Name: Detección rápida de virulencia y tipificación de Helicobacter pylori mediante la tecnología de etiquetado de puntos cuánticos (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-13T13:05:00.000+00:00
Duration: 5 min 13 s
Description: Aprende a detectar virulencia y tipificar Helicobacter pylori mediante tecnología de puntos cuánticos para inmunocromatografía in vitro. Este método mejora la precisión diagnóstica y permite tratamientos individualizados.

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Este estudio (KY2025-191-01) se realizó siguiendo las directrices del comité de ética de investigación en humanos del Hospital Popular Provincial de Guangdong (Academia de Ciencias Médicas de Guangdong), Universidad Médica del Sur. Este artículo da cumplimiento a la solicitud de exención del consentimiento informado.
NOTA: Este estudio tiene como objetivo utilizar la tecnología de puntos cuánticos para diseñar y desarrollar un kit para diagnosticar si las especies de sangre de los participantes contienen anticuerpos contra la ureasa contra Helicobacter pylori (Urease), anticuerpos contra la citotoxina A (VacA) vacuolar y anticuerpos contra la toxina del gen A () relacionados con la citotoxina para determinar si H. pylori está infectado y si la cepa infectada es de tipo I o tipo II. Este kit diseñado utiliza un método de sándwich de doble antígeno para medir los anticuerpos Helicobacter pylori Urease, los anticuerpos y los anticuerpos VacA. Cuando la muestra de ensayo que contiene la sustancia objetivo se añade a la almohadilla de muestra, fluye a través de la almohadilla cuántica y la membrana mediante la acción del sifón, formando un complejo antígeno-anticuerpo en fase sólida. Después de la detección, el analizador lee la línea de detección y la masa respectivamente. El valor de la señal de la línea de control se utiliza para determinar el estado negativo y positivo del anticuerpo Urase, el anticuerpo y el anticuerpo VacA en función de los valores de señal T/C de cada uno de los tres anticuerpos. El diagrama de diseño se muestra en la Figura 1.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67792/67792fig01.jpg"> 
Figura 1: Diagrama esquemático de la tarjeta de prueba de tipificación de H. pylori . La figura muestra la estructura y composición de la tarjeta de prueba. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67792/67792fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
1. Preparación del kit
<ol>
	<li>Establecimiento de un sistema de reacción tampón de ácido etanosulfónico (MES) QDs-2-(n-morfina)<ol>
		<li>Equilibre la solución QDs original a temperatura ambiente (RT). A continuación, aspire 1000 μL y añada un volumen igual de 2x solución MES (la concentración final de MES fue de 10 mmol/L).</li>
		<li>Mezclar, agitar y sonicar durante 30 s a 3 min.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Activación<ol>
		<li>Añadir 20 mg/mL de 1-etil-3- (3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDC)/N-hidroxisuccinimida (NHS) en el sistema tampón QDs-MES en una proporción de 10:1. Mézclalo, agítalo y sonicéalo durante 3 minutos.</li>
		<li>Colocar la solución preparada en un baño de agua a 37 °C durante 15 min y centrifugar a 13.000 × g durante 20 min.</li>
		<li>Retire el sobrenadante de la solución centrífuga y vuelva a disolverlo con 1x solución MES. Sople la solución repetidamente con una pipeta, agítela para mezclarla uniformemente y sonicéla durante 3 minutos.</li>
		<li>Coloque la solución anterior en un baño de agua a 37 °C durante 15 min y centrifugue a 13.000 × g durante 20 min.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Acoplamiento<ol>
		<li>Añadir 0,03 mg de antígeno de ureasa, antígeno, antígeno VacA e IgG anti-ratón de cabra a 1000 μL de la solución de activación, pipetear la punta repetidamente, agitar y sonicar durante 3 min.</li>
		<li>Coloque la solución anterior en un baño de agua a 37 °C y reaccione durante 3 h.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Cierre y almacenamiento<ol>
		<li>Añadir 100 μL de solución bloqueante (Tabla suplementaria 1) e incubar durante 1 h.</li>
		<li>Centrifugar la solución bloqueada a 13.000 × g durante 15 min.</li>
		<li>Retirar el sobrenadante de la solución centrifugada, añadir 750 μL de solución de reconstitución (Tabla suplementaria 1), pipetear repetidamente, agitar y sonicar durante 5 min, luego almacenar a 4 °C.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. Preparación de placas revestidas
<ol>
	<li>Preparación de almohadillas cuánticas<ol>
		<li>Diluya el complejo de antígenos de H. pylori marcado con puntos cuánticos 1:5 con tampón de dilución de puntos cuánticos para preparar la cantidad requerida de acuerdo con la producción por lotes.</li>
		<li>Tome la almohadilla cuántica y rocíe uniformemente una cierta cantidad de complejo de antígenos de H. pylori marcado con puntos cuánticos sobre la almohadilla con un rociador de película y seque a 37 °C durante 30 minutos.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Preparación de la membrana<ol>
		<li>Utilice el tampón de impresión para diluir los materiales de recubrimiento de la línea de control y la línea de prueba y prepare la cantidad requerida de acuerdo con el volumen de producción por lotes.</li>
		<li>Pegue la membrana de nitrocelulosa en la placa de cloruro de polivinilo (PVC), use un rociador de oro para rayar la película para cubrir uniformemente la línea de control de calidad y los materiales de la línea de prueba en la membrana, y seque a 57 °C durante 24 h.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. Montaje
<ol>
	<li>Pegue los pads de cuanto y muestra en la placa de PVC recubierta con película en secuencia.</li>
</ol>
4. Corte en tiras
<ol>
	<li>Use un cortador de tiras para cortar la tabla grande ensamblada en tiras reactivas.</li>
</ol>
5. Embalaje interior
<ol>
	<li>Complete el empaque de acuerdo con los requisitos de composición del kit. NOTA: Los componentes del kit son los siguientes: (i) Tarjeta de prueba: Consta de una carcasa de tiras reactivas y una tira reactiva. La tira reactiva consta de una placa de PVC, una almohadilla de muestra, una almohadilla cuántica (un complejo de antígenos marcado con puntos cuánticos; el complejo contiene antígeno de ureasa, antígeno, antígeno VacA e IgG de ratón), una membrana de nitrocelulosa (el área de detección se fija con antígeno VacA, antígeno y antígeno ureasa (expresión eucariota de antígeno recombinante), y el área de control de calidad está recubierta con IgG anti-ratón de cabra (anticuerpo poli de cabra)), y papel absorbente. Las diferentes especificaciones de empaque tienen diferentes cantidades de tarjetas de prueba. Se requiere una tarjeta de prueba para el reactivo de una persona. (ii) Tarjeta SD: 1 pieza/caja. No se deben mezclar los componentes de la tarjeta de prueba y la tarjeta digital segura (SD) de diferentes lotes de kits de prueba.</li>
</ol>
6. Procesamiento de muestras
NOTA: Para la recolección de muestras, consulte los Procedimientos Nacionales de Operación de Laboratorios Clínicos.
<ol>
	<li>Recolecta sangre en un tubo de gel de separación. Tenga cuidado de evitar la hemólisis.</li>
	<li>Analice la muestra de suero separada dentro de las 4 horas a temperatura ambiente (RT). Si no se puede analizar a tiempo, almacene la muestra a 2-8 °C durante 3 días. Para a largo plazo (dentro de 1 año), séllalo y guárdalo por debajo de -20 °C.</li>
	<li>Restaure las muestras a RT y mézclelas bien antes de usarlas. NOTA: Las muestras congeladas y descongeladas deben descongelarse completamente antes de su uso, y el número de ciclos de congelación y descongelación no debe exceder los cinco. Las muestras congeladas y descongeladas repetidas pueden hacer que el analito se deteriore y deben evitarse. Las muestras graves de quilo y hemólisis también afectarán la prueba y deben evitarse.</li>
</ol>
7. Procedimiento para la prueba
<ol>
	<li>Saque el kit de reactivos y los materiales de control de calidad para equilibrar a RT.</li>
	<li>Preparación de la muestra: Centrifugar las muestras de sangre entera a 1467 g durante 10 min.</li>
	<li>Verifique que el número de lote de la tarjeta SD coincida con el del kit de reactivos. Inserte la tarjeta SD en el instrumento para la calibración automática.</li>
	<li>Encienda el instrumento y la computadora de operación. Inicie el software designado y seleccione el módulo Prueba . Elija Initialization Settings (Configuración de inicialización ) para inicializar el instrumento y esperar a que se complete correctamente.</li>
	<li>Acceda al área de reactivos del instrumento y retire la ranura de la tarjeta de prueba. Abra el kit de reactivos y seleccione el número requerido de tarjetas de prueba.</li>
	<li>Abra las bolsas de aluminio de las tarjetas de prueba y colóquelas en la ranura de acuerdo con la orientación indicada. Vuelva a insertar la ranura de la tarjeta en el área de reactivos del instrumento.</li>
	<li>Pruebas de control de calidad (QC)<ol>
		<li>Dentro del módulo Prueba , seleccione Entrada manual. Haga clic en Entrada de información e ingrese la información específica del material de control de calidad. Haga clic en Generar. Coloque los materiales de control de calidad en el estante de muestras designado, asegurando el orden y la orientación correctos.</li>
		<li>Haga clic en Iniciar prueba para iniciar las pruebas de control de calidad. La aguja de muestra del instrumento aspirará 80 μL de la muestra y la dispensará verticalmente en el pocillo de la muestra. El instrumento comenzará a cronometrar automáticamente después de la dispensación de la muestra. Después de 15 minutos, el instrumento realizará la detección, leerá los valores de medición y emitirá los resultados.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Pruebas de muestra: Dentro del módulo Prueba , seleccione LIS bidireccional. Coloque las muestras que se van a analizar en el estante de muestras designado, asegurando el orden y la orientación adecuados. Haga clic en Iniciar prueba. De manera similar, el instrumento aspirará 80 μL de muestra de cada uno y las procesará de manera idéntica al proceso de control de calidad.</li>
	<li>Una vez finalizada la prueba, retire las tarjetas de prueba usadas del instrumento y deséchelas como desechos médicos.</li>
</ol>
8. Control de calidad
<ol>
	<li>H. pylori negativo: Compruebe y asegúrese de que los resultados de los productos de referencia negativos para Helicobacter pylori , es decir, el anticuerpo Urease, el anticuerpo y el anticuerpo VacA, sean todos negativos.</li>
	<li>Infección por H. pylori tipo II: Comprobar y asegurarse de que el producto de referencia de Helicobacter pylori tipo II, es decir, el anticuerpo Urasa, es positivo, y que los resultados del anticuerpo y del anticuerpo VacA son todos negativos.</li>
	<li>Infección por H. pylori tipo I: Comprobar y asegurarse de que el producto de referencia contra Helicobacter pylori tipo I, es decir, el anticuerpo Ureasa es positivo, el anticuerpo y/o el anticuerpo VacA son positivos.</li>
</ol>
9. Análisis de resultados
<ol>
	<li>Infección tipo II con cepas débiles o no toxigénicas: cuando la lectura del anticuerpo Ureasa es positiva y las lecturas del anticuerpo y del anticuerpo VacA son negativas, interpretarlo como una infección con una cepa débil o no toxigénica de H. pylori .</li>
	<li>Infección tipo I con cepas productoras de toxinas altamente patógenas: cuando la lectura del anticuerpo Urease es positiva, y la lectura del anticuerpo o del anticuerpo VacA es positiva, o ambas son positivas, se interpreta como una infección por una cepa altamente patógena productora de toxina H. pylori .</li>
	<li>Negativo: Cuando las lecturas del anticuerpo Urasa, el anticuerpo y el anticuerpo VacA son todas negativas, interprete que no hay infección por cepas de H. pylori .</li>
	<li>No válido: Cuando el instrumento juzgue que el resultado no es válido, compruebe si hay un funcionamiento incorrecto o un fallo del kit de reactivos y vuelva a intentar el procedimiento.</li>
</ol>
10. Calibración del analizador de fluorescencia
<ol>
	<li>Primero, encienda el analizador y deje que se caliente durante unos 15 minutos para estabilizar su rendimiento. A continuación, inserte el patrón de calibración proporcionado por el fabricante en el portamuestras.</li>
	<li>A continuación, acceda a la función de calibración en la interfaz del analizador e inicie el proceso. El analizador detectará automáticamente la fluorescencia del patrón y ajustará sus parámetros internos en consecuencia para que coincidan con los valores de referencia preestablecidos.</li>
	<li>Después de eso, retire el patrón de calibración e inserte una muestra en blanco para verificar que las lecturas estén dentro del rango aceptable.</li>
	<li>Repetir regularmente estos pasos según el programa recomendado ayuda a mantener la precisión del analizador para obtener mediciones fiables.</li>
</ol>

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<li>Xirong, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+quantum+dotbased+lateral+flow+immunoassay+test+strips+for+rapid+and+sensitive+detection+of+SARSCoV2+neutralizing+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Development of quantum dotbased lateral flow immunoassay test strips for rapid and sensitive detection of SARSCoV2 neutralizing antibodies.</a> Sci Rep. 13, 22253(2023).</li>
<li>Purwidyantri, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Programmable+graphenebased+microfluidic+sensor+for+DNA+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Sens+Actuators+B+Chem%22%5BJournal%5D)">Programmable graphenebased microfluidic sensor for DNA detection.</a> Sens Actuators B Chem. 367, 132044(2022).</li>
<li>Lee, K. S., Wagner, M., Stocker, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ramanbased+sorting+of+microbial+cells+to+link+functions+to+their+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Microb+Cell%22%5BJournal%5D)">Ramanbased sorting of microbial cells to link functions to their genes.</a> Microb Cell. 7 (3), 62-65 (2020).</li>
<li>Hu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+and+fabrication+of+carbon+dots+for+energy+conversion+and+storage%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Soc+Rev%22%5BJournal%5D)">Design and fabrication of carbon dots for energy conversion and storage.</a> Chem Soc Rev. 48 (8), 2315-2337 (2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1-(3-dimetilaminopropilo) -3-clorhidrato de etilcarbodiimida (EDC)</td><td>Sigma</td><td>25952-53-8</td><td>5 g / botella</td></tr><tr><td>2-(n-morfina) ácido etanosulfónico (MES)</td><td>Sigma</td><td>145224-94-8</td><td>100 g / botella</td></tr><tr><td>Centrífuga</td><td>Analizador</td> inmunológico de fluorescencia Sigma <td>3K15</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Guangzhou Labsim Biotech Co., Ltd</td><td>Provincia de Guangdong Registro de dispositivos médicos No. </td><td></td></tr><tr><td>Kit de prueba de tipificación 2017221743 Helicobacter pylori&nbsp;</td><td>Chongqing iSIA BIO-Technology Co., Ltd</td><td>Registro nacional de dispositivos médicos No. 20203400330</td><td>QDs Método de inmunofluorescencia</td></tr><tr><td>Sal de sodio de N-hidroxitiosuccinimida (NHS)</td><td>Sigma</td><td>106627-54-7</td><td>1 g / botella</td></tr></tbody></table>

detección rápida de virulencia y tipificación de helicobacter pylori mediante la tecnología de etiquetado de puntos cuánticos

Rapid Detection of Helicobacter pylori Virulence and Typing Using Quantum Dot Labeling Technology

La Figura 2 muestra el principio de funcionamiento del inmunoanalizador de fluorescencia de punto cuántico. Consta principalmente de una fuente de luz de excitación, una fuente de luz receptora, un módulo de circuito de conversión fotoeléctrica, un circuito de procesamiento de señales, un circuito de conversión de valor AD y un módulo de cálculo de procesamiento de señales; La fuente de luz de excitación genera marcadores fluorescentes. Absorbe luz monocromática con una longitud de onda simi...

Detección rápida de virulencia y tipificación de Helicobacter pylori mediante la tecnología de etiquetado de puntos cuánticos

We present a method based on quantum dot labeling technology for rapidly detecting the virulence of Helicobacter pylori and performing typing, aiming to ...

rapid-detection-helicobacter-pylori-virulence-typing-using-quantum

Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

El protocolo presenta un método no invasivo para el diagnóstico rápido de infecciones estomacales por Helicobacter pylori a través de la prueba de cadena y determina su resistencia a antibióticos a claritromicina y levofloxacino mediante reacción cuantitativa en cadena de la polimerasa (qPCR).

Diagnóstico rápido basado en la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (qPCR) de la infección por Helicobacter pylori y la resistencia a los antibióticos

Un método rápido y preciso para la detección de H. pylori y las pruebas de resistencia a los medicamentos es muy importante para erradicar eficazmente el H. pylori en la práctica clínica. Este protocolo tiene como objetivo presentar una metodología específica que involucra la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (qPCR) de la mucosa gástrica para la detección rápida de H. pylori y resistencia a antibióticos.

Análisis cuantitativo de la reacción en cadena de la polimerasa de la mucosa gástrica para la detección de Helicobacter pylori y la resistencia a los antibióticos

El protocolo emplea una toma de muestras de heces no invasiva combinada con una reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa para ofrecer un método de diagnóstico conveniente y rápido para la infección por Helicobacter pylori y su resistencia a la claritromicina y las quinolonas.

Detección de infección por Helicobacter pylori y resistencia a antibióticos mediante análisis cuantitativo de la reacción en cadena de la polimerasa en heces

En este estudio se desarrolló una técnica de detección sándwich basada en anticuerpos dobles para la detección rápida de antígenos fecales infectados con Helicobacter pylori.

Detección rápida de antígeno fecal de infección por Helicobacter pylori basada en la tecnología de detección de sándwich de doble anticuerpo

Este protocolo describe un simple adhesivo cinta enfoque basado en el muestreo de tomate y otras superficies de los productos frescos, seguido por la rápida detección de células enteras...

Combinación de adhesivo basado en cinta de muestreo y de fluorescencia In situ La hibridación para la detección rápida de Salmonella En los productos frescos

Una rápida y precisa en el punto de atención de la prueba para la aspergilosis pulmonar invasiva se presenta. Se aprovecha de flujo lateral tecnología utilizando un anticuerpo monoclonal específico que se une a...

La detección de la aspergilosis pulmonar invasiva en pacientes con neoplasia hematológica maligna, mediante el uso de la tecnología de flujo lateral

Este artículo ilustra el uso del etiquetado de radio de persecución de pulsos en combinación con la fotoreticulación específica del sitio para monitorear las interacciones entre una proteína de interés y otros factores en E. coli. A diferencia de los métodos tradicionales de reticulación química, este enfoque genera "instantáneas" de alta resolución de una vía de ensamblaje ordenada en una célula viva.

Monitorización del ensamblaje de un factor de virulencia bacteriano secretado mediante reticulación específica del sitio

Aquí describimos un método para visualizar el orgánulo bacteriano oncogénico conocido como el Sistema de Secreción Cag Tipo IV (Cag-T4SS).  Encontramos que el Cag-T4SS se produce diferencialmente en la superficie de H. pylori en respuesta a diferentes condiciones de disponibilidad de hierro.

Microscopía Electrónica de Alta Resolución de la Helicobacter pylori Cag secreción tipo IV Sistema Pili Producido en condiciones variables de Hierro disponibilidad

Complejos HLA / péptido intactos clase I se derraman por las células cancerosas, lo que representa un potencial biomarcador del cáncer relevante. Utilizando la tecnología de sensor de etiqueta libre y receptor de células T imitando anticuerpos monoclonales, detección de cobertizo MIF / HLA-A * 02: 01 complejos en los sobrenadantes de células MDA-MB-231, Punta de suero humano, y el plasma del paciente se demuestra, lo que permite el desarrollo de una novela cáncer de la plataforma de...

La detección del antígeno leucocitario humano biomarcadores en cáncer de mama Utilizando-Label gratuita tecnología de biosensores

Los cultivos derivados de células madre albergan un tremendo potencial para modelar enfermedades infecciosas. Aquí se describe el cultivo de organoides gástricos de ratón y humanos derivados de células madre adultas. Los organoides se microinyectan con el patógeno gástrico Helicobacter pylori.

Organoides como Modelo para Enfermedades Infecciosas: Cultura de Derechos Humanos y organoides estomacales murinos y microinyección de Helicobacter Pylori

Aprende a detectar virulencia y tipificar Helicobacter pylori mediante tecnología de puntos cuánticos para inmunocromatografía in vitro. Este método mejora la precisión diagnóstica y permite tratamientos individualizados.

Detección rápida de virulencia y tipificación de Helicobacter pylori mediante la tecnología de etiquetado de puntos cuánticos

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