Procedimiento de implante quirúrgico y configuración de cableado para la monitorización continua de EEG/ECG a largo plazo en conejos

Mediante el uso de registros continuos de EEG y ECG, el objetivo del estudio es monitorear simultáneamente la actividad eléctrica tanto en el cerebro como en el corazón. Esto proporciona una plataforma que nos permite examinar la cascada multisistémica de eventos que rodean a las arritmias cardíacas, las convulsiones epilépticas y, en última instancia, que conducen a la muerte súbita. Este sistema de registro adquiere EEG y ECG las 24 horas del día, los 7 días de la semana de múltiples conejos sin restricciones durante varios estados fisiológicos y eventos episódicos raros circundantes.

Facilita las grabaciones continuas sin necesidad de supervisión directa, es asequible, proporciona datos inmediatos directamente al investigador y no requiere la sustitución de baterías propiedad de terceros. El desarrollo de una configuración de grabación cableada hecha a medida se construyó para facilitar que el conejo se moviera libremente en su entorno de alojamiento natural. Los cables están revestidos para protegerlos de las picaduras.

Por lo tanto, el mazo de cables y el túnel de todos los electrodos debajo de la piel permiten registros continuos durante varios estados fisiológicos. Con nuestro sistema, acumulamos una gran cantidad de datos de alta calidad que nos permiten investigar la prevalencia, el sustrato y los desencadenantes de la actividad eléctrica anormal en el cerebro y el corazón. También nos permite evaluar la concordancia entre el EEG y las anomalías del ECG, que pueden conducir a la muerte súbita.

Para comenzar, obtenga el enchufe complementario para el puerto alon con el eslabón giratorio que retiene nueve cables preconectados a cada lado. Con un cortador de alambre, recorte los cables a cinco centímetros en el lado giratorio más pequeño y quite cinco milímetros del recubrimiento de alambre de los extremos. Deslice un trozo de dos centímetros de tubo retráctil pequeño sobre cada cable del tapón complementario.

Suelde bien los cables. Para cada cable, deslice el tubo retráctil sobre las conexiones soldadas. Con una pistola de calor, encoja el tubo para fijarlo firmemente en su lugar.

A continuación, pase un trozo largo de tubo retráctil grande sobre el tapón, deslizándolo para cubrir toda la longitud del haz de cables. En el lado giratorio más grande, pele cinco milímetros de recubrimiento de alambre del extremo de cada cable con un pelacables y deslice una pieza de revestimiento de metal de más de 45 centímetros de largo sobre el haz de cables. A continuación, conecte los cables del lado más grande del eslabón giratorio a los cables de los electrodos cortados.

Coloque un pequeño tubo retráctil sobre cada conexión y use una pistola de calor para asegurar el tubo en su lugar. Ahora deslice la cubierta metálica sobre los cables recién conectados y gírelos. Después de estirar el revestimiento de metal, marque la ubicación en el revestimiento de nailon como referencia.

A continuación, deslice una pieza de un centímetro de tubo de goma de 15 milímetros de diámetro exterior sobre el revestimiento de nailon y el haz de alambre. Coloque un trozo de tubo retráctil grande de tres centímetros sobre el tubo de goma y fíjelo. Agregue dos piezas de tubo termorretráctil de un centímetro de largo sobre el revestimiento de metal sin estirar a distancias de 20 y 24 centímetros del tapón.

Para comenzar, ensamble todo el mazo de cables necesario para el procedimiento. Después de colocar al conejo anestesiado, haga cuatro marcas pequeñas con un marcador de punta estéril en los sitios de colocación de electrocardiogramas o electrodos de ECG previstos. Haz una incisión longitudinal de 2,5 a 3,5 centímetros en el flanco derecho del conejo.

Usando hemostáticos, realice la disección ventral para crear una bolsa subdérmica, asegurándose de que la bolsa se extienda a las cuatro ubicaciones marcadas. Usando el extremo sin aguja de la sutura de monofilamento 3-0, ate tres juegos de nudos quirúrgicos alrededor de la base del electrodo de ECG. Pase la aguja conectada al electrodo de ECG a través de la bolsa subdérmica y salga en el lugar marcado correspondiente.

Aplique una tracción suave para colocar el electrodo de ECG en el lugar marcado. Libere la tracción y palpe el área para verificar que el electrodo permanezca en su lugar. Para asegurar el electrodo, pase la sutura y la aguja del monofilamento 3-O a través de la piel del conejo adyacente al sitio de salida del electrodo.

Tire de la sutura parcialmente a través de la piel y haga un nudo quirúrgico estándar. Desde la incisión en el flanco del conejo, diseccione sin rodeos hacia el ángulo inferior de las escápulas y luego hasta la base de la cabeza. Después de colocar al conejo en posición prona, use un marcador de punta estéril para colocar cinco puntos pequeños en los sitios de colocación de electroencefalogramas o electrodos de EEG.

Realiza una pequeña incisión transversal en la cabeza de 1,5 centímetros entre los aspectos anteriores de la base de las orejas. Sin rodeos, diseccionar caudal y cranealmente desde la incisión hasta que se forme una bolsa subdérmica. Inserte pinzas grandes en la incisión en el flanco antes de abrir las pinzas y levantar la piel en el sitio marcado para el puerto.

Utiliza una herramienta de biopsia con sacabocados de seis milímetros para crear un orificio circular en el sitio marcado. Después de cubrir el tapón del cable con plástico o goma, empuje el lado del tapón del puerto a través del orificio hecho por la biopsia por punción. A continuación, presione la piel hasta la base del puerto para que quede tensa.

Coloque una junta de goma sobre el puerto y empújelo hacia abajo hasta que quede al ras de la piel. Mete el exceso de alambre en el bolsillo subdérmico en la espalda y el flanco. Ahora junte suavemente la piel y cierre todos los sitios de incisión con puntos simples e interrumpidos.

Aplique una mezcla acrílica en el exterior del puerto, creando una pequeña cúpula que sella el sitio del puerto a la piel. Después de que el acrílico se solidifique, coloque una gasa estéril sobre el sitio de la incisión en el flanco y envuelva sin apretar al conejo con una envoltura veterinaria. Pasa el mazo de cables a través de un agujero ubicado en la parte superior central de la jaula del conejo.

Conecte los conectores DIN en el dispositivo de monitoreo apropiado y coloque un cable retractor en la parte superior interior de la jaula cerca del orificio para el mazo de cables. Extienda el cable retractor que tiene un clip de plástico en el extremo y fije el clip al mazo de cables en la ubicación entre las dos piezas de tubo retráctil. Finalmente, conecte el enchufe del mazo de cables al enchufe en el lomo del conejo y registre la señal del dispositivo de monitoreo.

Se registraron señales estables de EEG y ECG de un conejo de tres meses de edad utilizando electrodos implantados crónicamente que mantuvieron su posición sin rechazo ni infección. Se observó que los datos de alta resolución de la variabilidad de la frecuencia cardíaca y las métricas cardíacas realizaban ciclos cada 30 minutos. Las señales de EEG y ECG capturadas durante el acicalamiento demostraron una sólida estabilidad de la señal a pesar del movimiento del conejo, manteniendo una alta calidad de la señal para el análisis.

La administración proconvulsiva de fármacos indujo distintos estallidos theta en las derivaciones del EEG occipital, que se registraron junto con las señales normales del ECG del ritmo sinusal. Las dosis más altas del proconvulsivo desencadenaron convulsiones, y el EEG mostró ráfagas preictales de theta, artefactos crónicos y señales del período tónico ictal. El ECG mostró anormalidades de la onda T indicativas de hipoxia durante el período tónico ictal, volviendo a la normalidad preictal después de la convulsión.