Name: Desarrollo de cultivos primarios de células epiteliales tubulares renales humanas en monocapas y condiciones tridimensionales (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-13T14:10:00.000+00:00
Duration: 6 min 32 s
Description: Aprende a establecer cultivos primarios de células epiteliales tubulares renales humanas en monocapas y 3D para estudiar los efectos citotóxicos de la toxina Shiga. Este modelo permite investigar mecanismos de daño renal y evaluar posibles tratamientos terapéuticos.

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<ol><li>Rivas, M., Chinen, I., Miliwebsky, E., Masana, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risk+factors+for+Shiga+toxin-producing+Escherichia+coli-associated+human+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol+Spectr%22%5BJournal%5D)">Risk factors for Shiga toxin-producing Escherichia coli-associated human diseases.</a> Microbiol Spectr. 2 (5), (2014).</li>
<li>Gianantonio, C. A., Vitacco, M., Mendilaharzu, F., Gallo, G. E., Sojo, E. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hemolytic-uremic+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Nephron%22%5BJournal%5D)">The hemolytic-uremic syndrome.</a> Nephron. 11 (2), 174-192 (1973).</li>
<li>Alconcher, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemolytic+uremic+syndrome+associated+with+Shiga+toxin-producing+Escherichia+coli+infection+in+Argentina%3A+update+of+serotypes+and+genotypes+and+their+relationship+with+severity+of+the+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Hemolytic uremic syndrome associated with Shiga toxin-producing Escherichia coli infection in Argentina: update of serotypes and genotypes and their relationship with severity of the disease.</a> Pediatr Nephrol. 36 (9), 2811-2817 (2021).</li>
<li>Alconcher, L. F., Lucarelli, L. I., Bronfen, S., Meni Battaglia, L., Balestracci, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+evolution+of+kidney+function+in+patients+with+STEC-hemolytic+uremic+syndrome+followed+for+more+than+15+years%3A+unexpected+changes%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Dynamic evolution of kidney function in patients with STEC-hemolytic uremic syndrome followed for more than 15 years: unexpected changes.</a> Pediatr Nephrol. 40 (1), 143-150 (2025).</li>
<li>Monteverde, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+decrease+in+the+incidence+of+Shiga+toxin-related+hemolytic+uremic+syndrome+as+a+cause+of+kidney+transplantation+at+an+Argentine+Referral+Center%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Transplant%22%5BJournal%5D)">A decrease in the incidence of Shiga toxin-related hemolytic uremic syndrome as a cause of kidney transplantation at an Argentine Referral Center.</a> Pediatr Transplant. 27 (4), e14489(2023).</li>
<li>Sandvig, K., van Deurs, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Entry+of+ricin+and+Shiga+toxin+into+cells%3A+molecular+mechanisms+and+medical+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">Entry of ricin and Shiga toxin into cells: molecular mechanisms and medical perspectives.</a> EMBO J. 19 (22), 5943-5950 (2000).</li>
<li>Obrig, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Escherichia+coli+Shiga+toxin+mechanisms+of+action+in+renal+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Toxins+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Escherichia coli Shiga toxin mechanisms of action in renal disease.</a> Toxins (Basel). 2 (12), 2769-2794 (2010).</li>
<li>Karpman, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis+of+renal+cortical+cells+in+the+hemolytic-uremic+syndrome%3A+in+vivo+and+in+vitro+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Apoptosis of renal cortical cells in the hemolytic-uremic syndrome: in vivo and in vitro studies.</a> Infect Immun. 66 (2), 636-644 (1998).</li>
<li>Pistone Creydt, v, Silberstein, C., Zotta, E., Ibarra, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytotoxic+effect+of+Shiga+toxin-2+holotoxin+and+its+B+subunit+on+human+renal+tubular+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Microbes+Infect%22%5BJournal%5D)">Cytotoxic effect of Shiga toxin-2 holotoxin and its B subunit on human renal tubular epithelial cells.</a> Microbes Infect. 8, 410-419 (2006).</li>
<li>Silberstein, C., Pistone Creydt, V., Gerhardt, E., Nuñez, P., Ibarra, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+water+absorption+in+human+proximal+tubular+epithelial+cells+in+response+to+Shiga+toxin-2%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Inhibition of water absorption in human proximal tubular epithelial cells in response to Shiga toxin-2.</a> Pediatr Nephrol. 23, 1981-1990 (2008).</li>
<li>Márquez, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Escherichia+coli+subtilase+cytotoxin+and+Shiga+toxin+2+on+primary+cultures+of+human+renal+tubular+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Effects of Escherichia coli subtilase cytotoxin and Shiga toxin 2 on primary cultures of human renal tubular epithelial cells.</a> PLoS One. 9, e87022(2014).</li>
<li>Márquez, L. B., Araoz, A., Repetto, H. A., Ibarra, F. R., Silberstein, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Shiga+toxin+2+on+cellular+regeneration+mechanisms+in+primary+and+three-dimensional+cultures+of+human+renal+tubular+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Microb+Pathog%22%5BJournal%5D)">Effects of Shiga toxin 2 on cellular regeneration mechanisms in primary and three-dimensional cultures of human renal tubular epithelial cells.</a> Microb Pathog. 99, 87-94 (2016).</li>
<li>Sánchez, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eliglustat+prevents+Shiga+toxin+2+cytotoxic+effects+in+human+renal+tubular+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Res%22%5BJournal%5D)">Eliglustat prevents Shiga toxin 2 cytotoxic effects in human renal tubular epithelial cells.</a> Pediatr Res. 91 (5), 1121-1129 (2022).</li>
<li>Sánchez, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estradiol+stimulates+cell+proliferation+through+classic+estrogen+receptors+and+GPER-1+in+human+renal+tubular+epithelial+cell+primary+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Estradiol stimulates cell proliferation through classic estrogen receptors and GPER-1 in human renal tubular epithelial cell primary cultures.</a> Biochem Biophys Res Commun. 512, 170-175 (2019).</li>
<li>Fernandez Miyakawa, M., Zabal, O., Silberstein, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clostridium+perfringens+epsilon+toxin+is+cytotoxic+for+human+renal+tubular+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Exp+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Clostridium perfringens epsilon toxin is cytotoxic for human renal tubular epithelial cells.</a> Hum Exp Toxicol. 30, 275-282 (2011).</li>
<li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cooperative+application+of+transcriptomics+and+ceRNA+hypothesis%3A+ln+cRNA-00742%2FmiR-116+targets+CD74+to+mediate+vanadium-induced+mitochondrial+apoptosis+in+duck+liver%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hazard+Mater%22%5BJournal%5D)">Cooperative application of transcriptomics and ceRNA hypothesis: ln cRNA-00742/miR-116 targets CD74 to mediate vanadium-induced mitochondrial apoptosis in duck liver.</a> J Hazard Mater. 480, 135904(2024).</li>
<li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Copper+toxicity+in+the+liver+of+broiler+chicken%3A+insights+from+metabolomics+and+AMPK-mTOR+mediated+autophagy+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Poult+Sci%22%5BJournal%5D)">Copper toxicity in the liver of broiler chicken: insights from metabolomics and AMPK-mTOR mediated autophagy perspective.</a> Poult Sci. 103 (9), 104011(2024).</li>
<li>Zhang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+Caveolin-1+on+the+molybdenum+and+cadmium+exposure+induces+pulmonary+ferroptosis+and+fibrosis+in+the+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Pollut%22%5BJournal%5D)">Role of Caveolin-1 on the molybdenum and cadmium exposure induces pulmonary ferroptosis and fibrosis in the sheep.</a> Environ Pollut. 334, 122207(2023).</li>
<li>Fujiki, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blockage+of+Akt+activation+suppresses+cadmium-induced+renal+tubular+cellular+damages+through+aggrephagy+in+HK-2+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Blockage of Akt activation suppresses cadmium-induced renal tubular cellular damages through aggrephagy in HK-2 cells.</a> Sci Rep. 14, 14552(2024).</li>
<li>Joun, J. I. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antioxidative+effects+of+molybdenum+and+its+association+with+reduced+prevalence+of+hyperuricemia+in+the+adult+population%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Antioxidative effects of molybdenum and its association with reduced prevalence of hyperuricemia in the adult population.</a> PLoS One. 19 (8), e0306025(2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Colagenasa tipo I</td><td>Sigma Merck, San Luis, MO, EE. UU.</td><td>637958</td><td></td></tr><tr><td>Suplemento para el crecimiento de las células endoteliales</td><td>Sigma Merck, San Luis, MO, EE. UU.</td><td>E2759</td><td></td></tr><tr><td>Matriz de membrana basal Matrigel</td><td>BD Biosciences, Estados Unidos; Sigma Merck, San Luis, MO, EE. UU.</td><td>356234</td><td></td></tr><tr><td>70 &mu; Filtro de malla de poros M</td><td>BD Bioscience, MA, EE. UU.</td><td>CSS010070</td><td></td></tr><tr><td>Medio RPMI 1640 con L-glutamina</td><td>Sigma Merck, San Luis, MO, EE. UU.</td><td>R8758-500ml</td><td></td></tr><tr><td>Hanks' Solución salina equilibrada Libre de Ca2+ y Mg2+</td><td>Gibco Invitrogen, Nueva York, Estados Unidos</td><td>14175046</td><td></td></tr><tr><td>Solución de tripsina-EDTA</td><td>Sigma Merck, San Luis, MO, EE. UU.</td><td>T4049</td><td></td></tr></tbody></table>

desarrollo de cultivos primarios de células epiteliales tubulares renales humanas en monocapas y condiciones tridimensionales

Development of Human Renal Tubular Epithelial Cell Primary Cultures in Monolayers and Three-Dimensional Conditions

Los cultivos primarios HRTEC confluentes mostraron una morfología similar a la observada bajo microscopía óptica (Figura 1). Las células se caracterizaron por inmunofluorescencia, tal y como se ha descrito en nuestras publicaciones previas, utilizando anticuerpos contra acuaporina 1 (AQP1) y PECAM CD31 9,12,13. Los estudios de inmunofluorescencia mostraron que más del 90% de los HRTEC fueron positiv...

Desarrollo de cultivos primarios de células epiteliales tubulares renales humanas en monocapas y condiciones tridimensionales

Human renal tubular epithelial cell (HRTEC) primary cultures are isolated from kidneys removed from pediatric patients undergoing nephrectomies indicated ...

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Investigación

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Un sistema de cultivo celular giratorio que permite a las células epiteliales de crecer bajo condiciones fisiológicas resultantes en 3-D formación de agregados celulares se describe. Los agregados generado...

El cultivo y aplicaciones de la Rotación de biorreactor de pared de los vasos Derivado de modelos 3D de las células epiteliales

En este video, demostramos los pasos para aislar y purificar células epiteliales tubulares renales para una amplia gama de estudios de biología molecular y cultivos celulares.

Aislamiento de células renales murinas: una técnica para aislar y generar cultivo primario de células epiteliales tubulares renales

Este protocolo describe la descelularización de riñones de rata Sprague Dawley mediante perfusión anterógrada de detergentes a través de la vasculatura, produciendo matrices extracelulares renales acelulares que sirven como molde para la repoblación con células epiteliales renales humanas. La recelularización y el uso del ensayo de perfusión de resazurina para monitorear el crecimiento se realizan dentro de biorreactores de perfusión especialmente diseñados.

La repoblación de las células epiteliales y Preparación de roedores matriz extracelular andamios para el Desarrollo del tejido renal

Este protocolo describe un método para aislar y cultivar rudimentos metanefricos de embriones de ratón.

Disección y cultivo de riñón embrionario de ratón

Este protocolo proporciona un enfoque rentable para aislar y caracterizar ratón primario células tubulares renales que posteriormente pueden cultivarse el evaluar funciones biológicas renal ex vivo, incluyendo bioenergética mitocondrial.

Aislamiento, caracterización y alto rendimiento análisis de flujo extracelular de ratón células epiteliales tubulares renales primarias

Este trabajo describe dos métodos para estudiar el desarrollo de órganos, una mejor configuración de xenotrasplante en la membrana corioalantoica (CAM) a partir de embriones aviares que permite la vascularización de órganos embrionarios y organoides cultivados y una nueva dirección z fija método de cultivo de órganos con condiciones experimentales modificadas que permite imágenes confocales de lapso de tiempo de alta resolución.

Optimización del cultivo organoide renal y organatípico para la vascularización, el desarrollo extendido y la imagen mejorada de microscopía

Aquí se presenta un protocolo definido químicamente para la derivación de podocitos renales humanos a partir de células madre pluripotentes inducidas con alta eficiencia (&gt;90%) e independiente de manipulaciones genéticas o selección de subpoblaciones. Este protocolo produce el tipo de célula deseado dentro de los 26 días y podría ser útil para las pruebas de nefrotoxicidad y el modelado de enfermedades.

Diferenciación guiada de podocitos renales maduros de células madre pluripotentes inducidas por humanos en condiciones químicamente definidas

Los cultivos de tubuloides renales humanos representan un valioso modelo in vitro para estudiar la fisiología y la enfermedad renal. Los tubuloides se pueden establecer a partir del tejido renal (sano y enfermo), así como de la orina, esta última representa una fuente de material de investigación fácilmente obtenible y menos invasiva.

Generación de tubuloides renales humanos a partir de tejidos y orina

Aquí, presentamos protocolos que detallan instrucciones para implementar cultivos celulares en 3D utilizando matrices de colágeno y colágeno-agarosa en un sistema microfisiológico. Estos protocolos apoyan el cocultivo de esferoides de túbulo proximal renal y carcinoma de células renales, simulando condiciones in vivo y permitiendo la investigación avanzada de las interacciones de las células de cáncer de riñón.

Cocultivo microfluídico de epitelio renal sano y tumoral para modelar la progresión del cáncer de riñón

Presentamos un protocolo optimizado para el procesamiento de riñones humanos completos para aislar y cultivar células epiteliales primarias del túbulo proximal renal y la aplicación de estas células en una plataforma tridimensional, microfluídica y microfisiológica para recapitular el túbulo proximal renal.

Aislamiento de células epiteliales primarias del túbulo proximal humano y su uso en la creación de un modelo microfisiológico del túbulo proximal renal

Aprende a establecer cultivos primarios de células epiteliales tubulares renales humanas en monocapas y 3D para estudiar los efectos citotóxicos de la toxina Shiga. Este modelo permite investigar mecanismos de daño renal y evaluar posibles tratamientos terapéuticos.

Desarrollo de cultivos primarios de células epiteliales tubulares renales humanas en monocapas y condiciones tridimensionales

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