Linfodenectomía renal bilateral murina

Estudiamos el tráfico de células inmunitarias desde el ganglio linfático renal hacia el riñón y del antígeno renal hacia el ganglio linfático que drena. Nuestro enfoque quirúrgico permite la ventaja única de que podemos alterar selectivamente los ganglios linfáticos renales mientras dejamos intactos todos los demás ganglios dentro de un modelo de supervivencia a largo plazo bien tolerado. Ahora que este modelo ha sido desarrollado, podemos explorar las contribuciones de las respuestas inmunitarias y ganglios linfáticos renales, y cómo la extirpación de estos ganglios contribuye a la lesión renal relacionada con el sistema inmunológico.

Para empezar, coloca al animal anestesiado en la mesa de operaciones y aplica la pomada. Utiliza cinta para asegurar el brazo izquierdo del animal en una dirección superior y la cola en una dirección inferior para crear una postura relajada pero alargada. Afeita el pelaje y desinfecta la zona quirúrgica tres veces.

Tras confirmar la profundidad de la anestesia con un pellizco en el dedo del pie, realiza una incisión oblicua de un centímetro a través de la piel justo debajo del bazo, aproximadamente un centímetro por debajo de la última costilla. Mediante disección contundente, separa la piel de la pared abdominal y torácica e identifica el bazo dentro del abdomen. Luego, realiza una incisión de un centímetro a través de la musculatura de la pared abdominal, justo por debajo del bazo, para entrar en la cavidad peritoneal.

Identifica el riñón izquierdo como un órgano liso situado a lo largo de la pared posterior abdominal, justo debajo del bazo. Utilizando dos pinzas inclinadas, disecciona de forma directa detrás del riñón izquierdo para acceder al retroperitoneo y refleja suavemente el riñón izquierdo en dirección anteromedial. Localiza la almohadilla de tejido adiposo que rodea el ganglio linfático renal izquierdo, que se encuentra detrás del riñón y por encima de los vasos renales.

Identificar y evitar la glándula suprarrenal situada superiormente, la aorta en la parte posterior y la cisterna quil anteromedialmente. Utilizando pinzas de punta fina, disecciona de forma directa alrededor de la cápsula ganglio linfático para separarla de los vasos adyacentes, proporcionando una contratensión suave con pinzas anguladas. Utiliza pinzas rectas de punta fina para retraer el ganglio linfático superiormente.

Luego usa tijeras de punta fina para cortar bruscamente los accesorios posteromediales. Examina la zona para confirmar la hemostasia. A continuación, devuelvo el riñón a su posición anatómica normal.

Cierra la pared abdominal y luego la piel usando una sutura de polipropileno monofilamento 6-0 en un punto corriendo. Aplica pegamento quirúrgico estéril para sellar la herida. Opcionalmente, para mejorar la identificación de los ganglios linfáticos renales, inyectar entre 10 y 20 microlitros de colorante azul Evans estéril y filtrado al 5% en PBS en ambas almohadillas traseras antes de la linfadenectomía renal.

En los cinco minutos posteriores a la inyección, el contraste llega a los ganglios linfáticos renales mediante drenaje a lo largo del tracto ilíaco linfático. Reposiciona al animal en la posición lateral izquierda del decúbito con el lado izquierdo hacia abajo. Utiliza cinta para asegurar el brazo derecho del animal en una dirección superior y la cola en una dirección inferior para mantener una postura relajada pero alargada.

Ahora, haz una incisión oblicua de un centímetro justo debajo de la última costilla, que estará un poco más arriba que en el lado izquierdo. Mediante una disección roma, separa la piel de la pared abdominal y torácica. Luego realiza una incisión de un centímetro a través de la musculatura de la pared abdominal para acceder a la cavidad peritoneal.

Identifica el riñón derecho, que es un órgano liso situado a lo largo de la pared posterior abdominal y justo debajo del hígado. Utilizando dos pinzas angulares, disecciona de forma directa detrás del riñón derecho para acceder al espacio retroperitoneal y reflejar el riñón derecho en dirección anteromedial. Identifica la almohadilla de tejido adiposo que rodea el ganglio linfático renal derecho, que se encuentra detrás del riñón y por encima de los vasos renales.

Identificar y evitar la glándula suprarrenal situada por encima del ganglio linfático. Ahora, usando pinzas de punta fina, disecciona de forma directa alrededor de la cápsula del ganglio linfático para separarla de los vasos cercanos mientras aplicas una suave contratracción con pinzas anguladas. Luego, con pinzas rectas de punta fina, tira de los ganglios linfáticos hacia arriba y corta bruscamente los accesorios posteromediales con tijeras de punta fina.

Inspecciona la zona para asegurar la hemostasia. Finalmente, devuelve el riñón derecho a su posición anatómica. Cierra la pared abdominal y la piel en dos capas usando una sutura de polipropileno monofilamento 6-0 en un patrón de corrido y aplica pegamento quirúrgico estéril sobre el lugar de la incisión.

La citometría de flujo confirmó la extracción exitosa de ganglios linfáticos en las cinco muestras de linfadenectomía renal izquierda y cinco derecha, cada una mostrando más del 50% de células vivas positivas para CD45, frente a menos del 2% en controles viscerales adiposos. La cuantificación de células CD45-positivas mostró una diferencia altamente significativa entre las muestras de linfadenectomía renal izquierda y derecha en comparación con el tejido adiposo visceral, sin diferencias significativas entre los lados izquierdo y derecho.