28 de febrero de 2025
Los mecanismos de muerte súbita inesperada en la epilepsia (SUDEP) son poco conocidos y difíciles de traducir de los modelos actuales. Los conejos transgénicos pueden ofrecer información sobre estos mecanismos. Describimos un método para el registro continuo de electroencefalografías y electrocardiografías a largo plazo en cachorros de conejos transgénicos para evaluar eventos graves que pueden llevar a la muerte.
[Instructor] Para comenzar, coloque el kit anestesiado en decúbito supino sobre una almohadilla térmica infrarroja controlada mediante un termómetro rectal. Coloque la nariz y la boca en una mascarilla impresa en 3D personalizada conectada a través de un conector giratorio a un circuito Jackson-Reese que no reinhala con una bolsa de 0,5 litros. Controle la profundidad de la anestesia con un oxímetro de pulso en la oreja o en la pata. Coloque toallas quirúrgicas adhesivas a cada lado del kit y cúbralo con un paño quirúrgico grande. Corta un agujero del tamaño adecuado en la cortina para exponer el abdomen y el pecho. Abra el implante en el campo quirúrgico y coloque suturas de anclaje no absorbibles en cada uno de los orificios de anclaje del implante, dejando una cola de cinco a seis centímetros en cada sutura. Coloque el implante en un recipiente con solución salina estéril tibia hasta que esté listo para su colocación. Con un bisturí, haga una incisión de tres centímetros a través de la piel a lo largo de la línea alba. Y haga una incisión con cuidado a través del músculo para abrir la cavidad peritoneal. Luego coloque el implante en la porción craneal de la cavidad abdominal y colóquelo a la izquierda de la incisión. Use un trócar para tunelizar el electrocardiograma positivo, o ECG, y el cable de EEG fuera de la cavidad peritoneal y la piel aproximadamente de tres a cuatro centímetros a la izquierda de la incisión. Haga un túnel en el cable de ECG negativo dos centímetros a la derecha de la incisión, permitiendo que el implante se asiente cómodamente dentro de la cavidad. Ahora, asegure el implante con suturas de anclaje a la pared ventral de la cavidad peritoneal, asegurándose de que no quede ningún intestino atrapado. Y cerrar la pared abdominal con una sutura absorbible en un patrón interrumpido. Luego cierre la incisión de la piel con una sutura no absorbible en un patrón interrumpido. Túnel El ECG negativo conduce subcutáneamente a la parte superior derecha del tórax al nivel de la primera costilla. Diseccionar sin rodeos un bolsillo subcutáneo para enrollar sin apretar aproximadamente 10 centímetros de alambre. Corte el exceso de cable y cree un lazo después de atar el extremo expuesto al cable aislado con una sutura no absorbible. Asegure el asa al músculo con dos suturas no absorbibles. Luego, haga un túnel con el cable de ECG positivo hacia la costilla inferior izquierda y repita los pasos demostrados para asegurarlo al músculo y cerrar la incisión. Envuelva los cables de EEG expuestos con papel de aluminio estéril. Deje que un asistente no estéril retire el paño estéril y la corbata para las piernas. Gire el kit a la posición prona, mientras se asegura de que la mascarilla permanezca segura en su lugar girando el conector giratorio entre la mascarilla y el circuito. Ajuste el oxímetro de pulso y el monitor Doppler según sea necesario para mantener un monitoreo anestésico continuo. Luego coloque una sonda Doppler sobre el corazón. Coloque una toalla adhesiva estéril debajo del lado izquierdo, mientras el asistente sostiene el paquete de papel de aluminio que contiene los cables. Retire suavemente los cables del paquete de aluminio y colóquelos en el campo estéril, y complete el proceso de drapeado con la toalla estéril. Haga una incisión de tres centímetros a lo largo de la línea media del cuero cabelludo para exponer el cráneo. Use un trócar para tunelizar subcutáneamente los cables de EEG desde el lado izquierdo hasta el cráneo. Luego limpie y raspe el periostio de los huesos parietales expuestos con un bisturí. Inserte un taladro de mano en una cubierta de ultrasonido estéril y guíe una fresa de taladro de un milímetro hacia el taladro. A continuación, taladre orificios bilaterales en los huesos parietales, aproximadamente 0,5 centímetros anteriores a lambda y 0,5 centímetros laterales a la sutura sagital. Use pinzas finas para colocar un tornillo en el orificio de la rebaba. Luego use un destornillador para insertar el tornillo aproximadamente hasta la mitad del cráneo. Ahora, disecciona sin rodeos un bolsillo subcutáneo a lo largo de la parte posterior del cuello para enrollar sin apretar aproximadamente 10 centímetros de alambre. Corta el exceso de cable y quita el aislamiento de la punta, estirando el cable. Para crear un lazo al final del cable expuesto, haga un nudo dejando un pequeño bucle. Coloque el lazo sobre el tornillo y apriete el tornillo al cráneo, asegurándose de que el cable haga contacto con el tornillo. Coloque el cable de tierra a la izquierda y el cable de grabación a la derecha. Ahora, asegure los tornillos y alambres al cráneo con acrílico dental. Finalmente, inyecte bupivacaína por vía subcutánea en cada sitio de incisión para aliviar el dolor. Y cubra cada incisión con una pequeña cantidad de pegamento para la piel. Una vez que todos los cables estén en su lugar, evalúe las señales de telemetría utilizando un software de análisis para verificar la fidelidad de la señal. Espere que las señales de EEG aparezcan a baja amplitud mientras el kit está sedado. La cirugía de implantes se realizó con éxito en 15 kits de conejos, y 12 sobrevivieron hasta el punto final experimental. Las grabaciones de telemetría inmediatamente después de devolver los kits a las jaulas domésticas mostraron señales de EEG de baja amplitud, que mejoraron a medida que los kits se recuperaban de la anestesia. La morfología de la señal del ECG cambió ligeramente en los primeros días después de la cirugía debido a la cicatrización y la estabilización del alambre. Pero en general, la calidad de la señal se mantuvo sólida a lo largo del tiempo. El sistema de telemetría implantado permitió el registro de múltiples potenciales biológicos, incluida la electroencefalografía, la temperatura, la aceleración, la electrocardiografía y la calidad de la señal.
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Este estudio explora los mecanismos de la muerte súbita inesperada en la epilepsia (SUDEP) utilizando crías de conejo transgénicas. Se describe un método para grabaciones electroencefalográficas (EEG) y electrocardiográficas (ECG) continuas a largo plazo con el fin de evaluar eventos graves que podrían conducir a la muerte.
La telemetría simultánea de EEG y ECG en conejos transgénicos neonatos permite un monitoreo longitudinal y de alta fidelidad de la electrofisiología neural y cardíaca relacionada con los mecanismos del SUDEP. Este enfoque aborda una brecha crítica en la modelización preclínica al capturar arritmias y episodios de convulsiones relevantes para la enfermedad en un sistema con mayor similitud fisiológica al humano que los modelos roedores. El método respalda la confianza predictiva en la validación de dianas y la reducción de riesgos mecanicistas en canalopatías implicadas en la epilepsia y la disfunción cardíaca.
Este modelo de conejo con telemetría conecta el descubrimiento inicial y la validación preclínica para la investigación de epilepsia y arritmias cardíacas, apoyando la identificación de compuestos activos y estudios mecanicistas.