Name: Criosección e inmunotinción de retina de ratón (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 30 s
Description: Aprende a preparar criosecciones de retina de ratón e inmunotinción de fotorreceptores con este protocolo reproducible. Preserva la morfología tisular para estudiar enfermedades retinianas con alta calidad.

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<ol><li>Tokuyasu, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunochemistry+on+ultrathin+frozen+sections%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem+J%22%5BJournal%5D)">Immunochemistry on ultrathin frozen sections.</a> Histochem J. 12 (4), 381-403 (1980).</li>
<li>Ramos-Vara, J. A., Miller, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((When+tissue+antigens+and+antibodies+get+along%3A+Revisiting+the+technical+aspects+of+immunohistochemistry--the+red%2C+brown%2C+and+blue+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Pathol%22%5BJournal%5D)">When tissue antigens and antibodies get along: Revisiting the technical aspects of immunohistochemistry--the red, brown, and blue technique.</a> Vet Pathol. 51 (1), 42-87 (2014).</li>
<li>Usukura, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cryosectioning+technique+for+the+observation+of+intracellular+structures+and+immunocytochemistry+of+tissues+in+atomic+force+microscopy+%28AFM%29%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A cryosectioning technique for the observation of intracellular structures and immunocytochemistry of tissues in atomic force microscopy (AFM).</a> Sci Rep. 7 (1), 6462(2017).</li>
<li>Park, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Supramolecular+organization+of+rhodopsin+in+rod+photoreceptor+cell+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Pflugers+Arch%22%5BJournal%5D)">Supramolecular organization of rhodopsin in rod photoreceptor cell membranes.</a> Pflugers Arch. 473 (9), 1361-1376 (2021).</li>
<li>Boonstra, H., Oosterhuis, J. W., Oosterhuis, A. M., Fleuren, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cervical+tissue+shrinkage+by+formaldehyde+fixation%2C+paraffin+wax+embedding%2C+section+cutting+and+mounting%5BTitle%5D)+AND+%22Virchows+Arch+A+Pathol+Anat+Histopathol%22%5BJournal%5D)">Cervical tissue shrinkage by formaldehyde fixation, paraffin wax embedding, section cutting and mounting.</a> Virchows Arch A Pathol Anat Histopathol. 402 (2), 195-201 (1983).</li>
<li>Stradleigh, T. W., Ishida, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fixation+strategies+for+retinal+immunohistochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Fixation strategies for retinal immunohistochemistry.</a> Prog Retin Eye Res. 48, 181-202 (2015).</li>
<li>Thavarajah, R., Mudimbaimannar, V. K., Elizabeth, J., Rao, U. K., Ranganathan, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+and+physical+basics+of+routine+formaldehyde+fixation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Oral+Maxillofac+Pathol%22%5BJournal%5D)">Chemical and physical basics of routine formaldehyde fixation.</a> J Oral Maxillofac Pathol. 16 (3), 400-405 (2012).</li>
<li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+method+for+preparation+of+mouse+retinal+cryosections%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Histochem%22%5BJournal%5D)">An improved method for preparation of mouse retinal cryosections.</a> Eur J Histochem. 64 (3), 3154(2020).</li>
<li>Yang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+quick+protocol+for+the+preparation+of+mouse+retinal+cryosections+for+immunohistochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Open+Biol%22%5BJournal%5D)">A quick protocol for the preparation of mouse retinal cryosections for immunohistochemistry.</a> Open Biol. 11 (7), 210076(2021).</li>
<li>Szel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+topographic+separation+of+two+spectral+classes+of+cones+in+the+mouse+retina%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Unique topographic separation of two spectral classes of cones in the mouse retina.</a> J Comp Neurol. 325 (3), 327-342 (1992).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>-80 &deg; Congelador C</td><td>Haier</td><td>DW-86L626</td><td></td></tr><tr><td>Portaobjetos de microscopio de adhesión</td><td>CITOTEST</td><td>80312-3161</td><td></td></tr><tr><td>Alexa488-Cabra anti-Conejo</td><td>Proteintech</td><td>SA00006-2</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J</td><td>ratón The Jackson Laboratory</td><td>664</td><td></td></tr><tr><td>Microtomo de criosección</td><td>Leica</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Criostato</td><td>LEICA</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Tecnología de señalización celular</td> <td>DAPI</td><td>4083S</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio de disección</td><td>ZEISS</td><td>3943030830</td><td></td></tr><tr><td>Suero de burro</td><td>Solarbio</td><td>S9100</td><td></td></tr><tr><td>Moldes de inclusión</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>1841</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras de disección fina</td><td>RWD</td><td>S13001-10</td><td></td></tr><tr><td>Pinza fina</td><td>RWD</td><td>F11020-11</td><td></td></tr><tr><td>Medio de montaje acuoso de fluoromount</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F4680</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora</td><td>Shanghai Yuejin</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1049330500</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1048771000</td><td></td></tr><tr><td>toallitas Kimwipe</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>FIS-06666</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio confocal láser</td><td>ZEISS</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Cubierta de microscopio Vidrio</td><td>CITOTEST</td><td>80340-3610</td><td></td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1065860500</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9888</td><td></td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1091371003</td><td></td></tr> compuesto <tr><td>O.C.T</td><td>Sakura</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>Bolígrafo</td><td>Pap Sigma-Aldrich Z672548</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PFA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>441244</td><td></td></tr><tr><td>Conejo anti-PDE6B</td><td>Proteintech</td><td>22063-1-AP</td><td></td></tr><tr><td>Agitador</td><td>SCILOGEX</td><td>8042210200</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras de resorte</td><td>RWD</td><td>S11036-08</td><td></td></tr><tr><td>Sacarosa</td><td>BioFroxx</td><td>1245GR500</td><td></td></tr><tr><td>Super glue</td><td>Deli</td><td>7147S</td> Cordaje de <td></td></tr><tr><td>tenis (1.24 mm)</td><td>Gosen</td><td>TS761</td><td></td></tr><tr><td>Tribromoetanol</td><td>Macklin</td><td>T831042</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Solarbio</td><td>IT9100</td><td></td></tr></tbody></table>

criosección e inmunotinción de retina de ratón

Cryosectioning and Immunostaining of Mouse Retina

Siguiendo el protocolo descrito anteriormente, los ojos de ratones C57Bl/6J de tipo salvaje de 1 mes de edad se fijaron en PFA al 4%. A continuación, las muestras fijadas se incrustaron en OCT y se crioseccionaron. Las secciones se inmunotiñeron con un anticuerpo anti-PDE6B y se contratiñeron con DAPI para marcar los núcleos. PDE6B es una proteína de fototransducción que se expresa específicamente en las células fotorreceptoras de bastones4. En comparación con los protocolos tradicionales, este pr...

Criosección e inmunotinción de retina de ratón

Tissue sectioning and immunohistochemistry are essential techniques in histological and pathological studies of retinal diseases using animal models. ...

cryosectioning-and-immunostaining-of-mouse-retina

Research

Investigación

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociencia

La retina murino neonatal proporciona un modelo bien caracterizado fisiológica de la angiogénesis, que permite que las investigaciones de las funciones de los diferentes genes o fármacos que modulan la angiogénesis en...

Todo el montaje de la tinción de inmunofluorescencia del Neonatal ratón Retina de investigar Angiogénesis<em&gt; En vivo</em

El método de inmunogold postincrustado es una de las formas más efectivas de proporcionar análisis de alta resolución de la localización subcelular de moléculas específicas. En este trabajo describimos un protocolo para analizar cuantitativamente los receptores de glutamato en las sinapsis de la cinta retiniana.

Resolución de alta Análisis Cuantitativo Inmunoelectrónica de Receptores de Membrana en la retina cinta sinapsis

Demostrar técnicas de preparación de tres tejidos diferentes para la visualización de immunohistochemical del pericitos microvasculares retina de rata, es decir, cryo-secciones, todo-montajes e hipotónica aislamiento de la red vascular.

Retinales crio-secciones, montajes de todo y vasculatura aislado hipotónica preparados para la visualización de Immunohistochemical del pericitos microvasculares

Este informe describe métodos completos para preparar secciones de retina de ratón congeladas para inmunohistoquímica (IHC).  Los métodos descritos incluyen disección de la copa ocular posterior, fijación de paraformaldehído, incrustación en la temperatura de corte óptima (OCT) orientación de medios y tejidos, seccionamiento e inmunomancha.

Preparación de criosecciones retinianas de ratón para inmunohistoquímica

Aquí presentamos un protocolo para adaptar el método de la CLARIDAD de los tejidos cerebrales para las retinas del entero-montaje para mejorar la calidad de la coloración immunohistochemical estándar y de la proyección de imagen de alta resolución de neuronas retinianas y de sus estructuras subcelulares.

Inmunostaining De Retinas De Montaje Completo Con El Método De Claro De Tejido CLARITY

Este protocolo presenta dos técnicas para aislar los compartimentos subcelulares de los fotorreceptores de bastón murino para el análisis de proteínas. El primer método utiliza retina viva y papel de filtro de celulosa para separar los segmentos externos de la varilla, mientras que el segundo emplea retinas liofilizadas y cinta adhesiva para pelar las capas internas y externas de la varilla.

Dos métodos de peeling para el aislamiento de compartimentos de células fotorreceptoras en la retina del ratón para el análisis de proteínas

Aquí se presenta un protocolo detallado de inmunohistoquímica para identificar, validar y apuntar a caspasas funcionalmente relevantes en tejidos complejos.

Cuantificación de caspasa-9 inmunoteñida en tejido retiniano

Este protocolo describe el procedimiento para aislar la retina de ratón de montaje completo y realizar inmunotinción para marcar todas las células ganglionares de la retina (RGC). Al proceso le siguen las imágenes y el recuento automático de las RGC mediante un software basado en IA, lo que proporciona un método sencillo, rápido y preciso para cuantificar las RGC en toda la retina del ratón.

Inmunotinción de montaje completo y recuento automático de células ganglionares de la retina de ratón

Los pericitos de la vasculatura de la retina se examinaron mediante tinción inmunofluorescente con receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas β después de la inyección retroorbitaria de lectina fluorescente de tomate. La retina marcada se trató posteriormente con el método de limpieza de tejidos y se montó completa para visualizar las vistas tridimensionales de los pericitos que rodean la vasculatura de la retina bajo un microscopio confocal.

Visualización 3D de pericitos vasculares retinianos en ratones mediante inmunotinción 

La retina exhibe una organización espacial compleja a través de su estructura laminar. La transcriptómica espacial moderna y las técnicas de secuenciación requieren secciones de tejido &lt; 20 μm de grosor, lo que limita su aplicabilidad en la investigación de la retina. Este método de criosección recién congelada produce secciones delgadas en la cara de la retina del ratón al tiempo que preserva las relaciones espaciales planas, lo que permite un mapeo molecular completo a través de las...

En la cara Crioseccionamiento de retina de ratón para análisis molecular espacial de alta dimensión

Aprende a preparar criosecciones de retina de ratón e inmunotinción de fotorreceptores con este protocolo reproducible. Preserva la morfología tisular para estudiar enfermedades retinianas con alta calidad.

Criosección e inmunotinción de retina de ratón

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