Name: Cribado CRISPR de todo el genoma para revelar genes radiosensibles y radiorresistentes (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-23T13:25:00.000+00:00
Duration: 8 min 32 s
Description: Descubre el cribado CRISPR de todo el genoma para identificar genes radiosensibles y radiorresistentes en células de cáncer de pulmón. Este método mejora la comprensión de los mecanismos de resistencia a la radioterapia.

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</ol>

<table><tbody><tr><td>Placa de cultivo de células y tejidos de 150 mm</td><td>Wuxi NEST Biotechnology Co., Ltd.</td><td>715011</td><td>Plato de</td></tr><tr><td>cultivo celular y tisular de 35 mm</td><td>Wuxi NEST Biotechnology Co., Ltd.</td><td>706011</td> Línea celular de <td>cultivo celular</td></tr><tr><td>A549</td><td>ATCC-</td><td></td><td>-</td></tr><tr><td>Kit de recuento celular-8</td><td>Shanghai Beyotime Biotech Inc</td><td>C0041</td><td>Para ensayo de viabilidad celular</td></tr><tr><td>CO2 medio independiente</td><td>PHCbi</td><td>MCO-50AIC</td><td>Cultivo celular</td></tr><tr><td>Contador celular automatizado Countess 3 FL Themo</td><td>Scientific</td><td>AMQAF2001</td><td>Para recuento celular</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Gibco</td><td>25200056</td><td>Cultivo celular</td></tr><tr><td>Suero fetal bovino</td><td>Gibco</td><td>10099141</td><td>Cultivo celular</td></tr><tr><td>Microscopía de fluorescencia</td><td>LEICA</td><td>ebq 100-04</td><td>Para microscopio de fluorescencia</td></tr><tr><td>Biblioteca lentiviral CRISPR de todo el genoma</td><td>Shanghai OBiO Technology Co., Ltd.</td><td>H5070</td><td>Para infección lentiviral</td></tr><tr><td>MiniAmp plus PCR</td><td>Themo Scientific</td><td>C37835</td> Para placas de cultivo celular NEST <td>de amplificación de PCR</td></tr><tr><td>, 12 pocillos</td><td>Wuxi NEST Biotechnology Co., Ltd.</td><td>712002</td><td></td></tr><tr><td>Placas de cultivo celular NEST, Wuxi</td><td>NEST Biotechnology Co., Ltd.</td><td>703002</td><td></td></tr><tr><td>Placas de cultivo celular NEST de cultivo celular, 96 pocillos</td><td>Wuxi NEST Biotechnology Co., Ltd.</td><td>701001</td><td>Cultivo celular</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Gibco C10010500BT</td><td></td><td>Cell culture</td></tr><tr><td>PCR forward primer (AATGGACTATCATATGCTTACCGTAACTTGAAAGTATTTCG)</td><td>Beijing AuGCT Biotech Co., Ltd.</td><td>-</td><td>Para amplificación de PCR</td></tr><tr><td>Cebador inverso de PCR (GATGTGCGCTCTGCCCCACTGACGGGCA)</td><td>Beijing AuGCT Biotech Co., Ltd.</td><td>-</td><td>Para amplificación por PCR</td></tr><tr><td>Polybrene</td><td>Shanghai Beyotime Biotech Inc</td><td>C0351</td><td>Para infección lentiviral</td></tr><tr><td>Puromicina</td><td>MCE</td><td>HY-K1057</td><td>Para selección post infección lentiviral</td></tr><tr><td>RPMI 1640 medio de cultivo celular</td><td>Gibco</td><td>23400-021</td><td>Cultivo celular</td></tr><tr><td>TIANGENamp kit de ADN genómico</td><td>Beijing TIANGEN Biotech Co., Ltd.</td><td>DP304</td><td>Para extracción de ADN genómico</td></tr><tr><td>Difractómetro de polvo de rayos X</td><td>PerkinElmer</td><td></td><td>Para radioterapia</td></tr></tbody></table>

cribado crispr de todo el genoma para revelar genes radiosensibles y radiorresistentes

Genome-Wide CRISPR Screen for Unveiling Radiosensitive and Radioresistant Genes

El cáncer de pulmón, con la tasa de mortalidad más alta, representa una enfermedad médica altamente agresiva y prevalente. En la Figura 1 se muestra el flujo de trabajo esquemático utilizando la línea celular de cáncer de pulmón A549 para llevar a cabo un cribado CRISPR de todo el genoma con radiación como condición de cribado. En primer lugar, explorar la sensibilidad de las células A549 a diferentes dosis de radiación a través de la formación de clones y experimentos con CCK8 (<strong clas...

Cribado CRISPR de todo el genoma para revelar genes radiosensibles y radiorresistentes

The CRISPR-Cas9 system has been harnessed and repurposed into a powerful genome editing tool. By leveraging this technology, researchers can precisely ...

genome-wide-crispr-screen-for-unveiling-radiosensitive-radioresistant

Research

Investigación

JoVE Journal

Cancer Research

Investigación del cáncer

Este video describe un método de cribado para identificar moscas Drosophila transgénicas, cuyo genoma fue modificado usando CRISPR-Cas9. CRISPR-Cas9 es una poderosa herramienta de edición del genoma que revolucionó la forma en que los científicos pueden manipular el genoma de un organismo. En el protocolo de ejemplo, veremos cómo identificar mutantes generados por CRISPR, en los que una inserción de una secuencia de transactivación reemplaza el primer exón del gen sin ramas (bnl), creando así...

Cribado de modificaciones genómicas: un método para identificar mutantes generados por CRISPR en Drosophila

La técnica de determinación del genotipo se describe aquí, que las parejas de reacción en cadena de la polimerasa fluorescente (PCR) para electroforesis capilar en gel, permite para el genotipado de alto rendimiento de clones knockout nucleasa mediada. Se evita limitaciones que enfrentan las otras técnicas de genotipificación y es más rentable que los métodos de secuenciación.

Usando una técnica fluorescente PCR-capilar Electroforesis en gel con el genotipo CRISPR / Cas9 mediada Knockout mutantes en un formato de alto rendimiento

Los recientes avances en la capacidad de manipular genéticamente las líneas celulares somáticas tienen un gran potencial para la investigación básica y aplicada. En este sentido, presentamos dos enfoques para CRISPR / Cas9 generado producción de eliminación y el cribado en líneas de células de mamíferos, con y sin el uso de marcadores seleccionables.

Generación dependiente de la selección y independiente de CRISPR / Cas9-mediada Gene Knockouts en células de mamíferos

Una biblioteca CRISPR/sgRNA ha sido aplicada a interrogar a genes de la proteína-codificación. Sin embargo, la factibilidad de una biblioteca sgRNA para descubrir la función de un límite CTCF en Regulación génica sigue siendo inexplorada. Aquí, describimos una biblioteca de sgRNA específicos HOX loci para aclarar la función de los límites CTCF en loci HOX .

HOX Loci enfocado CRISPR/sgRNA biblioteca proyección identificación crítica CTCF límites

La tecnología CRISPR-Cas9 proporciona un método eficiente para editar con precisión el genoma de mamíferos en cualquier tipo de célula y representa un medio novedoso para realizar pantallas genéticas en todo el genoma. Aquí se proporciona un protocolo detallado que analiza los pasos necesarios para el buen rendimiento de las pantallas CRISPR-Cas9 agrupadas para todo el genoma.

Pantallas genéticas basadas en CRISPR en células de mamíferos

Este manuscrito describe un enfoque de cribado basado en células a escala del genoma para identificar interacciones extracelulares entre receptores y ligand.

Identificación del receptor de superficie celular mediante pantallas genéticas CRISPR/Cas9 de escala de genoma

Aquí describimos una metodología de detección CRISPR/Cas9 rápida y directa in vivo utilizando inyecciones lentivirales embrionarias de tero guiadas por ultrasonido para evaluar simultáneamente las funciones de varios genes en la piel y la cavidad oral de ratones inmunocompetentntes.

In Vivo CRISPR/Cas9 Screening para evaluar simultáneamente la función génica en la piel del ratón y la cavidad oral

Un obstáculo importante para tecnologías como CRISPR son los eventos fuera del objetivo que pueden alterar genes vitales. La «circularización para la notificación in vitro de los efectos de la escisión mediante secuenciación» (CIRCLE-seq) es una técnica diseñada para identificar los sitios de escisión no intencionados. Este método mapea la actividad de CRISPR-Cas9 en todo el genoma con alta sensibilidad y sin sesgos.

CIRCLE-SEQ para la interrogación de la edición de genes fuera del objetivo

El artículo describe un protocolo para la aplicación de un modelo in vitro de agotamiento para completar un cribado de knockout de CRISPR en todo el genoma en células T receptoras de antígenos quiméricos de donantes sanos.

Realización de un cribado de knockout CRISPR en todo el genoma in vitro en células T receptoras de antígenos quiméricos

Aquí, presentamos un protocolo que integra la tecnología CRISPR/Cas9 con el ensayo Cell Counting Kit-8 (CCK-8) para identificar genes candidatos que son cruciales para la capacidad proliferativa anormal de las células madre y progenitoras hematopoyéticas.

Evaluación de genes anormales relacionados con el crecimiento de células madre y progenitoras hematopoyéticas mediante la combinación de la tecnología CRISPR/Cas9 con el recuento de células

Descubre el cribado CRISPR de todo el genoma para identificar genes radiosensibles y radiorresistentes en células de cáncer de pulmón. Este método mejora la comprensión de los mecanismos de resistencia a la radioterapia.

Cribado CRISPR de todo el genoma para revelar genes radiosensibles y radiorresistentes

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