGEN</td><td>142503</td><td></td></tr><tr><td>Medio sérico reducido de Opti-MEM I</td><td>Gibco</td><td>31985070</td><td></td></tr><tr><td>Agitador orbital (opcional)</td><td>FIRSTEK</td><td>S300R</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehido</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td>4% en 1x PBS</td></tr><tr><td>PBS</td><td>PRO TECH</td><td>ME222605</td><td></td></tr><tr><td>pENTER-MDA5</td><td>Vigene Biosciences Inc.</td><td>CH863586</td><td></td></tr><tr><td>Peroxidasa AffiniPure Goat Anti-Human IgG (H+L)</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>109-035-003</td><td></td></tr><tr><td>Controlador de pipeta</td><td>Termo Científica</td><td>130165</td><td></td></tr><tr><td>Pipettes&nbsp;</td><td>GILSON</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipetas y puntas de pipeta (10 y micro; L)</td><td>QSP</td><td>104-Q</td><td></td></tr><tr><td>Pipetas y puntas de pipeta (200 y micro; L)</td><td>QSP</td><td>T090-Q</td><td></td></tr><tr><td>Pipetas y puntas de pipeta (1000 y micro; L)</td><td>QSP</td><td>111-Q</td><td></td></tr><tr><td>Pipetas serológicas (5 mL)</td><td>SPL</td><td>91005</td><td></td></tr><tr><td>Pipetas serológicas (10 mL)</td><td>SPL</td><td>91010</td><td></td></tr><tr><td>Pipetas serológicas (25 mL)</td><td>SPL</td><td>91025</td><td></td></tr><tr><td>Kit de sustrato DAB SignalStain</td><td>Señalización celular</td><td>8059</td><td>0,3% en PBS</td></tr></tbody></table>

detección de autoanticuerpos anti-mda5 mediante células hela e inmunocitoquímica con microscopía óptica

Detection of Anti-MDA5 Autoantibodies Using HeLa Cells and Immunocytochemistry with Light Microscopy

El personal que realizó las pruebas no tuvo en cuenta las identidades de las muestras, incluidos los pacientes específicos de los que se obtuvieron, para minimizar el posible sesgo en el proceso de evaluación. Sin embargo, aunque las muestras de control sanas no se sometieron a cegamiento, produjeron resultados claros e inequívocos de manera consistente.
La Figura 1A demuestra la expresión exitosa d...

Detección de autoanticuerpos anti-MDA5 mediante células HeLa e inmunocitoquímica con microscopía óptica

Anti-MDA5 autoantibodies are critical biomarkers for dermatomyositis (DM), amyopathic dermatomyositis (CADM), and polymyositis (PM), particularly in ...

detection-anti-mda5-autoantibodies-using-hela-cells

Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

Durante los últimos años, los ensayos basados ​​en células vivas se han utilizado con éxito para detectar anticuerpos contra antígenos de superficie y conformacionales. Aquí se describe un método que utiliza el flujo de alto rendimiento citometría permite el análisis de grandes cohortes de pacientes. La detección de nuevos anticuerpos será mejorar el diagnóstico y el tratamiento de trastornos del sistema inmune-mediada.

Ensayo de alto rendimiento basado en células citometría de flujo para detectar anticuerpos a la N-metil-D-aspartato receptor o dopamina-2 del receptor en suero humano

Aquí se describen dos ensayos para medir la activación del complemento inducida por anticuerpos contra las células rojas de la sangre. La principal ventaja sobre los ensayos actuales es su naturaleza cuantitativa y fácil de interpretar.

Los métodos para la detección cuantitativa de anticuerpos inducida por la activación del complemento en los glóbulos rojos

El protocolo para detectar células autorreactivas T CD4 en el cerebro y el corazón mediante tinción directa con complejo mayor de histocompatibilidad de clase II dextramers se ha descrito en el presente informe. Para el análisis integral, un método fiable para enumerar las frecuencias de células T CD4 + específicas de antígeno in situ también se ideó.

La detección in situ de las células T CD4 Autoreactive en Cerebro y Corazón Uso Mayor de Histocompatibilidad clase II Dextramers

Comprender las conformaciones de los antígenos de superficie viral es necesario para evaluar la neutralización de anticuerpos y guiar el diseño de inmunógenos de vacunas efectivos. En este trabajo describimos un ensayo ELISA basado en células que permite estudiar el reconocimiento de la trimérica VIH-1 Env expresada en la superficie de las células transfectadas por anticuerpos anti-Env específicos.

Evaluación conformacional del VIH-1 glicoproteínas de la envoltura trimérica El uso de un ELISA ensayo basado en células

Complejos HLA / péptido intactos clase I se derraman por las células cancerosas, lo que representa un potencial biomarcador del cáncer relevante. Utilizando la tecnología de sensor de etiqueta libre y receptor de células T imitando anticuerpos monoclonales, detección de cobertizo MIF / HLA-A * 02: 01 complejos en los sobrenadantes de células MDA-MB-231, Punta de suero humano, y el plasma del paciente se demuestra, lo que permite el desarrollo de una novela cáncer de la plataforma de...

La detección del antígeno leucocitario humano biomarcadores en cáncer de mama Utilizando-Label gratuita tecnología de biosensores

Describimos aquí un método para generar microarrays de antígenos personalizables que se pueden utilizar para la detección simultánea de autoanticuerpos séricos IgG e IgM de humanos y ratones. Estas matrices permiten la detección cuantitativa y de alto rendimiento de anticuerpos contra cualquier antígeno o epítopo de interés.

Generación de dos colores con antígeno microarrays para la detección simultánea de autoanticuerpos IgG e IgM

Hemos expresado ectopically subunidad NR1 del receptor NMDA etiquetada con proteína verde fluorescente en células embrionarias humanas (HEK293) como antígeno para detectar autoanticuerpos contra el receptor de NMDA en la sangre de pacientes con encefalitis autoinmune. Este sencillo método puede ser adecuado para la detección de propósitos en contextos clínicos.

Un análisis de la inmunofluorescencia celular Simple para detectar autoanticuerpos contra el Receptor N-metil-D-Aspartato (NMDA) en sangre

Autoanticuerpos DFS70 imitan patrones de anticuerpos antinucleares asociados a enfermedad comunes haciendo interpretación desafiante al usar sustratos convencionales de HEp-2. El protocolo describe ventajas de sustrato de HEp-2 Ingeniería novela sobre HEp-2 convencional en ANA screening y distinguir patrones de DFS70 con alta confianza en monoespecíficas y mixtas en casos positivos de ANA.

Distinción simultánea de monoespecíficas y patrones mixtos DFS70 durante la proyección de ANA con un sustrato de la novela nocaut en ELITE/DFS70 HEp-2

Describimos un modelo de inmunización in vivo, traslacional de hepatitis en ratones BALB / c que se puede utilizar para estudiar la patogénesis de la hepatitis autoinmune inducida por medicamentos, incluidas las diferencias de sexo observadas en esta enfermedad. Describiremos cómo este modelo demuestra análisis reproducibles utilizando técnicas experimentales in vivo e in vitro.

Inducción de hepatitis autoinmune inducida por fármacos en ratones BALB/c para el estudio de sus mecanismos patógenos

Este artículo proporciona una metodología detallada para la medición de isolevuglandinas en tejidos por inmunofluorescencia utilizando el anticuerpo ScFv D11 conjugado con fosfatasa alcalina. Los modelos de hipertensión tanto en ratones como en humanos se utilizan para explicar los procedimientos paso a paso y los principios fundamentales asociados con la medición de isolevuglandina en muestras de tejido.

Detección directa de isolevuglandinas en tejidos utilizando una proteína de fusión de fosfatasa alcalina scFv D11 e inmunofluorescencia

En la infección por Mycoplasma pneumoniae, las pruebas serológicas pueden generar buenos resultados, pero con baja especificidad debido a la reacción inmunológica cruzada. El ELISA interno de captura de antígeno, descrito en este documento, garantiza una alta especificidad de la especie y ha demostrado ser una prueba de detección confiable para el diagnóstico preciso de M. pneumoniae.

Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas de captura de antígeno para la detección específica de Mycoplasma pneumoniae

Aprende a detectar autoanticuerpos anti-MDA5 mediante inmunocitoquímica en células HeLa transfectadas. Este método mejora el diagnóstico de la enfermedad pulmonar intersticial asociada a miositis.

Detección de autoanticuerpos anti-MDA5 mediante células HeLa e inmunocitoquímica con microscopía óptica

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