Name: Análisis 3D simultáneo del daño cardíaco y la respuesta inmune en el infarto agudo de miocardio reperfundido mediante microscopía de fluorescencia de hoja de luz (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-26T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 38 s
Description: Aprende a analizar el daño cardíaco y la respuesta inmune en infarto agudo de miocardio mediante microscopía de hoja de luz en modelo murino. Este método permite la localización 3D simultánea de tejido dañado y células inmunes.

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<li>Susaki, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-brain+imaging+with+single-cell+resolution+using+chemical+cocktails+and+computational+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Whole-brain imaging with single-cell resolution using chemical cocktails and computational analysis.</a> Cell. 157 (3), 726-739 (2014).</li>
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<li>Pichardo, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+tissue+clearing+to+study+the+intra-pulmonary+biodistribution+of+intravenously+delivered+mesenchymal+stromal+cells+and+their+interactions+with+host+lung+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Optical tissue clearing to study the intra-pulmonary biodistribution of intravenously delivered mesenchymal stromal cells and their interactions with host lung cells.</a> Int J Mol Sci. 23 (22), 14171(2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Aguja de 27 G</td><td>Becton Dickinson</td><td>305889</td><td>BD Eclipse</td></tr><tr><td>Procesamiento de imágenes 3D y Software de análisis</td><td>Plano de bits</td><td>Vers. 10.1.0</td><td>Imaris</td></tr><tr><td>Sutura 5-0</td><td>Serag-Wiessner</td><td>IC108000</td><td>Seda</td></tr><tr><td>Sutura 6-0</td><td>Ethicon</td><td>EH7814</td><td>Prolene</td></tr><tr><td>Kit de etiquetado de anticuerpos AlexaFluor 546</td><td>Invitrogen</td><td>A20183</td><td></td></tr><tr><td>Kit de etiquetado de anticuerpos AlexaFluor 790</td><td>Invitrogen</td><td>A20189</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo anti-ratón Ly6G (AlexaFluor 647)</td><td>Bioleyenda</td><td>127610</td><td>Clon: 1A8</td></tr><tr><td>Filtro celular (100 &micro; m)</td><td>Corning</td><td>431752</td><td></td></tr><tr><td>Dimetilsulfóxido (DMSO)</td><td>Carl Roth</td><td>7029.1</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Carl Roth</td><td>0911.4</td><td></td></tr><tr><td>Cinnemato de etilo (ECi)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>112372</td><td></td></tr><tr><td>Software de conversión de archivos</td><td>Plano de bits</td><td>Vers. 10.1.0</td><td>Imaris</td></tr><tr><td>Gasa</td><td>Fuhrmann</td><td>10021</td><td></td></tr><tr><td>Goma gellan en polvo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8169</td><td>Phytagel</td></tr><tr><td>Heparina (25.000 IE/5 mL)</td><td>LEO Pharma</td><td>15261203</td><td></td></tr><tr><td>Peróxido de hidrógeno (H2O2, 30%)</td><td>Carl Roth</td><td>8070.2</td><td></td></tr><tr><td>Jeringa inyectable</td><td>B Braun</td><td>9161502S</td><td>Omnican F</td></tr><tr><td>Ketamina (100 mg/ml)</td><td>Bela-Pharma</td><td>402581.00.00</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de microscopio de hoja de luz</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>-</td><td>UltraMicroscope Blaze</td></tr><tr><td>Jeringa Luer lock</td><td>Becton Dickinson</td><td>303172</td><td>BD Plastipak</td></tr><tr><td>Agitador magnético</td><td>VWR</td><td>444-0572</td><td></td></tr><tr><td>Cámara Neo sCMOS (4,2 MP)</td><td>Tecnología Andor</td><td>ZL41 Celda 4.2</td><td></td></tr><tr><td>Objetivo</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-133-625</td><td>MI Plan 1.1x NA 0.1, WD 17.6 mm</td></tr><tr><td>Paraformaldehído (PFA, 4%)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1.00496</td><td>10% de formalina, tamponado neutro</td></tr><tr><td>Placa de Petri</td><td>Greiner Bio-One</td><td>632181</td><td></td></tr><tr><td>Solución salina tamponada con fosfato (PBS)</td><td>Gibco</td><td>14190-094</td><td>Sin MgCl2/CaCl2</td></tr><tr><td>Tubo de polipropileno (15 ml)</td><td>Greiner Bio-One</td><td>188261</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de polipropileno (5 ml)</td><td>Carl Roth</td><td>EKY9.1</td><td>Negro</td></tr><tr><td>Tubo de polipropileno (50 ml)</td><td>Greiner Bio-One</td><td>227261</td><td></td></tr><tr><td>Plato de preparación para canulación de corazón de ratón</td><td>Hugo Sachs Elektronik</td><td>73-4327</td><td>Cánula incluida</td></tr><tr><td>Anticuerpo CD31 anti-ratón purificado</td><td>Becton Dickinson</td><td>53369</td><td>Clon: MEC13.3</td></tr><tr><td>Bomba de rodillos</td><td>Ismatec</td><td>ISM597-230</td><td></td></tr><tr><td>Película de sellado</td><td>Bemis</td><td>Teléfono: PM-996</td><td>Parafilm</td></tr><tr><td>Microscopio estereoscópico</td><td>Leica</td><td>S6D</td><td></td></tr><tr><td>Rotador de tubos</td><td>Heidolfo</td><td>Polymax 1040</td><td></td></tr><tr><td>Láser de luz blanca</td><td>Fotónica NKT</td><td>SuperK extremo</td><td>200 mW, 480&ndash; 2400 nm</td></tr><tr><td>WT cepa de ratón</td><td>Laboratorios Janvier</td><td>-</td><td>C57BL/6JRj</td></tr><tr><td>Xilacina (2%)</td><td>Ceva Tiergesundheit</td><td>6324464.00.00</td><td></td></tr></tbody></table>

análisis 3d simultáneo del daño cardíaco y la respuesta inmune en el infarto agudo de miocardio reperfundido mediante microscopía de fluorescencia de hoja de luz

Simultaneous 3D Analysis of Cardiac Damage and Immune Response in Reperfused Acute Myocardial Infarction Using Light Sheet Fluorescence Microscopy

El enfoque presentado utilizando microscopía de fluorescencia de hoja de luz (LSFM) permite el análisis simultáneo de AAR, lesión endotelial e infiltración de neutrófilos después de repAMI. La Figura 1A ilustra la tinción de anticuerpos intravital y ex vivo de ratones C57BL / 6J 24 h después de la inducción de repAMI. Los anticuerpos para la tinción de la lesión endotelial cardíaca (anti-CD31 marcado con AlexaFluor 790) y la infiltración de neutrófilos (anti-Ly6G marcado con AlexaFl...

Análisis 3D simultáneo del daño cardíaco y la respuesta inmune en el infarto agudo de miocardio reperfundido mediante microscopía de fluorescencia de hoja de luz

Complex cellular interactions determine functional and structural tissue remodeling during reperfused acute myocardial infarction (repAMI). These ...

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Research

Investigación

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Medicine

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Se presenta una forma de obtener nuevos conocimientos sobre la complejidad de la respuesta inflamatoria cerebral. Describimos protocolos basados en inmunofluorescencia seguidos de análisis confocal tridimensional para investigar el patrón de coexpresión de marcadores fenotípicos de microglía/macrófagos en un modelo murino de isquemia focal.

Análisis confocal tridimensional de marcadores microglía / macrófagos de polarización en Experimental Brain Injury

Este protocolo describe un nuevo método para la comparación 3D de tejido de miocardio de todo el corazón con MRI. Esto está diseñado para la evaluación precisa de inyecciones intramiocárdicas en la zona fronteriza del infarto de un modelo porcino crónica de un infarto de miocardio.

El análisis del tejido de miocardio entero en 3D del corazón

En el corazón, los eventos moleculares coordinan la función eléctrica y contráctil del órgano. Un conjunto de técnicas de microscopía de fluorescencia de campo locales que aquí se presenta permite el registro de las variables celulares en los corazones intactos. La identificación de los mecanismos que definen la función cardíaca es fundamental para entender cómo el corazón trabaja en situaciones patológicas.

El campo local microscopía de fluorescencia: Imágenes señales celulares en los corazones intactos

En este sentido, describimos un microscopio de luz para visualizar el infiltrado de leucocitos CD45 + cardíaco en un modelo murino de miocarditis fulminante aséptica, que es inducido por el tratamiento de la toxina diftérica intratraqueal de ratones CD11c.DTR.

Visualización Cuantitativa del Infiltrado de Leucocitos en un Modelo Murino de Miocarditis Fulminante por Microscopía de Hoja Ligera

Este estudio utiliza una técnica de microscopía (LSFM) de hoja de luz fluorescencia iluminación doble cara combinada con la compensación óptica para estudiar el corazón murino.

Hoja de luz fluorescencia microscopía para el estudio del corazón murino

La proliferación de cardiomiocitos después de una lesión es un proceso dinámico que requiere una sinfonía de señales extracelulares de poblaciones de células no miocitos. Utilizando el trazado de linaje, la CLARIDAD pasiva y las técnicas tridimensionales de microscopía confocal de montaje completo, podemos analizar la influencia de una variedad de tipos de células en la reparación y regeneración cardíaca.

Captura de la respuesta de la lesión cardíaca de las poblaciones celulares objetivo a través de imágenes tridimensionales del corazón despejado

Un método refinado de claro del tejido fue desarrollado y aplicado al corazón adulto del ratón. Este método fue diseñado para despejar el tejido cardiaco denso, autofluorescente, mientras que mantiene la fluorescencia etiquetada del fibroblasto atribuida a una estrategia genética del reportero.

Refinado CLARIDAD Basada En La Limpieza De Tejidos Para La Organización De Fibroblastos TridimensionalEs En Corazones De Ratón Sanos Y Lesionados

Presentamos un método para la reconstrucción mesoscópica de todo el corazón del ratón mediante la combinación de nuevos avances en la transformación de tejidos y la tinción con el desarrollo de un microscopio de hoja de luz escaneado axialmente.

Imágenes ópticas mesoscópicas del corazón de todo el ratón

Este protocolo presenta una colección de datos geométricos de sarcómeros, calcio y macroscópicos de una trabécula cardíaca que se contrae activamente ex vivo. Estas mediciones simultáneas son posibles gracias a la integración de tres modalidades de imagen.

Imágenes tomográficas simultáneas de campo brillante, fluorescencia y coherencia óptica de trabéculas cardíacas contacciones ex vivo

El protocolo utiliza microscopía avanzada de lámina de luz junto con métodos de limpieza de tejidos adaptados para investigar estructuras cardíacas intrincadas en corazones de roedores, con un gran potencial para la comprensión de la morfogénesis y la remodelación cardíaca.

Imágenes con lámina de luz para revelar la estructura cardíaca en corazones de roedores

El presente ensayo de cloruro de 2,3,5-Trifeniltetrazolio (TTC) introduce un protocolo de tinción TTC refinado que permite el análisis de lesiones miocárdicas a resolución microscópica, produciendo imágenes de alta calidad que permiten una evaluación precisa y fiable del tamaño del infarto y la viabilidad del cardiomiocito a nivel celular.

Un ensayo microscópico de cloruro de 2,3,5-trifeniltetrazolio para un análisis preciso y fiable de la lesión miocárdica

Aprende a analizar el daño cardíaco y la respuesta inmune en infarto agudo de miocardio mediante microscopía de hoja de luz en modelo murino. Este método permite la localización 3D simultánea de tejido dañado y células inmunes.

Análisis 3D simultáneo del daño cardíaco y la respuesta inmune en el infarto agudo de miocardio reperfundido mediante microscopía de fluorescencia de hoja de luz (Video) | JoVE Journal

Análisis 3D simultáneo del daño cardíaco y la respuesta inmune en el infarto agudo de miocardio reperfundido mediante microscopía de fluorescencia de hoja de luz

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