Estudio comparativo sobre el contenido de polisacáridos y las actividades antioxidantes de Hippophae rhamnoides subsp. sinensis e Hippophae gyantsensis

Este estudio compara el contenido de polisacáridos y la actividad antioxidante entre Hippophae rhamnoides sub. sinensis y Hippophae gyantsensis para dilucidar sus diferencias. El estudio es metodológicamente sólido y aborda una brecha en la literatura con respecto a las diferencias específicas de la especie en las características de los polisacáridos.

Los hallazgos de este estudio son significativos para la evaluación de la calidad y las posibles aplicaciones farmacéuticas. Para comenzar, transfiera cinco gramos de polvo de muestra de espino amarillo a un matraz de fondo redondo de 250 mililitros. Luego agregue 50 mililitros de etanol anhidro y sumérjalo a temperatura ambiente de 25 grados centígrados durante 24 horas.

Al día siguiente, filtre el polvo de muestra empapado con un embudo Buchner para obtener el residuo del filtro. Lave el residuo del filtro tres veces con 50 mililitros de agua desionizada. Ahora, transfiera el residuo del filtro desgrasado a un matraz seco de fondo redondo de 250 mililitros.

Agregue 150 mililitros de agua desionizada en una proporción de sólido a líquido de uno a 30 gramos por mililitro. Realice la extracción del reflujo en un baño de agua a 80 grados centígrados durante dos horas dos veces. A continuación, concentre el extracto utilizando un evaporador rotativo.

Guarde la solución concentrada en un refrigerador a cuatro grados centígrados para su uso posterior. A continuación, agregue el reactivo Sevag a la solución de polisacárido crudo en una proporción de volumen de uno a cuatro y colóquelo en un agitador magnético. Luego transfiera la mezcla a un tubo de centrífuga de 50 mililitros.

Centrifugar la suspensión a 4.000 g durante 15 minutos y recoger el sobrenadante. Para concentrar el extracto de polisacáridos después de la eliminación de proteínas, agregue etanol anhidro en una proporción de volumen de uno a tres para precipitar polisacáridos. Coloque la mezcla a cuatro grados centígrados durante la noche.

Al día siguiente, retire la capa superior de etanol. Transfiera la mezcla a un tubo de centrífuga de 50 mililitros y centrifugue como antes. Liofilizar el precipitado para obtener polisacáridos totales.

Transfiera tres gramos de fenol a un matraz aforado marrón. Agregue 50 mililitros de agua desionizada para disolver el fenol. Agite hasta que esté homogéneo, luego etiquete y guarde el matraz para su uso posterior.

A continuación, transfiera 10 miligramos de glucosa anhidra a un matraz aforado de 10 mililitros. Agregue agua desionizada y agite bien la mezcla. Luego etiquete el matraz.

Para la preparación de la solución de la muestra de prueba, pesar cinco miligramos de polisacáridos de espino amarillo liofilizados en matraces volumétricos. Agregue agua desionizada para llevar cada uno a un volumen final de 50 mililitros. Sonicar cada mezcla durante 20 minutos hasta que se disuelva por completo.

Diluya la solución de glucosa estándar con agua desionizada a 0,1 miligramos por mililitro. Luego, con una micropipeta, transfiera 200, 300, 400, 500, 600 y 700 microlitros en seis tubos de ensayo limpios. Agregue agua pura para llevar cada uno a un volumen total de un mililitro y mezcle suavemente cada solución para asegurar una dilución uniforme.

Agregue un mililitro de solución de fenol al 6% y cinco mililitros de ácido sulfúrico a cada tubo de ensayo y mezcle bien. Transfiera las muestras a cubetas. Utilice agua pura en blanco y mida la absorbancia a 490 nanómetros con un espectrofotómetro visible UV en tres réplicas.

Para la prueba de precisión, prepare la solución de prueba. Realizar colorimetría de ácido fenol-sulfúrico. Determine la absorbancia y repita seis veces para calcular la desviación estándar relativa.

Para la prueba de estabilidad, prepare la solución de prueba. Realice la colorimetría a cero, dos, cuatro, seis, ocho y 10 horas después de la preparación. Determine la absorbancia en los puntos de tiempo antes mencionados para calcular la desviación estándar relativa.

Para la prueba de repetibilidad, prepare seis réplicas paralelas de la muestra. Realice la colorimetría del ácido sulfúrico fenol y determine la absorbancia siguiendo el procedimiento establecido. Para realizar la prueba de recuperación, prepare nueve réplicas paralelas de la solución de prueba.

Agregue volúmenes de referencia equivalentes al 80, 100 y 120% del contenido total de polisacáridos. Luego realice la colorimetría de ácido fenol-sulfúrico. Para la determinación del contenido, prepare la solución de ejemplo.

Realizar colorimetría de ácido fenol-sulfúrico siguiendo el método establecido. Luego determine la absorbancia. Pesar 2,7 miligramos de DPPH en un matraz aforado vacío de 50 mililitros.

Agregue 50 mililitros de etanol anhidro para disolver el DPPH y prepare una solución madre. A continuación, disuelva cinco miligramos de vitamina C en 10 mililitros de agua desionizada para preparar una solución de 0,5 miligramos por mililitro. Diluya esta solución sucesivamente para preparar soluciones de prueba de vitamina C.

Ahora disuelva cinco miligramos de cada muestra de polisacárido de espino amarillo en 10 mililitros de agua desionizada para preparar una solución de 0,5 miligramos por mililitro. Diluya estas soluciones sucesivamente para obtener concentraciones de prueba. Usando la solución DPPH como sustrato, prepare los grupos de prueba en una placa de 96 pocillos.

Agregue 150 microlitros de agua y 50 microlitros de DPPH para el grupo de control negativo, A0. Agregue 150 microlitros de la muestra o solución de vitamina C y 50 microlitros de DPPH para el grupo de muestra A1. Para el grupo de control de muestras A2, agregue 150 microlitros de muestra y 50 microlitros de etanol anhidro. Deje que la reacción continúe en la oscuridad durante 30 minutos. Luego mida la absorbancia a 517 nanómetros.

La curva estándar de glucosa mostró una fuerte relación lineal entre absorbancia y concentración en el rango de 0,02 a 0,07 miligramos por mililitro. El rendimiento promedio de polisacáridos de Hippophae gyantsensis fue significativamente mayor que el de Hippophae rhamnoides subespecie sinensis. La prueba de precisión demostró una variación mínima en la absorbancia en seis mediciones, y una RSD del 0,21%, lo que indica una alta precisión del instrumento.

La prueba de estabilidad mostró que los valores de absorbancia se mantuvieron constantes durante un período de 10 horas, con un valor de RSD del 0,45% que confirma la estabilidad de la solución de muestra. La prueba de repetibilidad produjo valores de absorbancia consistentes en seis réplicas con RSD del 0,5%, validando la repetibilidad del método. El experimento de recuperación para el contenido de glucosa arrojó una tasa de recuperación promedio del 99,18%, lo que confirma la precisión del método.

El contenido promedio de polisacáridos de Hippophae rhamnoides subespecie sinensis fue significativamente mayor que el de Hippophae gyantsensis. Hippophae gyantsensis exhibió una actividad antioxidante ligeramente mayor que Hippophae rhamnoides subespecie sinensis en todas las concentraciones probadas. A 0,5 miligramos por mililitro, la tasa de eliminación de DPPH de Hippophae gyantsensis alcanzó el 81,93%, mientras que la subespecie sinensis de Hippophae rhamnoides alcanzó el 75,17%