Name: Visualización precisa de los receptores de insulina A y B en el cerebro murino con un ensayo de hibridación in situ de ARN (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 34 s
Description: Aprende a mapear los isoformas de receptores de insulina IR-A e IR-B en el plexo coroideo murino mediante hibridación in situ dúplex. Esta técnica de alta resolución revela patrones de expresión específicos y abre vías para terapias neurológicas dirigidas.

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<ol><li>Häring, H. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+insulin+receptor%3A+signalling+mechanism+and+contribution+to+the+pathogenesis+of+insulin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetologia%22%5BJournal%5D)">The insulin receptor: signalling mechanism and contribution to the pathogenesis of insulin resistance.</a> Diabetologia. 34 (12), 848-861 (1991).</li>
<li>Benecke, H., Flier, J. S., Moller, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternatively+spliced+variants+of+the+insulin+receptor+protein%3A+expression+in+normal+and+diabetic+human+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Alternatively spliced variants of the insulin receptor protein: expression in normal and diabetic human tissues.</a> J Clin Invest. 89 (6), 2066-2070 (1992).</li>
<li>Vella, V., Malaguarnera, R., Nicolosi, M. L., Morrione, A., Belfiore, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin%2FIGF+signalling+and+discoidin+domain+receptors%3A+an+emerging+functional+connection%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta+Mol+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Insulin/IGF signalling and discoidin domain receptors: an emerging functional connection.</a> Biochim Biophys Acta Mol Cell Res. 1866 (11), 118522(2019).</li>
<li>Galal, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+receptor+isoforms+and+insulin+growth+factor-like+receptors%3A+implications+in+cell+signaling%2C+carcinogenesis%2C+and+chemoresistance%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Insulin receptor isoforms and insulin growth factor-like receptors: implications in cell signaling, carcinogenesis, and chemoresistance.</a> Int J Mol Sci. 24 (19), 15006(2023).</li>
<li>Starks, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+resistance+is+associated+with+higher+cerebrospinal+fluid+tau+levels+in+asymptomatic+APOE%C9%9B4+carriers%5BTitle%5D)+AND+%22J+Alzheimers+Dis%22%5BJournal%5D)">Insulin resistance is associated with higher cerebrospinal fluid tau levels in asymptomatic APOEɛ4 carriers.</a> J Alzheimers Dis. 46 (2), 525-533 (2015).</li>
<li>Belfiore, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+receptor+isoforms+in+physiology+and+disease%3A+an+updated+view%5BTitle%5D)+AND+%22Endocr+Rev%22%5BJournal%5D)">Insulin receptor isoforms in physiology and disease: an updated view.</a> Endocr Rev. 38 (5), 379-431 (2017).</li>
<li>Wang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNAscope%3A+a+novel+in+situ+RNA+analysis+platform+for+formalin-fixed%2C+paraffin-embedded+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Diagn%22%5BJournal%5D)">RNAscope: a novel in situ RNA analysis platform for formalin-fixed, paraffin-embedded tissues.</a> J Mol Diagn. 14 (1), 22-29 (2012).</li>
<li>BaseScope assays. , Advanced Cell Diagnostics, Inc. 
 <a target="_blank" href="https://acdbio.com/basescope-duplex-assay">https://acdbio.com/basescope-duplex-assay</a> (2025).</li>
<li>Dani, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cellular+and+spatial+map+of+the+choroid+plexus+across+brain+ventricles+and+ages%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A cellular and spatial map of the choroid plexus across brain ventricles and ages.</a> Cell. 184 (11), 3056-3074.e21 (2021).</li>
<li>Schulingkamp, R. J., Pagano, T. C., Hung, D., Raffa, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+receptors+and+insulin+action+in+the+brain%3A+review+and+clinical+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Biobehav+Rev%22%5BJournal%5D)">Insulin receptors and insulin action in the brain: review and clinical implications.</a> Neurosci Biobehav Rev. 24 (8), 855-872 (2000).</li>
<li>Milstein, J. L., Ferris, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+brain+as+an+insulin-sensitive+metabolic+organ%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Metab%22%5BJournal%5D)">The brain as an insulin-sensitive metabolic organ.</a> Mol Metab. 52, 101234(2021).</li>
<li>Moruzzi, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-specific+expression+of+insulin+receptor+isoforms+in+obesity%2Ftype+2+diabetes+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Tissue-specific expression of insulin receptor isoforms in obesity/type 2 diabetes mouse models.</a> J Cell Mol Med. 25 (10), 4800-4813 (2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Agua de amonio</td><td>Ciencia del microscopio electrónico&nbsp;</td><td>26754-4A</td><td></td></tr><tr><td>Kit de reactivos de detección BaseScope Dulplex</td><td>Biografía de ACD</td><td>323810</td><td></td></tr><tr><td>Sonda de control positivo dúplex BaseScope Dulplex - Ratón (mm)-C1-PPIB-1ZZ/C2-Polr2A-1ZZ</td><td>Biografía de ACD</td><td>700121</td><td></td></tr><tr><td>Sonda de control positivo dúplex BaseScope Dulplex-C1-DapB-1ZZ/C2-DapB-1ZZ</td><td>Biografía de ACD</td><td>700141</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxilina I de Gill</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>GHS132-1L</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo secundario de cabra anti-Rabbit IgG (H + L) altamente adsorbido de forma cruzada, Alexa Fluor Plus 488</td><td>Invitrogen</td><td>Referencia A32731</td><td></td></tr><tr><td>HORNO HybEZ, Bandeja, Rejilla y Bandeja de Lavado</td><td>Biografía de ACD</td><td>321721, 310012, 321716, 321717</td><td></td></tr><tr><td>Lápiz de barrera hidrofóbica ImmEdge</td><td>Laboratorio de vectores</td><td>H-4000</td><td></td></tr><tr><td>Sondas de isoforma A y B de INSR: BA-Mm-Insr-tv1-E10E11, BA-Mm-Insr-tv2-E11E12-C2</td><td>Biografía de ACD</td><td>717411, 717421-C2</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo receptor de insulina</td><td>Señalización celular&nbsp;</td><td>23413</td><td></td></tr><tr><td>RNAscope 10x Objetivo Retrival</td><td>Biografía de ACD</td><td>322000</td><td></td></tr><tr><td>Peróxido de hidrógeno RNAscope, proteasa Plus</td><td>Biografía de ACD</td><td>322381</td><td></td></tr><tr><td>Citrato de sodio y solución salina (SSC) 20x</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1325-1</td><td></td></tr><tr><td>Toboganes SuperFrost Plus</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-18</td><td></td></tr><tr><td>Medio de montaje permanente VectaMount</td><td>Laboratorio de vectores</td><td>H-5000</td><td></td></tr></tbody></table>

visualización precisa de los receptores de insulina a y b en el cerebro murino con un ensayo de hibridación in situ de arn

Precise Visualization of Insulin Receptors A and B in Murine Brain with an RNA In Situ Hybridization Assay

El receptor de insulina (IR) es un receptor transmembrana de tirosina quinasa compuesto por dos subunidades α extracelulares y dos subunidades β transmembrana, formando un heterotetrámero funcional. Las α subunidades median la unión a la insulina, mientras que las β subunidades poseen una actividad intrínseca de tirosina quinasa que inicia la señalización aguas abajo. El empalme alternativo del ARNm IR del exón 11 genera dos isoformas del IR, IR-A e IR-B. Como tal, IR-B incluye un segment...

Visualización precisa de los receptores de insulina A y B en el cerebro murino con un ensayo de hibridación in situ de ARN

Insulin receptors (IRs) are widely expressed across all tissues and all cell types. It exists in two functionally distinct isoforms -- IR-A and IR-B -- ...

precise-visualization-insulin-receptors-b-murine-brain-with-an-rna

Research

Investigación

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociencia

Doble fluorescencia In situ La hibridación en las secciones del cerebro fresco

Este protocolo se utiliza con éxito para detectar cuantitativamente los niveles y los patrones espaciales de la expresión del ARNm de múltiples tipos de tejidos a través de las especies de vertebrados. El método puede detectar transcripciones baja abundancia y permite el tratamiento de cientos de diapositivas simultáneamente. Se presenta el protocolo de uso de perfiles de expresión de la formación del cerebro del embrión aviar como ejemplo.

Radioactivo In situ La hibridación para la detección de diversos patrones de expresión génica en el tejido

Este video demuestra la detección de la síntesis de ARN del receptor de serotonina utilizando sondas de oligonucleótidos en tejido cerebral de rata afectado por el síndrome de serotonina. El protocolo incluye pretratamiento de tejidos, hibridación de sondas y detección enzimática para visualizar y cuantificar la expresión del ARN del receptor de serotonina bajo un microscopio.

Hibridación in situ mediante sondas de oligonucleótidos para estudiar la expresión de ARN en secciones de cerebro de rata

Fuente: Baleriola, J., et. al., Detección de ARNm localizados axonalmente en secciones cerebrales mediante hibridación in situ de alta resolución.  J. Vis. Exp. (2015)Este video demuestra la detección de ARNm dentro de axones colinérgicos en cortes fijos de hipocampo de ratón utilizando hibridación fluorescente in situ y tinción de anticuerpos. La microscopía de fluorescencia revela la localización espacial de los ARNm marcados con sonda y la colina acetiltransferasa en las neuronas...

Inmunotinción de neuronas en cortes de cerebro de ratón después de la hibridación fluorescente in situ

situ (ISH) &gt; 'jove_content permite la visualización de ARN en células y tejidos. Aquí mostramos cómo la combinación de RNAscope ISH con inmunohistoquímica o colorantes histológicos se puede utilizar con éxito para detectar ARNm localizados en axones en secciones de cerebros humanos y de ratones.

La detección de ARNm axón localizado en las secciones cerebrales Uso de alta resolución<em&gt; In Situ</em&gt; La hibridación

La localización de la expresión génica a tipos específicos de células puede ser un desafío debido a la falta de anticuerpos específicos. En este trabajo describimos un protocolo para la detección simultánea de la triple expresión génica mediante la combinación de hibridación in situ de ARN de doble fluorescencia con inmunotinción.

La combinación de doble fluorescencia<em&gt; In Situ</em&gt; La hibridación con Immunolabelling para la detección de la expresión de tres genes en las secciones de cerebro de ratón

Se describe un protocolo en situ hibridación (ISH) que utiliza oligonucleótidos antisentidos corto para detectar patrones de splicing alternativo del pre-mRNA en secciones de cerebro de ratón.

Análisis cuantitativo de empalmes alternativos del Pre-mRNA en secciones de cerebro de ratón usando análisis de ARN In Situ hibridación

Las nuevas técnicas de limpieza de tejidos compatibles con la inmunomancha, como la imagen 3D definitiva de órganos con disolventes, permiten la visualización 3D de la infección cerebral del virus de la rabia y su complejo entorno celular. Las rebanadas gruesas de tejido cerebral con etiqueta de anticuerpos se hacen ópticamente transparentes para aumentar la profundidad de la imagen y permitir el análisis 3D mediante microscopía de escaneo láser confocal.

Imágenes 3D de alta resolución de la infección por el virus de la rabia en el tejido cerebral con disolventes

Aquí, presentamos un protocolo que utiliza colorantes de infrarrojo cercano junto con inmunohistoquímica y escaneo de alta resolución para analizar las proteínas en las regiones cerebrales.

Uso de fluorescencia de infrarrojo cercano y escaneo de alta resolución para medir la expresión de proteína en el cerebro de roedores

Este protocolo describe un método para combinar la hibridación fluorescente in situ (FISH) y la inmunohistoquímica de fluorescencia (IHC) en secciones de cerebro de ratón frescas congeladas y fijas, con el objetivo de lograr una señal de FISH y IHC de fluorescencia multimarca. IHQ se dirigió a proteínas citoplasmáticas y unidas a la membrana.

Combinación de hibridación in situ de fluorescencia múltiple con inmunohistoquímica fluorescente en secciones de cerebro de ratón frescas, congeladas o fijas

Se empleó la hibridación multiplex in situ (ISH) para visualizar simultáneamente las transcripciones de dos receptores acoplados a la proteína G y un factor de transcripción en todo el complejo ganglionar vago del ratón adulto. Este protocolo podría utilizarse para generar mapas precisos de los perfiles transcripcionales de las neuronas aferentes vagales.

Detección de la expresión del receptor acoplado a la proteína G en neuronas aferentes vagas de ratón mediante hibridación multiplex in situ

Aprende a mapear los isoformas de receptores de insulina IR-A e IR-B en el plexo coroideo murino mediante hibridación in situ dúplex. Esta técnica de alta resolución revela patrones de expresión específicos y abre vías para terapias neurológicas dirigidas.

Visualización precisa de los receptores de insulina A y B en el cerebro murino con un ensayo de hibridación in situ de ARN

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