Name: Producción y uso de moldes de agarosa personalizables para cultivo de folículos ováricos de ratón sin andamios (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-24T13:10:00.000+00:00
Duration: 9 min 50 s
Description: Aprende a producir moldes de agarosa personalizables para cultivo de folículos ováricos de ratón sin andamios. Este método mejora el crecimiento folicular y la calidad ovocitaria en biología reproductiva.

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<table><tbody><tr><td><fuerte>Materiales y Químicos</fuerte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Tubos de centrifugación de poliestireno de 50 mL</td><td>Globe Scientific</td><td>941-11017-CS</td><td></td></tr><tr><td>Tubos microcentrífugas de 1,5 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>MCT-150</td><td>Para congelar y almacenar medios</td></tr><tr><td>Plato de 100 mm, sin tratar</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-757-100D&nbsp;</td><td>Para fabricar y almacenar micromoldes de agarosa</td></tr><tr><td>100% etanol</td><td>Mercedes Scientific</td><td>1200</td><td>Procesamiento de tejidos</td></tr><tr><td>1000 y micro; L&nbsp; Puntas de pipeta, baja retención</td><td>MIDSCI</td><td>PR-1000BK</td><td>Consejos culturales&nbsp;</td></tr><tr><td>200 y micro; L&nbsp; Puntas de pipeta, baja retención</td><td>MIDSCI</td><td>PR-200BK</td><td>Consejos culturales&nbsp;</td></tr><tr><td>Placa de 24 pozos</td><td>Corning</td><td>353047</td><td>Cultura</td></tr><tr><td>Antenas parabólicas de 35 mm</td><td>Halcón</td><td>351008</td><td>Aislar ovarios e incubar en medios enyzmáticos</td></tr><tr><td>95% etanol</td><td>Mercedes Scientific</td><td>1210</td><td>Procesamiento de tejidos</td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Hoefer</td><td>GR140</td><td>Micromoldes</td></tr><tr><td>Aceite mineral BioXtra, aceite ligero, adecuado para el cultivo celular de embriones de ratón</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5310-500ML</td><td>Utilizado como agente desmoldeante biocompatible</td></tr><tr><td>Albúmina sérica bovina &nbsp;</td><td>MP Biomedicina</td><td>103700</td><td>Medios de Crecimiento</td></tr><tr><td>Plumeras de limpieza, 10 oz., paquete de 6</td><td>Office Depot&nbsp;</td><td>110284</td><td>Aire comprimido</td></tr><tr><td>Resina V4 transparente 1 L</td><td>Formlabs, Inc</td><td>RS-F2-GPCL-04</td><td>Resina para impresión 3D</td></tr><tr><td>Vaso de precipitados de plástico reutilizable Corning de 100 mL, polipropileno graduado</td><td>Corning</td><td>1000P-100</td><td>Vaso para mezclar componentes de silicona y nbsp;</td></tr><tr><td>DNAse I</td><td>Qiagen</td><td>79254</td><td>Medios enzimáticos</td></tr><tr><td>Ecoflex 00-45 Casi despejado</td><td>Smooth-On, Inc</td><td>B09M8Y9PTV</td><td>Material de silicona</td></tr><tr><td>F-12 + GlutaMAX</td><td>Gibco</td><td>31765-035</td><td>Medios de Crecimiento</td></tr><tr><td>Fetino bovino fetal</td><td>Sigma</td><td>F-3385</td><td>Medios de Crecimiento</td></tr><tr><td>Suero fetal bovino (FBS)</td><td>Suero Pico</td><td>PS-FB2</td><td>Disección de medios, medios enzimáticos, etc; Medios de Mantenimiento y Medios Medios de Maduración</td></tr><tr><td>Fisherbrand&nbsp; Bolsas de esterilización</td><td>Fisher Scientific</td><td>01-812-50&nbsp;</td><td>Bolsas de esterilización</td></tr><tr><td>Hormona folículo-estimulante (FSH)</td><td>EMD Serono, Inc.</td><td>Solo Gonal-F Rx&nbsp;</td><td>Medios de Crecimiento y Medios de Crecimiento Medios de Maduración</td></tr><tr><td>Gibco y nbsp; DPBS, calcio, magnesio</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-040-182&nbsp;</td><td>Solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco</td></tr><tr><td>Gonadotropina coriónica humana (hCG)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C1063-1VL</td><td>Medios de Maduración</td></tr><tr><td>Insulina-transferrina-selenio (ITS)</td><td>ThermoFisher</td><td>41400045</td><td>Medios de Crecimiento</td></tr><tr><td>Sondas moleculares de Invitrogen Rhodamine Phalloidin</td><td>Fisher Scientific</td><td>R415</td><td>Mancha del citoesqueleto de huevo</td></tr><tr><td>Platos de FIV</td><td>Termo Científica</td><td>150260</td><td>Aislar, seleccionar y preequilibrar los folículos</td></tr><tr><td>Leibovit'z 15 (L15)</td><td>Gibco</td><td>11415-064</td><td>Disección de medios y medios de disección Medios enzimáticos</td></tr><tr><td>Liberase</td><td>Sigma Aldrich</td><td>5401119001</td><td>Medios enzimáticos</td></tr><tr><td>¿MEM? + GlutaMAX</td><td>Gibco</td><td>32561-037</td><td>Medios de Mantenimiento, &nbsp; Medios de Crecimiento y Medios de Crecimiento Medios de Maduración</td></tr><tr><td>Factor de crecimiento epidérmico del ratón (EGF)</td><td>BD Biociencias</td><td>354010</td><td>Medios de Maduración</td></tr><tr><td>Desecador de diseño clásico de policarbonato transparente Nalgene</td><td>Termo Científica</td><td>5311-0250</td><td>Desecador de vacío &nbsp;</td></tr><tr><td>Parafina</td><td>Fisher Scientific</td><td>83-30</td><td>Procesamiento de tejidos y Incrustación</td></tr><tr><td>Penicilina-estreptomicina</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td>Medios de disección, medios enzimáticos y Medios de Mantenimiento</td></tr><tr><td>Puntas para stripper</td><td>Origio</td><td>MXL3-200</td><td>Cultura</td></tr><tr><td>Medio de montaje antifade VECTASHIELD PLUS con DAPI</td><td>Laboratorios Vector</td><td>H-2000</td><td>Tinción del núcleo del huevo</td></tr><tr><td>Xileno</td><td>Mercedes Scientific</td><td>9840</td><td>Procesamiento de tejidos</td></tr><tr><td>&alpha;-Tubulina (11H10) Rabbit mAb (Alexa Fluor 488 Conjugado)</td><td>Tecnología de señalización celular</td><td>5063S</td><td>Tinción de huevo con tubulina</td></tr><tr><td><fuerte>Equipo</fuerte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Plataforma de Construcción 2</td><td>Formlabs, Inc</td><td>BP-F3-02-01&nbsp;</td><td>Componente de impresora 3D</td></tr><tr><td>Dino-Lite Edge AF4915ZTL, USB 2.0</td><td>Dino-Lite</td><td>AF4915ZTL</td><td>Imager para configuración en timelapse</td></tr><tr><td>Formulario 3 Tanque de resina V2.1&nbsp;</td><td>Formlabs, Inc</td><td>RT-F3-02-01</td><td>Componente de impresora 3D</td></tr><tr><td>Impresora 3D Formulario 3B+</td><td>Formlabs, Inc</td><td>F3B-P-Impresora</td><td>Impresora 3D de estereolitografía (SLA) de Formlabs</td></tr><tr><td>Cura de la forma&nbsp;</td><td>Formlabs, Inc</td><td>FH-CU-01</td><td>Plataforma de curado&nbsp;</td></tr><tr><td>Lavado de forma</td><td>Formlabs, Inc</td><td>FH-WA-01</td><td>Plataforma de lavado</td></tr><tr><td>Pulverizador con vaporizador de bomba</td><td>VWR</td><td>0309-3005</td><td>Para aplicar el agente desmoldeante</td></tr><tr><td>Enfocador/condensador de luz para la serie Edge (excluyendo los modelos T5 y T8)</td><td>Dino-Lite</td><td>N3C-R</td><td>Componente de imagen para la configuración en timelapse</td></tr><tr><td>Paquete Soporte de Montura que combina el rack RK-10 y la extensión de brazo RK-10-EX</td><td>Dino-Lite</td><td>RK-10A</td><td>Componente de imagen para la configuración en timelapse</td></tr><tr><td>Embebedor de tejido</td><td>Leica</td><td>HistoCore Arcadia</td><td>Para incrustar micromoldes</td></tr><tr><td>Procesador de tejidos</td><td>Leica</td><td>TP1020</td><td>Para procesar micromoldes</td></tr><tr><td>Incubadora de Agitación 211DS (Vibrador Orbital)</td><td>Labnet International</td><td>I-5211-DS</td><td>Incubar ovarios en medios enzimáticos para la liberación de folículos</td></tr><tr><td>Software&nbsp; </fuerte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Autodesk Fusion</td><td>Autodesk, Inc</td><td></td><td>Software de diseño asistido por ordenador (CAD). Autodesk ofrece acceso educativo gratuito a través del programa educativo de Autodesk.</td></tr><tr><td>DinoCapture 3.0 versión 1.1.1.3&nbsp;</td><td>Dino-Lite</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>Institutos Nacionales de Salud</td><td></td><td>Analizar imágenes OCT y medir folículos</td></tr><tr><td>PreForm</td><td>Formlabs, Inc</td><td></td><td>Software gratuito de preparación de impresión diseñado para funcionar con impresoras de estereolitografía (SLA) de Formlabs.</td></tr></tbody></table>

producción y uso de moldes de agarosa personalizables para cultivo de folículos ováricos de ratón sin andamios

Production and Use of Customizable Agarose Molds for Scaffold-Free Mouse Ovarian Follicle Culture

Producción y uso de moldes de agarosa personalizables para cultivo de folículos ováricos de ratón sin andamios

The ovarian follicle is the functional unit of the ovary that produces hormones and gametes needed to sustain female reproductive function and health. The ...

production-use-customizable-agarose-molds-for-scaffold-free-mouse

Research

Investigación

JoVE Journal

Developmental Biology

Biología del Desarrollo

Un nuevo método para la encapsulación de los folículos ováricos en 3D de fibrina-alginato red interpenetrante se describe. Este sistema combina un soporte estructural a la degradación proteolítica de apoyar el desarrollo de folículos inmaduros para producir ovocitos maduros. Este método puede ser aplicado a los agregados de cultivo celular para mantener contactos célula-célula, sin limitar la expansión.

Un método para la encapsulación de los folículos ováricos y la Cultura en un proteolíticamente degradables tres dimensiones del sistema

Cultivo de células normales en sus tres dimensiones contexto representa un método alternativo para estudiar los primeros eventos necesarios para la transformación celular y tumorigénesis. Este método se utiliza para producir los ovarios normales y las células del oviducto para estudiar los eventos tempranos en la formación de cáncer de ovario.

Los hidrogeles de alginato para la cultura del órgano en tres dimensiones de los ovarios y oviductos

Este protocolo describe el cultivo primario / co-cultivo de tejido ovárico ratón, utilizando los ovarios de ratones recién nacidos y los folículos ováricos individuales de ratones prepúberes. Las técnicas de cultivo de apoyar el desarrollo de una manera altamente fisiológica, lo que permite la investigación del efecto de los agentes extrínsecos en el ovario, y de las interacciones entre los folículos ováricos.

Cultura y Co-cultura de ratón ovarios y los folículos ováricos

Este protocolo describe una plataforma para la fabricación de anillos de tejido automático montado en tamaños variables utilizando un molde de plástico modificado para requisitos particulares impresa en 3D. Negativos PDMS se curan en el molde impreso en 3D; agarosa se echa entonces en los negativos PDMS curados. Las células se siembran en los pozos de agarosa resultante donde agregan en anillos de tejido.

Fabricación de pozos de agarosa personalizado para la siembra de células y tejido anillo autoensamblaje con moldes impresa en 3D

Aquí se presentan dos protocolos para la encapsulación de ovocitos porcinos en condiciones de cultivo 3D. En el primero, los complejos cúmulos-oocitos (COC) se encapsulan en perlas de fibrina-alginato. En el segundo, se encierran con partículas fluoradas de etileno propileno propileno (microbiorreos). Ambos sistemas garantizan condiciones óptimas para mantener su organización 3D.

Hidrogeles de Alginato degradados proteolíticamente y microbiorreactores hidrófobos para encapsulación de oocitos porcinos

Aquí, se describen cuatro métodos para generar organoides testiculares a partir de células testiculares murinas neonatales primarias, es decir, matriz extracelular (ECM) y entornos de cultivo 2D y 3D libres de ECM. Estas técnicas tienen múltiples aplicaciones de investigación y son especialmente útiles para el estudio del desarrollo testicular y la fisiología in vitro.

Extra Cellular Matrix-Based y Extra Cellular Matrix-Free Generation of Murine Testicular Organoids

El presente protocolo describe una técnica para producir esferoides tisulares a gran escala de forma rentable utilizando un dispositivo similar a un sello impreso en 3D.

Generación de esferoides de tejido a través de un dispositivo similar a un sello impreso en 3D

Este protocolo describe un nuevo modelo de cultivo tridimensional (3-D) que utiliza un hidrogel de hialuronano unido a tiramina para encapsular y cultivar folículos preantrales del ovario de ratón. También detallamos dos enfoques para la criopreservación de folículos ováricos por vitrificación.

Aplicación de un nuevo hidrogel de hialuronano para el cultivo tridimensional de folículos y metodología para la criopreservación de folículos ováricos de ratón

Este estudio presenta una metodología rentable y eficiente para generar estructuras celulares en 3D utilizando un sistema basado en sellos para crear micropocillos en moldes de agarosa. El sistema promueve la formación de esferoides/organoides uniformes, mejorando así las interacciones celulares. Este enfoque reduce la variabilidad experimental y apoya las aplicaciones en pruebas de fármacos e ingeniería de tejidos.

Generación de esferoides/organoides tridimensionales a partir de cultivos celulares bidimensionales utilizando un novedoso dispositivo de estampado

Describimos métodos para aislar células somáticas ováricas de ratón a partir de una fracción del ovario enriquecida con estroma y para generar organoides somáticos ováricos de ratón utilizando un enfoque sin andamiaje.

Investigación del microambiente ovárico: métodos para aislamiento, cultivo 2D y cultivo organoide de células somáticas ováricas de ratón

Aprende a producir moldes de agarosa personalizables para cultivo de folículos ováricos de ratón sin andamios. Este método mejora el crecimiento folicular y la calidad ovocitaria en biología reproductiva.

Producción y uso de moldes de agarosa personalizables para cultivo de folículos ováricos de ratón sin andamios

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