Name: Optimización del aislamiento y la purificación de las células mesangiales glomerulares murinas (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-07T14:50:00.000+00:00
Duration: 4 min 46 s
Description: Aprende el aislamiento optimizado de células mesangiales glomerulares murinas mediante digestión con colagenasa. Este protocolo permite múltiples pasajes y criopreservación para investigación renal.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Pollak, M. R., Quaggin, S. E., Hoenig, M. P., Dworkin, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+glomerulus%3A+The+sphere+of+influence%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">The glomerulus: The sphere of influence.</a> Clin J Am Soc Nephrol. 9 (8), 1461-1469 (2014).</li>
<li>Mené, P., Simonson, M. S., Dunn, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiology+of+the+mesangial+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Physiology of the mesangial cell.</a> Physiol Rev. 69 (4), 1347-1424 (1989).</li>
<li>Avraham, S., Korin, B., Chung, J. J., Oxburgh, L., Shaw, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mesangial+cell+-+the+glomerular+stromal+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Nephrol%22%5BJournal%5D)">The mesangial cell - the glomerular stromal cell.</a> Nat Rev Nephrol. 17 (12), 855-864 (2021).</li>
<li>Chadban, S. J., Atkins, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glomerulonephritis%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Glomerulonephritis.</a> Lancet. 365 (9473), 1797-1806 (2005).</li>
<li>Qian, Y., Feldman, E., Pennathur, S., Kretzler, M., Brosius, F. C. 3rd <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+fibrosis+to+sclerosis%3A+Mechanisms+of+glomerulosclerosis+in+diabetic+nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">From fibrosis to sclerosis: Mechanisms of glomerulosclerosis in diabetic nephropathy.</a> Diabetes. 57 (6), 1439-1445 (2008).</li>
<li>Zhu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iga+Gut+microbiome+regulates+the+production+of+hypoglycosilated+iga1+via+the+tlr4+signaling+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrol+Dial+Transplant%22%5BJournal%5D)">Iga Gut microbiome regulates the production of hypoglycosilated iga1 via the tlr4 signaling pathway.</a> Nephrol Dial Transplant. 39 (10), 1624-1641 (2024).</li>
<li>Kong, L. -L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+murine+models+of+diabetic+nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Diabetes+Res%22%5BJournal%5D)">Advances in murine models of diabetic nephropathy.</a> J Diabetes Res. 2013, 797548(2013).</li>
<li>Schiffer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibitory+smads+and+tgf-beta+signaling+in+glomerular+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Inhibitory smads and tgf-beta signaling in glomerular cells.</a> J Am Soc Nephrol. 13 (11), 2657-2666 (2002).</li>
<li>Gyarmati, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sparsentan+improves+glomerular+hemodynamics%2C+cell+functions%2C+and+tissue+repair+in+a+mouse+model+of+FSGS%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Sparsentan improves glomerular hemodynamics, cell functions, and tissue repair in a mouse model of FSGS.</a> JCI Insight. 9 (19), e177775(2024).</li>
<li>Chafin, C. B., Regna, N. L., Hammond, S. E., Reilly, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+and+urinary+microRNA+alterations+in+NZB%2FW+mice+with+hydroxychloroquine+or+prednisone+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Immunopharmacol%22%5BJournal%5D)">Cellular and urinary microRNA alterations in NZB/W mice with hydroxychloroquine or prednisone treatment.</a> Int Immunopharmacol. 17 (3), 894-906 (2013).</li>
<li>Lucero, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tnf-%CE%B1+plus+il-1%CE%B2+induces+opposite+regulation+of+cx43+hemichannels+and+gap+junctions+in+mesangial+cells+through+a+rhoa%2Frock-dependent+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Tnf-α plus il-1β induces opposite regulation of cx43 hemichannels and gap junctions in mesangial cells through a rhoa/rock-dependent pathway.</a> Int J Mol Sci. 23 (17), (2022).</li>
<li>Schnaper, H. W., Hayashida, T., Hubchak, S. C., Poncelet, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tgf-beta+signal+transduction+and+mesangial+cell+fibrogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Tgf-beta signal transduction and mesangial cell fibrogenesis.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 284 (2), F243-F252 (2003).</li>
<li>Mackay, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glomerular+epithelial%2C+mesangial%2C+and+endothelial+cell+lines+from+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Glomerular epithelial, mesangial, and endothelial cell lines from transgenic mice.</a> Kidney Int. 33 (3), 677-684 (1988).</li>
<li>Wilson, H. M., Stewart, K. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glomerular+epithelial+and+mesangial+cell+culture+and+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Glomerular epithelial and mesangial cell culture and characterization.</a> Methods Mol Med. 107, 269-282 (2005).</li>
<li>Menè, P., Stoppacciaro, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+propagation+of+glomerular+mesangial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation and propagation of glomerular mesangial cells.</a> Methods Mol Biol. 466, 3-17 (2009).</li>
<li>Gilbert, S. F., Migeon, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((D-valine+as+a+selective+agent+for+normal+human+and+rodent+epithelial+cells+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">D-valine as a selective agent for normal human and rodent epithelial cells in culture.</a> Cell. 5 (1), 11-17 (1975).</li>
<li>Kreisberg, J. I., Venkatachalam, M., Troyer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contractile+properties+of+cultured+glomerular+mesangial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Contractile properties of cultured glomerular mesangial cells.</a> Am J Physiol. 249 (4 Pt 2), F457-F463 (1985).</li>
<li>Adam, M., Potter, A. S., Potter, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Psychrophilic+proteases+dramatically+reduce+single-cell+rna-seq+artifacts%3A+A+molecular+atlas+of+kidney+development%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Psychrophilic proteases dramatically reduce single-cell rna-seq artifacts: A molecular atlas of kidney development.</a> Development. 144 (19), 3625-3632 (2017).</li>
<li>Sadovnic, M. J., Brand-Elnaggar, J., Bolton, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+chicken+mesangial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nephron%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of chicken mesangial cells.</a> Nephron. 58 (1), 75-84 (1991).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>100 y micro; m Filtro de células</td><td>Biosharp</td><td>BS-100-CS</td><td></td></tr><tr><td>100 mm Placa de Petri</td><td>Sorfa</td><td>230301</td><td></td></tr><tr><td>15 mL Tubo de centrífuga</td><td>Sorfa</td><td>411000</td><td></td></tr><tr><td>15 mm placa de cultivo celular con fondo de vidrio</td><td>Sorfa</td><td>201200</td><td></td></tr><tr><td>180 kDa Plus Marcador de proteínas preteñido</td><td>Vazyme</td><td>MP201-01</td><td></td></tr><tr><td>2 mM L-glutamina</td><td>BasalMedia</td><td>S210JV</td><td></td></tr><tr><td>4% Paraformaldehído</td><td>Biosharp</td><td>BL539A</td><td></td></tr><tr><td>40 &micro; m Filtro de células</td><td>Biosharp</td><td>BS-40-XBS</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Tubo de centrífuga</td><td>Sorfa</td><td>41000</td><td></td></tr><tr><td>60 mm Placa de Petri</td><td>Sorfa</td><td>230201</td><td></td></tr><tr><td>75% de alcohol</td><td>Knowles</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>96 Placas de cultivo celular de pocillos, tratadas con TC</td><td>Servicebio</td><td>CCP-96H</td><td></td></tr><tr><td>Antibióticos (10 &mu; g/mL de ceftriaxona más 100 &mu; g/mL gentamicina)</td><td>NCM</td><td>C100C5</td><td></td></tr><tr><td>BCA (ácido bicincónico) Kit de ensayo de proteínas</td><td>CWBIO</td><td>CW0014S</td><td></td></tr><tr><td>Kit de recuento de células-8</td><td>Microscopio</td> confocal Oriscience <td>CB101</td><td></td></tr><tr><td></td><td>FV-3000</td><td>Olympus</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Earle's Solución salina equilibrada (1x EBSS)&nbsp;</td><td>Beyotime</td><td>&nbsp; C0213</td><td></td></tr><tr><td>Suero fetal bovino (FBS)</td><td>Excell</td><td>FSP500</td><td></td></tr><tr><td>Analizador de células fluorescentes</td><td>Mira FL&nbsp;</td><td>Medios Countstar</td><td></td></tr><tr><td>Fluoromount</td><td>Southern Biotech</td><td>0100-01</td><td></td></tr><tr><td>Insulina, Transferrina, Selenio Solución 100x (ITS -G)</td><td>Gibco</td><td>41400045</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio de fluorescencia invertida</td><td>Olympus</td><td>IX83</td><td></td></tr><tr><td>Tampón de lisis</td><td>Adilab</td><td>PP1101</td><td></td></tr><tr><td>Kit de preparación PAGE de un solo paso (10%)</td><td>Oriscience</td><td>PB102</td><td></td></tr><tr><td>Kit de preparación PAGE de un solo paso (7.5%)</td><td>Oriscience</td><td>PB101</td><td></td></tr><tr><td>PE anti-ratón CD140b Anticuerpo Biolegend</td><td></td><td>323605</td><td></td></tr><tr><td>solución salina tamponada con fosfato (PBS)</td><td>Servicebio</td><td>G4202</td><td></td></tr><tr><td>Plastic Cell Pestle</td><td>Biofil</td><td>&nbsp; CC-4090</td><td></td></tr><tr><td>Cóctel de inhibidores de proteinasa</td><td>Roche</td><td>4693159001</td><td></td></tr><tr><td>Membrana de PVDF</td><td>Vazyme</td><td>E802-01</td><td></td></tr><tr><td>Insulina humana recombinante</td><td>Solarbio</td><td>11061-68-0</td><td></td></tr><tr><td>Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Medio</td><td>Corning</td><td>10-040-CV SDS-PAGE</td><td></td></tr><tr><td>Tampón de carga de muestras (5x)</td><td>Servicebio</td><td>G2013</td><td></td></tr><tr><td>Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Medium (D-valina en lugar de L-valina)</td><td>Procell</td><td>WH3923U222</td><td></td></tr><tr><td>TBS (Tris Buffered Saline)&nbsp;</td><td>Servicebio</td><td>G0001-2L</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Biosharp</td><td>BS084</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA (0.25%)</td><td>Gibco</td><td>25200072</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Biosharp</td><td>BS100</td><td></td></tr><tr><td>Tipo I colagenasa</td><td>Solarbio</td><td>&nbsp; CB140</td><td></td></tr></tbody></table>

optimización del aislamiento y la purificación de las células mesangiales glomerulares murinas

Optimizing Isolation and Purification of Murine Glomerular Mesangial Cells

Este estudio desarrolló un protocolo optimizado para el aislamiento de MCs murinos y el cultivo celular ex vivo. Hasta donde sabemos, no existe un método estándar para validar los MC primarios ex vivo. De acuerdo con publicaciones previas, las MCs se caracterizan por la expresión de αSMA, Vimentina y Fibronectina 3,14,15. Se utilizó el análisis de Western blot para detectar los niveles de expresión de MCs. Los ...

Optimización del aislamiento y la purificación de las células mesangiales glomerulares murinas

Mesangial cells (MCs) are stromal cells located in the middle space of the glomerulus, with pivotal functions in glomerular homeostasis. Methods for ...

optimizing-isolation-purification-murine-glomerular-mesangial

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

En este informe se describe un método para el aislamiento y la cultura de los nichos de células progenitoras de los riñones de embriones de ratón que pueden utilizarse para estudiar las vías de señalización que regulan células madre / progenitoras de los riñones en desarrollo. Estas células cultivadas son muy accesibles a pequeñas moléculas y tratamiento de proteínas recombinantes, y esto es importante también para la transducción viral, que permite la manipulación eficiente de las vías de...

Aislamiento y cultivo de células de la zona nefrogénica del riñón de embriones de ratón

Este video describe el método para aislar glomérulos intactos de riñones de ratón. Los glomérulos encapsulados y descapsulados así obtenidos pueden utilizarse posteriormente para cultivar las excrecencias de las células epiteliales parietales del riñón murino.

Aislamiento de glomérulos: una técnica para obtener glomérulos intactos a partir de riñón murino

En este video, demostramos los pasos para aislar y purificar células epiteliales tubulares renales para una amplia gama de estudios de biología molecular y cultivos celulares.

Aislamiento de células renales murinas: una técnica para aislar y generar cultivo primario de células epiteliales tubulares renales

Se necesitan técnicas fiables y eficientes para el aislamiento de las células inmunitarias renales para aplicaciones posteriores. Esto requiere el marcaje de anticuerpos de superficie de una pequeña cantidad de células inmunitarias renales. En este artículo, describimos un método conciso para el aislamiento de células inmunitarias renales que aparentemente logra este objetivo.

Fiable y de alta eficiencia de extracción de riñón de células inmunes

Se presenta un protocolo para el aislamiento de primaria microglia del cerebro murino. Esta técnica ayuda a promover la comprensión actual de condiciones neurológicas. Centrifugación de gradiente de densidad y separación magnética se combinan para producir suficiente rendimiento de una muestra muy pura. Además, describiremos los pasos para la caracterización de la microglia.

Caracterización y aislamiento de Microglia primarios de ratón por centrifugación de gradiente de densidad

El objetivo principal de este protocolo es eficaz aislar culturas viables glomérulos primarios con contaminantes mínimos para el uso en una variedad de aplicaciones posteriores. Los glomérulos aislados mantienen relaciones estructurales entre los tipos de componentes de la célula y pueden ser cultivadas ex vivo para un a corto plazo.

Un método eficiente de tamizado para aislar intactos glomérulos del riñón de rata adulta

Aquí presentamos un protocolo para murino en vivo etiquetado de proteínas de la superficie celular glomerular con biotina. Este protocolo contiene información sobre la perfusión de los riñones de ratón, aislar glomérulos y realizar endógena inmunoprecipitación de la proteína de interés.

Aislamiento de glomérulos y en Vivo de etiquetado de proteínas de la superficie celular Glomerular

Hemos optimizado un protocolo para aislar y purificar los pericitas cardíacos murinos para la investigación básica y la investigación de su biología y potencial terapéutico.

Aislamiento y Purificación de Pericitas Cardíacos Murinos

Este artículo describe un método para cultivar y analizar los crecimientos de células epiteliales parietales glollares de glomérulos encapsulados aislados del riñón de ratón. Este método se puede utilizar para estudiar las vías implicadas en la proliferación y migración de células epiteliales parietales.

Crecimiento glomerular como ensayo ex vivo para analizar las rutas involucradas en la activación de células epiteliales parietales

El artículo describe el método para aislar células endoteliales glomerulares inmortalizadas condicionalmente de los riñones de ratones transgénicos que expresan el virus simio termolábil 40 y las mitocondrias fotoactivables, PhAMextirpado. Describimos el procedimiento para el aislamiento de glomérulos de riñones enteros utilizando perlas, pasos de digestión, siembra y cultivo de GECs-CD31 positivos.

Aislamiento de células endoteliales glomerulares de ratón condicionalmente inmortalizadas con mitocondrias fluorescentes

Aprende el aislamiento optimizado de células mesangiales glomerulares murinas mediante digestión con colagenasa. Este protocolo permite múltiples pasajes y criopreservación para investigación renal.

Optimización del aislamiento y la purificación de las células mesangiales glomerulares murinas

Explorar más videos