Name: In vitro Modelo de impacto para generar lesión subletal por condrocitos en explantes de cartílago bovino (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-27T13:25:00.000+00:00
Duration: 6 min 42 s
Description: Aprende a generar lesión subletal en condrocitos de cartílago bovino mediante un modelo de impacto ex vivo con torre de caída controlada. Este método permite estudiar respuestas celulares tempranas y vías moleculares implicadas en la osteoartritis postraumática.

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</ol>

<table><tbody><tr><td>#11 hoja de bisturí estéril</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10-001-823</td><td>Retire el cartílago del hueso</td></tr><tr><td>#22 hoja de bisturí estéril</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10-001-833</td><td>Retire la piel de los tejidos bovinos y abra la articulación cortando los ligamentos</td></tr><tr><td>10-1000 ul puntas de pipeta</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>02-707-411</td><td>Medir y transferir&nbsp; PBS, medios de cultivo y otras soluciones&nbsp;</td></tr><tr><td>Etanol de 200 grados</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>03-007-647</td><td>Se utiliza para preparar etanol al 70% como agente esterilizante para desinfectar herramientas quirúrgicas y mantener un ambiente estéril durante la preparación y el procesamiento de tejidos.</td></tr><tr><td>Tubo de centrífuga de 50 ml (estéril)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>339652</td><td>Se utiliza para almacenar medios y muestras</td></tr><tr><td>Garrafón de 5 galones</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>04-355-233</td><td>Recipiente PBS estéril que se conecta al adaptador giratorio mediante una manguera.</td></tr><tr><td>Placa de 6 pocillos (estéril)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>140685</td><td>Se utiliza para almacenar temporalmente núcleos osteocondrales en un entorno estéril con medios precalentados durante la recolección, la incubación antes de los estudios de impacto y la obtención de imágenes</td></tr><tr><td>Acelerómetro</td><td>Kistler</td><td>8743A5</td><td>Se utiliza para medir la aceleración producida durante un</td></tr><tr><td>impacto Kit de tinción de apoptosis (CellEvent)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>C10423</td><td>Se utiliza para detectar y visualizar células apoptóticas</td></tr><tr><td>Frascos de lavado esterilizables en autoclave</td><td>Nalgene</td><td>2405-0500</td><td>Llene con PBS estéril para hidratar el cartílago durante la recolección de tejidos.</td></tr><tr><td>Sierra de autopsia</td><td>Mopec</td><td>BD 810</td><td>Elimine cualquier exceso de hueso después de abrir la articulación o extraer el núcleo osteocondral</td></tr><tr><td>Hoja de sierra de autopsia</td><td>Mopec</td><td>BD 101</td><td>Se utiliza para cortar hueso para aislar y liberar explantes osteocondrales.</td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Avrio Health L.P.</td><td>n/a</td><td>Se utiliza para la desinfección del exterior de las muestras bovinas antes de trasladarlas a la campana y se diluye para desinfectar las muestras osteocondrales finales.</td></tr><tr><td>Manguera transparente de 4 pies</td><td>n/a</td><td>n/a Se</td><td>utiliza para conectar la garrafa de 5 litros que contiene PBS al adaptador giratorio de la taladradora para transportar PBS.</td></tr><tr><td>Broca de perforación de núcleos&nbsp;</td><td>Herramientas Superhard industriales UKAM</td><td>3EDCD7160</td><td>Utilizado para extraer explantes osteocondrales del hueso perforando el cartílago articular y el hueso subcondral.-&nbsp; diámetro de la broca: 7/16" (Taladros de núcleo de diamante galvanizado)</td></tr><tr><td>Llave de media luna</td><td>McMaster Carr</td><td>5362A1</td><td>Utilizada para apretar la abrazadera (que mantiene la articulación en su lugar) y apretar la broca de extracción de núcleos&nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>Pipetas serológicas desechables</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>13-678-11</td><td>Medición y transferencia de PBS y medios de cultivo</td></tr><tr><td>Almohadilla inferior desechable</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>23-666-062</td><td>Se utiliza para cubrir el espacio del mostrador para absorber agua y líquidos durante la cosecha para mayor comodidad e higiene</td></tr><tr><td>Unidades de filtro de vacío desechables</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>SCGP00525</td><td>Filter PBS y otras soluciones</td></tr><tr><td>Taladro de prensa&nbsp; &nbsp;</td><td>WEN</td><td>433TV 3.25-Inch</td><td>Aplique fuerza para perforar muestras osteocondrales- WEN 433TV 3.25-Inch Industrial Strength Drill Press</td></tr><tr><td>inclinando ángulo de inclinación Vise</td><td>WEN</td><td>TV434</td><td>Asegura muestras osteocondrales en una posición fija en el ángulo deseado durante el proceso de extracción de núcleos.</td></tr><tr><td>Torre de caída</td><td>hecha a medida</td><td>n/a</td><td>Se utiliza para impactar las muestras</td></tr><tr><td>FIJI (ImageJ Extension)</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>Software utilizado para procesar y analizar imágenes de microscopía, incluida la viabilidad celular y la cuantificación de la apoptosis</td></tr><tr><td>Pinzas</td><td>Fisherbrand</td><td>12-000-163</td><td>Se utiliza para cortar tejido en la campana, abrir la articulación y transferir las muestras</td></tr><tr><td>Gasa (estéril)</td><td>Dukal</td><td>6412</td><td>Se utiliza para hidratar el cartílago articular después de abrir la cápsula articular</td></tr><tr><td>Botella de vidrio de 1 litro de medios</td><td>Sigma Aldrich</td><td>CLS13951LHTC</td><td>Se utiliza para almacenar PBS estériles</td></tr><tr><td>Guantes</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>19-130-1597D</td><td>Se utilizan para proteger al equipo de recolección</td></tr><tr><td>Insulina-Transferrina-Selenio (ITS)</td><td>Gibco</td><td>41400-045</td><td>Suplemento de medios</td></tr><tr><td>Software de adquisición de datos LabVIEW National</td><td>Instruments</td><td>n/a</td><td>Captura datos de la celda de carga y el acelerómetro durante las pruebas de impacto para su posterior análisis.</td></tr><tr><td>Ácido L-ascórbico</td><td>Merck</td><td>A4403</td><td>Suplemento de medios</td></tr><tr><td>Microscopio de barrido confocal láser</td><td>Olympus</td><td>FV1000D</td><td>Se utiliza para capturar imágenes tridimensionales de alta resolución de muestras de tejido teñidas.</td></tr><tr><td>Kit de tinción de ensayo vivo y muerto</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>L3224</td><td>Se utiliza para diferenciar entre células vivas y muertas en muestras de tejido para evaluar la viabilidad celular</td></tr><tr><td>Celda de carga</td><td>Kistler</td><td>9712B5000</td><td>Se utiliza para medir la fuerza aplicada durante un impacto.</td></tr><tr><td>MATLAB&nbsp;</td><td>El programa MathWorks Inc.</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Sierra de cinta para carne</td><td>Skymsen</td><td>MSKLE</td><td>Quitar la pezuña del carpo de muestras bovinas</td></tr><tr><td>Micropipeta 10-100 uL</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>FBE00100</td><td>Medición y transferencia&nbsp; PBS y medios de cultivo</td></tr><tr><td>Medio esencial mínimo (MEM) solución de aminoácidos no esenciales</td><td>Gibco</td><td>11140-050</td><td>Suplemento de medios</td></tr><tr><td>Águila modificada' s Medio (DMEM)</td><td>Gibco</td><td>10566-016</td><td>Cultivo de explantes osteocondrales.</td></tr><tr><td>Penicilina-Estreptomicina</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15-140-148</td><td>Suplemento de medios</td></tr> Solución <tr><td>salina tamponada con fosfato</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>BP399-20</td><td>Utilizado para enjuagar, hidratar y enfriar tejidos para mantener condiciones fisiológicas, prevenir la deshidratación y preparar soluciones de tinción</td></tr><tr><td>Soporte de muestras en torre de caída</td><td>hecho a medida</td><td>n/a</td><td>Asegura el núcleo osteocondral durante el impacto.</td></tr><tr><td>Mango de bisturí&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>16-100-107</td><td>Se utiliza para cortes precisos, disección de tejidos y apertura de la articulación.</td></tr><tr><td>Tornillos (añadir a cad)</td><td></td><td></td><td>Rosca 6-32 Tamaño-18-8 Tornillos de cabeza hueca de acero inoxidable</td></tr><tr><td>Piruvato de sodio</td><td>Gibco</td><td>11360-070</td><td>Suplemento de medios</td></tr><tr><td>Cabeza de impactador esférico</td><td>McMaster Carr</td><td>9292K52</td><td>Autoclave antes del procedimiento de impacto</td></tr><tr><td>Mascarillas quirúrgicas</td><td>Máscara de filtro</td><td>375101</td><td>Utilizado para proteger al equipo de recolección</td></tr><tr><td>Adaptador de giro de agua&nbsp;</td><td>Herramientas superduras industriales UKAM</td><td>7035812</td><td>Se conecta a la broca de perforación para proporcionar un flujo continuo de PBS para enfriar durante el proceso de perforación.</td></tr></tbody></table>

in vitro modelo de impacto para generar lesión subletal por condrocitos en explantes de cartílago bovino

In Vitro Impact Model to Generate Sublethal Chondrocyte Injury in Bovine Cartilage Explants

La carga de impacto mecánico a los explantes osteocondrales se aplicó utilizando una torre de caída con alturas de carro de 4,0 cm, 4,5 cm y 5,0 cm por encima del tejido (n = 3 o 4). El aumento de la altura del carro antes de que se liberara dio como resultado mayores fuerzas de impacto, tensiones máximas promedio, tasas de carga y energías de impacto (Tabla 1).
Buscamos desarrollar un modelo de lesión de cartílago ex vivo que fuera subletal durante 24 h después del i...

In vitro Modelo de impacto para generar lesión subletal por condrocitos en explantes de cartílago bovino

Post-Traumatic Osteoarthritis (PTOA) is a prevalent, degenerative, and painful progressive joint disease that typically arises after significant joint ...

in-vitro-impact-model-to-generate-sublethal-chondrocyte-injury-bovine

Research

Investigación

JoVE Journal

Bioengineering

Bioingeniería

Se describe una técnica experimental para el tratamiento de defectos condrales en la articulación de la rodilla del conejo. La implantación de condrocitos autólogos sembrados en una matriz es un método bien aceptado para la remodelación y reparación de lesiones del cartílago articular que proporcionan resultados satisfactorios a largo plazo. Matrix asistida por el trasplante de condrocitos autólogos (MACT) ofrece un método de implantación estandarizada y clínicamente establecida.

Matrix asistida por trasplante de condrocitos autólogos para la remodelación y reparación de defectos condrales en un modelo de conejo

Se presenta un método para evaluar la extensión espacial de las lesiones o la muerte de la célula en la superficie articular de articulaciones murinas intactas después de la aplicación de cargas mecánicas controladas o impactos. Este método puede utilizarse para investigar cómo osteoartritis, factores genéticos o los regímenes de carga diferentes afectan la vulnerabilidad de los condrocitos en situ .

Visualización en tiempo real y análisis de la lesión de condrocitos debido a cargas mecánicas en explantes de cartílago murino intacta

Aquí, presentamos un protocolo que describe el aislamiento y el cultivo de explantes de cartílago de rodillas bovinas. Este método proporciona una herramienta fácil y accesible para describir los cambios de tejido en respuesta a estímulos biológicos o nuevas terapias dirigidas a la articulación.

Un modelo de cultivo de tejido ex vivo de remodelación del cartílago en explantes de rodilla bovinas

Aquí, presentamos el modelo de lesión de cartílago intraarticular inducida por carga cíclica de la rodilla de rata, generada por 60 compresiones cíclicas sobre 20 N, lo que resulta en daño al cartílago condilar femoral en ratas.

Un método no invasivo para generar el modelo de lesión de cartílago intraarticular inducida por carga cíclica de la rodilla de rata

El modelo de impacto del cóndilo femoral medial abierto en conejos es fiable para estudiar la artrosis postraumática (PTOA) y nuevas estrategias terapéuticas para mitigar la progresión de la PTOA. Este protocolo genera un defecto aislado del cartílago del cóndilo femoral medial posterior en conejos utilizando una torre de caída basada en carros con una cabeza impactadora.

Un modelo de impacto cartilaginoso reproducible para generar artrosis postraumática en el conejo

Este protocolo establece un modelo de defectos de cartílago de espesor total (FTCD) mediante la perforación de orificios en el surco troclear femoral de ratas y la medición del comportamiento del dolor posterior y los cambios histopatológicos.

Desarrollo y evaluación de un modelo de rata de defectos de cartílago de espesor total

El protocolo propuesto implica un enfoque global para evaluar la formación ósea en el contexto de la regeneración ósea mediante análisis multimodales. Su objetivo es proporcionar información cualitativa y cuantitativa sobre la formación de hueso nuevo, mejorando el rigor y la validez de las investigaciones básicas y preclínicas.

Caracterización integral de la mineralización tisular en un modelo ex vivo

Aquí presentamos un protocolo integrado para generar lesiones osteocondrales controladas en rodillas de oveja con el fin de establecer un modelo experimental adecuado para estudios de regeneración de tejido óseo y cartílago. El protocolo describe un método para inducir un defecto osteocondral de grosor completo en el cóndilo femoral, utilizando técnicas que minimizan los impactos en el bienestar animal y la variabilidad en los resultados.

Establecimiento y evaluación de un modelo ovino de defecto osteocondral de espesor completo

Exacta cuantificación, basada en la causalidad de la función diastólica global ha sido alcanzado por el análisis basado en la modelización cinemática de flujo transmitral a través de la parametrizada llenado diastólico (PDF) formalismo. PDF genera rigidez, la relajación, y los parámetros de carga única y aclara "nuevo" fisiología mientras que proporciona índices de sensibilidad y especificidad de la disfunción.

La cuantificación de la función diastólica por Global Análisis basado en Modelado cinemático de flujo transmitral mediante el formalismo de llenado diastólico parametrizada

Hemos desarrollado un ensayo de irritación ocular que utiliza un modelo de tejido tridimensional epitelial-córnea como humana reconstruida (RHCE). La prueba es capaz de discriminar entre irritante ocular y materiales corrosivos (SGA Categorías 1 y 2 combinados) y aquellos que no requieren etiquetado (GHS No Categoría).

Irritación de los ojos de prueba (IET) para la identificación del peligro de los ojos: Irrita los productos químicos que utilizan Reconstruido humana Córnea-como epitelial (RHCE) Modelo de Tejidos

Aprende a generar lesión subletal en condrocitos de cartílago bovino mediante un modelo de impacto ex vivo con torre de caída controlada. Este método permite estudiar respuestas celulares tempranas y vías moleculares implicadas en la osteoartritis postraumática.

In vitro Modelo de impacto para generar lesión subletal por condrocitos en explantes de cartílago bovino

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