Name: Estudio de las interacciones entre las células mieloides y las células T con CAR in vitro e in vivo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-25T13:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 14 s
Description: Aprende a estudiar interacciones entre células mieloides y CAR-T in vitro e in vivo usando modelos simplificados en linfoma de células del manto. Este método facilita el desarrollo de inmunoterapias dirigidas a macrófagos.

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<ol><li>Yun, K., Siegler, E. L., Kenderian, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Who+wins+the+combat%2C+CAR+or+TCR%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Who wins the combat, CAR or TCR.</a> Leukemia. 37 (10), 1953-1962 (2023).</li>
<li>Neelapu, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axicabtagene+Ciloleucel+CAR+T-Cell+Therapy+in+Refractory+Large+B-Cell+Lymphoma%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+J+Med%22%5BJournal%5D)">Axicabtagene Ciloleucel CAR T-Cell Therapy in Refractory Large B-Cell Lymphoma.</a> New England J Med. 377 (26), 2531-2544 (2017).</li>
<li>Shah, N. N., Fry, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+resistance+to+CAR+T+cell+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of resistance to CAR T cell therapy.</a> Nat Rev Clin Oncol. 16 (6), 372-385 (2019).</li>
<li>Kiss, M., Caro, A. A., Raes, G., Laoui, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+Reprogramming+of+Monocytes+in+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Fronti+Oncol%22%5BJournal%5D)">Systemic Reprogramming of Monocytes in Cancer.</a> Fronti Oncol. 10, (2020).</li>
<li>Rodriguez-Garcia, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((cell-mediated+depletion+of+immunosuppressive+tumor-associated+macrophages+promotes+endogenous+antitumor+immunity+and+augments+adoptive+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">cell-mediated depletion of immunosuppressive tumor-associated macrophages promotes endogenous antitumor immunity and augments adoptive immunotherapy.</a> Nat Commun. 12 (1), (2021).</li>
<li>Kankeu Fonkoua, L. A., Sirpilla, O., Sakemura, R., Siegler, E. L., Kenderian, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CAR+T+cell+therapy+and+the+tumor+microenvironment%3A+Current+challenges+and+opportunities%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther+Oncolyt%22%5BJournal%5D)">CAR T cell therapy and the tumor microenvironment: Current challenges and opportunities.</a> Mol Ther Oncolyt. 25, 69-77 (2022).</li>
<li>Stroncek, D. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elutriated+lymphocytes+for+manufacturing+chimeric+antigen+receptor+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Trans+Med%22%5BJournal%5D)">Elutriated lymphocytes for manufacturing chimeric antigen receptor T cells.</a> J Trans Med. 15 (1), (2017).</li>
<li>Stroncek, D. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myeloid+cells+in+peripheral+blood+mononuclear+cell+concentrates+inhibit+the+expansion+of+chimeric+antigen+receptor+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Myeloid cells in peripheral blood mononuclear cell concentrates inhibit the expansion of chimeric antigen receptor T cells.</a> Cytotherapy. 18 (7), 893-901 (2016).</li>
<li>Sterner, R. M., Cox, M. J., Sakemura, R., Kenderian, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+crispr%2Fcas9+to+knock+out+gm-csf+in+car-t+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Using crispr/cas9 to knock out gm-csf in car-t cells.</a> J Vis Exp. (149), e59629(2019).</li>
<li>Ali, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PD-1+blockade+and+CDK4%2F6+inhibition+augment+nonoverlapping+features+of+T+cell+activation+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">PD-1 blockade and CDK4/6 inhibition augment nonoverlapping features of T cell activation in cancer.</a> J Exp Med. 220 (4), e20220729(2023).</li>
<li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+and+Metabolomic+Characterization+of+SARS-CoV-2-Infected+Cynomolgus+Macaque+at+Early+Stage%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Proteomic and Metabolomic Characterization of SARS-CoV-2-Infected Cynomolgus Macaque at Early Stage.</a> Front Immunol. 13, 954121(2022).</li>
<li>Ruella, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overcoming+the+immunosuppressive+tumor+microenvironment+of+Hodgkin+lymphoma+using+chimeric+antigen+receptor+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Dis%22%5BJournal%5D)">Overcoming the immunosuppressive tumor microenvironment of Hodgkin lymphoma using chimeric antigen receptor T cells.</a> Cancer Dis. 7 (10), 1154-1167 (2017).</li>
<li>Sakemura, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+Clinically+Relevant+Reporter+for+Chimeric+Antigen+Receptor+T-cell+Expansion+Trafficking%2C+and+Toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunol+Res%22%5BJournal%5D)">Development of a Clinically Relevant Reporter for Chimeric Antigen Receptor T-cell Expansion Trafficking, and Toxicity.</a> Cancer Immunol Res. 9 (9), 1035-1046 (2021).</li>
<li>Sterner, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GM-CSF+inhibition+reduces+cytokine+release+syndrome+and+neuroinflammation+but+enhances+CAR-T+cell+function+in+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">GM-CSF inhibition reduces cytokine release syndrome and neuroinflammation but enhances CAR-T cell function in xenografts.</a> Blood. 133 (7), 697-709 (2019).</li>
<li>Smith, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Three-Dimensional+Skin+Disease+Model+to+Assess+Macrophage+Function+in+Diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Meth%22%5BJournal%5D)">A Novel Three-Dimensional Skin Disease Model to Assess Macrophage Function in Diabetes.</a> Tissue Eng Meth. 27 (2), 49-58 (2021).</li>
<li>Nowak, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pro-inflammatory+monocyte+profile+in+patients+with+major+depressive+disorder+and+suicide+behaviour+and+how+ketamine+induces+anti-inflammatory+M2+macrophages+by+NMDAR+and+mTOR%5BTitle%5D)+AND+%22EBioMedicine%22%5BJournal%5D)">Pro-inflammatory monocyte profile in patients with major depressive disorder and suicide behaviour and how ketamine induces anti-inflammatory M2 macrophages by NMDAR and mTOR.</a> EBioMedicine. 50, 290-305 (2019).</li>
<li>Ajith, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humanized+Mouse+Model+as+a+Novel+Approach+in+the+Assessment+of+Human+Allogeneic+Responses+in+Organ+Transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Humanized Mouse Model as a Novel Approach in the Assessment of Human Allogeneic Responses in Organ Transplantation.</a> Front Immunol. 12, 687715(2021).</li>
<li>Tsukamoto, A., Serizawa, K., Sato, R., Yamazaki, J., Inomata, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vital+signs+monitoring+during+injectable+and+inhalant+anesthesia+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Animals%22%5BJournal%5D)">Vital signs monitoring during injectable and inhalant anesthesia in mice.</a> Exp Animals. 64 (1), 57-64 (2015).</li>
<li>Hickman, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimal+Exposure+Times+for+Irreversible+Euthanasia+with+Carbon+Dioxide+in+Mice+and+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Animal+Sci%22%5BJournal%5D)">Minimal Exposure Times for Irreversible Euthanasia with Carbon Dioxide in Mice and Rats.</a> J Am Assoc Lab Animal Sci. 61 (3), 283-286 (2022).</li>
<li>Zhou, R., Mei, L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aZhou%2C+R+%22Neural+Development%3A+Methods+and+Protocols%22">Neural Development: Methods and Protocols</a>. , Humana Press. Totowa, NJ. (2013).</li>
<li>Gutierrez-Ruiz, O. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ectopic+expression+of+DOCK8+regulates+lysosome-mediated+pancreatic+tumor+cell+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Ectopic expression of DOCK8 regulates lysosome-mediated pancreatic tumor cell invasion.</a> Cell Rep. 42 (9), 113042(2023).</li>
<li>Kirkiles-Smith, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+Humanized+Mouse+Model+to+Study+the+Role+of+Macrophages+in+Allograft+Injury%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Development of a Humanized Mouse Model to Study the Role of Macrophages in Allograft Injury.</a> Transplantation. 87 (2), 189-197 (2009).</li>
<li>Chuprin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humanized+mouse+models+for+immuno-oncology+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Humanized mouse models for immuno-oncology research.</a> Nat Rev Clin Oncol. 20 (3), 192-206 (2023).</li>
<li>Yun, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrinsic+immunosuppressive+features+of+monocytes+suppress+CAR-T19+through+IL-1+pathway+modulation+in+mantle+cell+lymphoma%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther+Oncol%22%5BJournal%5D)">Intrinsic immunosuppressive features of monocytes suppress CAR-T19 through IL-1 pathway modulation in mantle cell lymphoma.</a> Mol Ther Oncol. 33 (2), 200985(2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Jeringa de 0,5 ml</td><td>Fisher Scientific</td><td>329461</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de microcentrífuga de 1,5 ml</td><td>Eppendorf</td><td>1415-2508&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Tubo cónico de 15 ml</td><td>Ciencias de la vida de Corning</td><td>352097</td><td></td></tr><tr><td>Placa transpocilla de 24 pocillos (0.4 &mu; m)</td><td>Ciencias de la vida de Corning</td><td>3397</td><td></td></tr><tr><td>Tubo cónico de 50 ml</td><td>Ciencias de la vida de Corning</td><td>352098</td><td></td></tr><tr><td>CD206 antihumano conjugado con APC/Cy7</td><td>Bioleyenda</td><td>321119</td><td>Anticuerpo de flujo</td></tr><tr><td>CD14 antihumano conjugado con APC</td><td>Bioleyenda</td><td>325607</td><td>Anticuerpo de flujo</td></tr><tr><td>CD3 antihumano conjugado con APC</td><td>Bioleyenda</td><td>344811</td><td>Anticuerpo de flujo</td></tr><tr><td>Solución de enjuague autoMACS</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-222</td><td>Tampón de aislamiento de monocitos clásico</td></tr><tr><td>Matriz de membrana basal</td><td>Ciencias de la vida de Corning</td><td>CLS356237</td><td>Matriz de membrana basal solubilizada</td></tr><tr><td>Medios de cultivo celular</td><td></td><td></td><td>10% de suero AB humano 1% de penicilina-estreptomicina-glutamina en X-VIVO 15 Medio de células hematopoyéticas sin suero</td></tr><tr><td>Kit de aislamiento de monocitos clásico, humano</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-117-337</td><td></td></tr><tr><td>Sistema CytoFLEX B5-R3-V5</td><td>Beckman Coulter</td><td>C04652</td><td>Citómetro de flujo</td></tr><tr><td>D-luciferina</td><td>Biotecnología de oro</td><td>SUERTE-1G</td><td></td></tr><tr><td>D-PBS (solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco)</td><td>Gibco</td><td>14190250&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Ungüento para los ojos</td><td>ThermoFisher</td><td>19-090-832</td><td></td></tr><tr><td>Zona de influencia FACS</td><td></td><td></td><td>2% FBS 1% azida de sodio en PBS</td></tr><tr><td>Suero fetal bovino</td><td>Ciencias de la vida de Corning</td><td>35-011-CV</td><td></td></tr><tr><td>Placa de 96 pocillos de fondo plano</td><td>Ciencias de la vida de Corning</td><td>CLS3997</td><td></td></tr><tr><td>Suero AB humano agrupado inactivado por calor</td><td>Investigación innovadora</td><td>4931</td><td></td></tr><tr><td>Human TruStain FcX (solución bloqueadora del receptor Fc)</td><td>Bioleyenda</td><td>422301</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano líquido&nbsp; &nbsp;</td><td>Piramal Pharma Limited</td><td>66794-017-10</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de imágenes in vivo IVIS Spectrum</td><td>PerkinElmer</td><td>124262</td><td></td></tr><tr><td>Medios de cultivo de línea celular JeKo-1</td><td></td><td></td><td>10% FBS 1% penicilina-estreptomicina-glutamina en medio RPMI-1640</td></tr><tr><td>Kit de tinción de células muertas Aqua fijable viva/muerta, para excitación de 405 nm</td><td>Invitrogen</td><td>L34966</td><td></td></tr><tr><td>Columna LS</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td>Selección de cordón negativo</td></tr><tr><td>Lymphoprep</td><td>Tecnologías de células madre</td><td>07811</td><td>Medio de gradiente de densidad</td></tr><tr><td>Solución de stock MACS BSA</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-376</td><td>Tampón de aislamiento de monocitos clásico</td></tr><tr><td>Anticuerpo CD206 anti-humano de ratón conjugado con AF546&nbsp;</td><td>Biotecnología de Santa Cruz</td><td>SC-376232</td><td></td></tr><tr><td>CABECEO. Cg-prkdcscid&nbsp; Ratones Il2rgtm1Wjl/SzJ (NSG)</td><td>Laboratorio Jackson&nbsp;</td><td>5557</td><td></td></tr><tr><td>CD16 antihumano conjugado con PE</td><td>Bioleyenda</td><td>302007</td><td>Anticuerpo de flujo</td></tr><tr><td>Penicilina-Estreptomicina-Glutamina (100x), Líquido</td><td>Gibco</td><td>10378-016</td><td></td></tr><tr><td>CD163 antihumano conjugado con PerCP</td><td>Bioleyenda</td><td>333625</td><td>Anticuerpo de flujo</td></tr><tr><td>Anticuerpo iNOS anti-humano conejo conjugado con AF647&nbsp;</td><td>Tecnología de proteínas</td><td>CL647-18985</td><td></td></tr><tr><td>GM-CSF humano recombinante</td><td>Tecnologías de células madre</td><td>78015</td><td></td></tr><tr><td>RPMI-1640 medio</td><td>Gibco</td><td>11875093</td><td></td></tr><tr><td>SepMate-50 IVD</td><td>Tecnologías de células madre</td><td>85450</td><td>Aislamiento de PBMC por centrificación de gradiente de densidad&nbsp;</td></tr><tr><td>Azida de sodio, 5% (p/v)</td><td>Ricca Química</td><td>7144.8-16</td><td></td></tr><tr><td>Placa de 48 pocillos tratada con cultivo de tejidos</td><td>Ciencias de la vida de Corning</td><td>3548</td><td></td></tr><tr><td>Analizador de viabilidad celular Vi-cell XR</td><td>Beckman Coulter</td><td></td><td>Contador de células</td></tr><tr><td>X-VIVO 15 Medio de células hematopoyéticas sin suero</td><td>Lonza</td><td>04-418Q</td><td></td></tr></tbody></table>

estudio de las interacciones entre las células mieloides y las células t con car in vitro e in vivo

Studying Interactions between Myeloid Cells and CAR T Cells In Vitro and In Vivo

El objetivo de este protocolo es establecer modelos in vitro e in vivo para estudiar las interacciones entre macrófagos inmunosupresores humanos y células CART debido a la naturaleza compleja y dinámica de las interacciones y los limitados modelos de xenoinjerto existentes. Siguiendo el protocolo, los monocitos clásicos humanos aislados se diferencian para adquirir fenotipos similares a M2 y volverse funcionalmente inmunosupresores.
Para confirmar la pureza de los monocitos c...

Estudio de las interacciones entre las células mieloides y las células T con CAR in vitro e in vivo

Chimeric antigen receptor T (CART) cell therapy has led to remarkable clinical successes treating hematological malignancies. However, most patients ...

studying-interactions-between-myeloid-cells-car-t-cells-vitro

Research

Investigación

JoVE Journal

Cancer Research

Investigación del cáncer

Este video muestra un ensayo in vitro para validar la actividad de las células T con receptor de antígeno quimérico (CAR). Las células de linfoma de células B que expresan el antígeno CD19 y la luciferasa citoplasmática se cultivan conjuntamente con células CAR-T específicas de CD19. La unión de CAR a CD19 en un tumor induce a las células CAR-T a liberar citocinas y toxinas que causan citotoxicidad en las células tumorales. La actividad de las células CAR-T se evalúa cuantificando la citocina...

Ensayo in vitro para evaluar la actividad antitumoral de las células CAR-T específicas de tumores

Aquí, presentamos un protocolo para la determinación de en vivo de la activación de las células (células T) CD4 T ingenua, proliferación y diferenciación de Th1 inducida por el GM-CSF de la médula (BM)-derivado de las células dendríticas (DCs). Además, este protocolo describe aislamiento del BM y del T-cell, la generación de C.C. y transferencia adoptiva de DC y del T-cell.

Un modelo de ratón In Vivo a medida ingenuo CD4 células T activación, proliferación y diferenciación de Th1 inducida por las células dendríticas derivadas de la médula ósea

Aquí, presentamos un protocolo para la producción y los ensayos preclínicos murinas CD19 coche de células de T por transducción retroviral y utilización como terapia contra establecido syngeneic A20 linfoma en ratones BALB/c con o sin lymphodepleting acondicionamiento previo.

Un modelo con ratones Syngeneic células B linfoma de evaluación preclínica de las células de T automóvil CD19

Aquí, describimos un método de cultivo in vitro de co para recurrentemente desafío orientada a tumor las células T, que permite el análisis fenotípico y funcional de la actividad de las células T antitumorales.

En Vitro Tumor celular Rechallenge de evaluación predictiva de antígeno quimérico del Receptor de la célula T función antitumoral

Describimos un enfoque para generar de forma fiable células T del receptor de antígeno quimérico (CAR) y probar su diferenciación y función in vitro e in vivo.

Fabricación de células T del receptor de antígeno quimérico (CAR) para inmunoterapia adoptiva

Este protocolo agiliza la producción de vectores retrovirales y la transducción de células T murinas, lo que facilita la generación eficiente de células CAR-T de ratón.

Generación eficiente de células T con receptor de antígeno quimérico (CAR) murino

Este protocolo proporciona un método de aislamiento primario de células T murinas y microscopía de lapso de tiempo de la migración de células T en condiciones ambientales específicas con análisis cuantitativo.

Ensayo de migración in vitro en tiempo real para linfocitos T murinos CD8+ primarios

El presente protocolo describe un flujo de trabajo experimental que permite el análisis ex vivo de la estimulación de células T humanas en un sistema de cocultivo alogénico con células tumorales pretratadas.

Análisis de la actividad de las células T humanas en un entorno de cocultivo alogénico de células tumorales pretratadas

Aquí, describimos un método para crear gotas de doble emulsión que encapsulan una célula T y una célula diana cancerosa para examinar la muerte celular a nivel de una sola célula. Este método permite la cuantificación dual de las moléculas citotóxicas y la apoptosis de las células diana dentro de una gran población de células T.

Ensayo de citotoxicidad basado en gotas para evaluar las células T receptoras de antígenos quiméricos a nivel de una sola célula

Este protocolo describe los pasos esenciales para el cultivo de células T primarias, incluyendo su aislamiento, activación, expansión y transfección transitoria mediante electroporación de ARNm. Además, se propone un flujo de trabajo y un panel de anticuerpos para el análisis citométrico de flujo del fenotipo, marcadores de activación, viabilidad y expresión del receptor quimérico de antígenos (CAR).

Aislamiento, cultivo y transfección transitoria de células T humanas primarias para generar células T del Receptor de Antígenos Quiméricos (CAR)

Aprende a estudiar interacciones entre células mieloides y CAR-T in vitro e in vivo usando modelos simplificados en linfoma de células del manto. Este método facilita el desarrollo de inmunoterapias dirigidas a macrófagos.

Estudio de las interacciones entre las células mieloides y las células T con CAR in vitro e in vivo

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