Modelo murino de disección aórtica torácica inducida por infusión oral de β-aminopropionitrilo y angiotensina II subcutánea

Este estudio establece un modelo de ratón de disección aórtica torácica, TAD, a través de BAPN e inducción de angiotensina II, proporcionando un procedimiento detallado que ofrece una herramienta valiosa para explorar la patogénesis de TAD o los enfoques terapéuticos. La combinación BAPN-angiotensina II proporciona un método para establecer modelos murinos de TAD, que logran una alta tasa de incidencia de TAD y replican características fisiopatológicas que se asemejan a las observadas en TAD humano. En el futuro, nuestro equipo de investigación integrará la investigación clínica y fundamental para ilustrar la patogénesis cardiovascular, priorizando el descubrimiento de nuevas estrategias terapéuticas a través de conocimientos mecanicistas e innovación traslacional.

[Presentador] Pese cada ratón y registre el peso corporal máximo para calcular la masa de angiotensina II requerida para el experimento. Utilice la plantilla de cálculo para determinar la masa de angiotensina II para cada ratón en función del peso corporal máximo. Luego calcule la masa total de angiotensina II requerida para preparar 130 microlitros de solución de angiotensina II por ratón. Utilice la plantilla proporcionada para determinar el volumen de llenado de la solución de angiotensina II y la solución salina necesaria para el experimento. Pese la cantidad calculada de angiotensina II en un microtubo estéril utilizando una balanza analítica. Agregue el volumen calculado de solución salina normal en el microtubo. Con un mezclador de vórtice, disuelva bien el polvo hasta que no queden partículas visibles. Pese cada bomba osmótica, incluido el cuerpo de la bomba y el moderador de flujo, utilizando una balanza analítica. Conecte un tubo de llenado a una jeringa estéril de 1 mililitro recién abierta y aspire cuidadosamente la solución de angiotensina II preparada. Sostenga el tubo de llenado en posición ascendente y elimine las burbujas de aire de la jeringa. Inserte suavemente el extremo del tubo de llenado en la abertura superior de la bomba osmótica hasta que el tubo no se pueda insertar más. Sostenga la bomba en posición vertical y presione lentamente el émbolo de la jeringa hasta que aparezca una solución de angiotensina II en la salida. Luego deténgase y retire el tubo de llenado con cuidado. A continuación, inserte el moderador de flujo en la abertura de la bomba con cuidado y lentamente hasta que no quede espacio entre el moderador y la parte superior de la bomba. Pese la bomba cargada utilizando la balanza analítica y registre el valor. Coloque las bombas llenas en solución salina estéril a 37 grados centígrados, con el cabezal moderador hacia arriba, durante al menos seis horas antes de la implantación. Coloque el ratón en posición prona sobre la superficie quirúrgica. Use un bisturí para hacer con cuidado una incisión transversal de 1 centímetro en la piel. Use un par de pinzas curvas para agarrar el margen incisal y otro par de pinzas para diseccionar sin rodeos el tejido subcutáneo, creando un bolsillo para la bomba osmótica. Inserte la bomba llena en el bolsillo con el cabezal moderador de flujo apuntando hacia el extremo caudal del mouse. Alinee cuidadosamente los márgenes incisales y cierre la piel, utilizando suturas no absorbibles 6-0. Esta figura ilustra la incidencia de disección y ruptura aórtica en todos los grupos experimentales. La disección aórtica ocurrió en el 100% de los ratones en el grupo de BAPN más angiotensina II, y el 35% experimentó ruptura, superando la incidencia del 55% o 60% observada en el grupo de BAPN o BAPN más solución salina, mientras que no se produjo disección ni ruptura en los controles. La morfología aórtica macroscópica mostró una deformación progresiva en los grupos BAPN, BAPN más solución salina y BAPN más angiotensina II en comparación con las aortas en los controles. Los diámetros aórticos torácicos máximos fueron significativamente mayores en todos los grupos tratados con BAPN en comparación con los controles, sin diferencias significativas entre los grupos tratados. La tinción con hematoxilina y eosina reveló paredes aórticas delgadas y uniformes en los controles, mientras que todos los grupos tratados con BAPN mostraron engrosamiento e infiltración inflamatoria. La tinción de elastina Van Gieson demostró fibras elásticas intactas en los controles y fragmentación progresiva de las fibras con formación de luz falsa en todos los grupos tratados con BAPN.