Name: Ensayo de toxicidad para el desarrollo basado en el monitoreo en tiempo real de la interrupción de la señal del factor de crecimiento de fibroblastos en células madre pluripotentes inducidas por humanos (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 45 s
Description: Aprende a evaluar toxicidad del desarrollo mediante el ensayo basado en células madre pluripotentes inducidas humanas que monitorea la interrupción de la señalización FGF/SRF en tiempo real.

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<ol><li>Gilbert-Barness, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Teratogenic+causes+of+malformations%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Clin+Lab+Sci%22%5BJournal%5D)">Teratogenic causes of malformations.</a> Ann Clin Lab Sci. 40 (2), 99-114 (2010).</li>
<li>DeSesso, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Future+of+developmental+toxicity+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Future of developmental toxicity testing.</a> Curr Opin Toxicol. 3, 1-5 (2017).</li>
<li>Teixidó, E., Krupp, E., Amberg, A., Czich, A., Scholz, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Species-specific+developmental+toxicity+in+rats+and+rabbits%3A+Generation+of+a+reference+compound+list+for+development+of+alternative+testing+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Species-specific developmental toxicity in rats and rabbits: Generation of a reference compound list for development of alternative testing approaches.</a> Reprod Toxicol. 76, 93-102 (2018).</li>
<li>Vargesson, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thalidomide-induced+teratogenesis%3A+History+and+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Birth+Defects+Res+C+Embryo+Today%22%5BJournal%5D)">Thalidomide-induced teratogenesis: History and mechanisms.</a> Birth Defects Res C Embryo Today. 105 (2), 140-156 (2015).</li>
<li>van der Laan, J. W., Chapin, R. E., Haenen, B., Jacobs, A. C., Piersma, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Testing+strategies+for+embryo-fetal+toxicity+of+human+pharmaceuticals.+Animal+models+vs.+in+vitro+approaches%3A+A+workshop+report%5BTitle%5D)+AND+%22Regul+Toxicol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Testing strategies for embryo-fetal toxicity of human pharmaceuticals. Animal models vs. in vitro approaches: A workshop report.</a> Regul Toxicol Pharmacol. 63 (1), 115-123 (2012).</li>
<li>Kanno, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Luciferase+assay+system+to+monitor+fibroblast+growth+factor+signal+disruption+in+human+iPSCs%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Luciferase assay system to monitor fibroblast growth factor signal disruption in human iPSCs.</a> STAR Protoc. 3 (2), 101439(2022).</li>
<li>Kanno, S., Okubo, Y., Kageyama, T., Yan, L., Fukuda, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+fibroblast+growth+factor+signal+disruptions+in+human+iPS+cells+for+prediction+of+teratogenic+toxicity+of+chemicals%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biosci+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Integrated fibroblast growth factor signal disruptions in human iPS cells for prediction of teratogenic toxicity of chemicals.</a> J Biosci Bioeng. 133 (3), 291-299 (2022).</li>
<li>Kanno, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+a+developmental+toxicity+assay+based+on+human+iPSC+reporter+to+detect+FGF+signal+disruption%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">Establishment of a developmental toxicity assay based on human iPSC reporter to detect FGF signal disruption.</a> iScience. 25 (2), 103770(2022).</li>
<li>Miano, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+serum+response+factor+in+the+pathogenesis+of+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">Role of serum response factor in the pathogenesis of disease.</a> Lab Invest. 90 (9), 1274-1284 (2010).</li>
<li>Purvis, J. E., Lahav, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Encoding+and+decoding+cellular+information+through+signaling+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Encoding and decoding cellular information through signaling dynamics.</a> Cell. 152 (5), 945-956 (2013).</li>
<li>Paradis, F. -H., Hales, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exposure+to+valproic+acid+inhibits+chondrogenesis+and+osteogenesis+in+mid-organogenesis+mouse+limbs%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Sci%22%5BJournal%5D)">Exposure to valproic acid inhibits chondrogenesis and osteogenesis in mid-organogenesis mouse limbs.</a> Toxicol Sci. 131 (1), 234-241 (2013).</li>
<li>Bosman, S. L., Sonnen, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signaling+oscillations+in+embryonic+development%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Top+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Signaling oscillations in embryonic development.</a> Curr Top Dev Biol. 149, 341-372 (2022).</li>
<li>Hall, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineered+luciferase+reporter+from+a+deep+sea+shrimp+utilizing+a+novel+imidazopyrazinone+substrate%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">Engineered luciferase reporter from a deep sea shrimp utilizing a novel imidazopyrazinone substrate.</a> ACS Chem Biol. 7 (11), 1848-1857 (2012).</li>
<li>DeKelver, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+genomics%2C+proteomics%2C+and+regulatory+DNA+analysis+in+isogenic+settings+using+zinc+finger+nuclease-driven+transgenesis+into+a+safe+harbor+locus+in+the+human+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Res%22%5BJournal%5D)">Functional genomics, proteomics, and regulatory DNA analysis in isogenic settings using zinc finger nuclease-driven transgenesis into a safe harbor locus in the human genome.</a> Genome Res. 20 (8), 1133-1142 (2010).</li>
<li>Hales, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+mutagenicity+and+teratogenicity+of+cyclophosphamide+and+its+active+metabolites%2C+4-hydroxycyclophosphamide%2C+phosphoramide++mustard%2C+and+acrolein%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Comparison of the mutagenicity and teratogenicity of cyclophosphamide and its active metabolites, 4-hydroxycyclophosphamide, phosphoramide mustard, and acrolein.</a> Cancer Res. 42 (8), 3016-3021 (1982).</li>
<li>Genschow, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ECVAM+international+validation+study+on+in+vitro+embryotoxicity+tests%3A+Results+of+the+definitive+phase+and+evaluation+of+prediction+models%5BTitle%5D)+AND+%22Altern+Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">The ECVAM international validation study on in vitro embryotoxicity tests: Results of the definitive phase and evaluation of prediction models.</a> Altern Lab Anim. 30 (2), 151-176 (2002).</li>
<li>Suzuki, N., Ando, S., Yamashita, N., Horie, N., Saito, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+novel+high-throughput+embryonic+stem+cell+tests+with+new+molecular+markers+for+screening+embryotoxic+chemicals+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Sci%22%5BJournal%5D)">Evaluation of novel high-throughput embryonic stem cell tests with new molecular markers for screening embryotoxic chemicals in vitro.</a> Toxicol Sci. 124 (2), 460-471 (2011).</li>
<li>Uibel, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ReProGlo%3A+A+new+stem+cell-based+reporter+assay+aimed+to+predict+embryotoxic+potential+of+drugs+and+chemicals%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Toxicol%22%5BJournal%5D)">ReProGlo: A new stem cell-based reporter assay aimed to predict embryotoxic potential of drugs and chemicals.</a> Reprod Toxicol. 30 (1), 103-112 (2010).</li>
<li>Sanz-Ezquerro, J. J., Münsterberg, A. E., Stricker, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Editorial%3A+Signaling+pathways+in+embryonic+development%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Editorial: Signaling pathways in embryonic development.</a> Front Cell Dev Biol. 5, 76(2017).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Tubo microcentrífuga de 1,5 mL</td><td>FastGene</td><td>FG-MCT015C</td><td>Preparación química de prueba</td></tr><tr><td>Tubo centrífugo de 15 mL</td><td>VIOLAMO</td><td>1-3500-21</td><td>Cultivo celular</td></tr><tr><td>Tubo PCR de 8 tiras</td><td>Watson</td><td>137-333C</td><td>Preparación química de prueba</td></tr><tr><td>Placa inferior blanca/transparente de 96 pozos, superficie TC</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>165306</td><td>Mediciones de cultivo celular y luminiscencia</td></tr><tr><td>Microplaca negra Fondo plano 96Pozo</td><td>ASONE</td><td>3-3321-04</td><td>Para la medición de luminiscencia en ensayos de citotoxicidad</td></tr><tr><td>Respira-MÁS FÁCIL</td><td>TOHO</td><td>BERM-2000</td><td>Película de sellado permeable al gas</td></tr><tr><td>Ensayo de Viabilidad de Celdas Luminiscentes CellTiter-Glo</td><td>Promega</td><td>G7572</td><td>Ensayo de citotoxicidad</td></tr><tr><td>Centrífuga 5702 R</td><td>Eppendorf</td><td></td><td>Centrifugación</td></tr><tr><td>ClipTip 300, Filtrado, Estéril, Rack</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>94420513</td><td></td></tr><tr><td>ClipTip 50, Filtrado, Estéril, Rack</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>94420253</td><td></td></tr><tr><td>Contador Automático de Celdas Countess 3 FL</td><td>Invitrogen</td><td></td><td>Recuento de células</td></tr><tr><td>Portaobjetos de la cámara de conteo celular de la Condesa</td><td>Invitrogen</td><td>C10312</td><td>Recuento de células</td></tr><tr><td>Cultura Sí, DMSO&nbsp;</td><td>FUJIFILM Wako</td><td>031-24051</td><td>Disolvente para productos químicos</td></tr><tr><td>CultureSure Y-27632</td><td>FUJIFILM Wako</td><td>036-24023</td><td>Inhibidor de ROCK para la siembra de iPSC</td></tr><tr><td>DMEM/F12 HEPES, sin fenol rojo</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11039-021</td><td>Recubrimiento para cultivo celular iPS</td></tr><tr><td>F1-ClipTip Multichannel Pipettes, 30 a 300 y micro; L</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>4661180N</td><td></td></tr><tr><td>F1-ClipTip Multichannel Pipettes, 5 a 50 & micro; L</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>4661160N</td><td></td></tr><tr><td>Chip de filtro</td><td>Watson</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Matriz de membrana basal de Geltrex sin factor de crecimiento reducido</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A1413202</td><td>Recubrimiento para cultivo celular iPS</td></tr><tr><td>HIENAI Mat 01R</td><td>COSMO BIO</td><td>HMAT01R</td><td>Para mantener la estabilidad de la temperatura de la placa durante el manejo de cultivos celulares</td></tr><tr><td>Calentador de tubos HIENAI GX01</td><td>COSMO BIO</td><td>TWGX013</td><td>Para mantener el medio caliente durante la manipulación experimental</td></tr><tr><td>Proteína recombinante bFGF de estabilidad térmica humana</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>PHG0367</td><td>Estimulación FGF para el ensayo reportero</td></tr><tr><td>Células madre pluripotentes inducidas por humanos (iPS)</td><td>201B7 (RCB Cat# HPS0063, RRID: CVCL_A324)</td><td>Banco de celdas RIKEN BRC</td><td></td></tr><tr><td>Agitador de microplacas</td><td>TAITEC</td><td>0089532-000</td><td>Agitación de placas para prueba de citotocicidad</td></tr><tr><td>Lector múltiple</td><td>PerkinElmer</td><td>ARVO X4</td><td>Medición de luminiscencia</td></tr><tr><td>Sustrato de células vivas de endurazina nano-glo</td><td>Promega</td><td>N2571</td><td>Sustrato de luminiscencia</td></tr><tr><td>PBS (-)&nbsp;</td><td>FUJIFILM Wako</td><td>166-23555</td><td>Culutre celular</td></tr><tr><td>Parafilim</td><td>COMO UNO</td><td>65-1681-93</td><td>Almacenado para recubrir la placa</td></tr><tr><td>Pipetto</td><td></td><td>eppendorf</td><td></td></tr><tr><td>WSL-1563 KronosHT</td><td>ATTO</td><td>3510140</td><td>Sistema de medición de luminiscencia en tiempo real &nbsp;</td></tr><tr><td>Embalse</td><td>BMBio</td><td>BM-0850-1</td><td></td></tr><tr><td>STEMdif APEL2 Mediano &nbsp;</td><td>Tecnologías STEMCELL</td><td>ST-05275</td><td>Medio de ensayo</td></tr><tr><td>StemFlex Medium</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A3349401</td><td>Medio de mantenimiento</td></tr><tr><td>Agua estéril, libre de endotoxinas</td><td>FUJIFILM Wako</td><td>196-15645</td><td>Control de humedad para cultivo celular iPS</td></tr><tr><td>Placa de cultivo tisular VTC-P6</td><td>VIOLAMO</td><td>2-8588-01</td><td>Cultura celular</td></tr><tr><td>TrypL Select Enzyme (1X), sin fenol rojo</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12563011</td><td>Cultivo celular</td></tr><tr><td>Ácido valproico</td><td>FUJIFILM Wako</td><td>227-01071</td><td>Producto químico de prueba</td></tr></tbody></table>

ensayo de toxicidad para el desarrollo basado en el monitoreo en tiempo real de la interrupción de la señal del factor de crecimiento de fibroblastos en células madre pluripotentes inducidas por humanos

Developmental Toxicity Assay Based on Real-Time Monitoring of Fibroblast Growth Factor Signal Disruption in Human Induced Pluripotent Stem Cells

En nuestra experiencia, la morfología celular es útil para determinar si un ensayo se ha realizado correctamente. La Figura 2A muestra imágenes típicas de microscopía confocal de células inmediatamente antes y después de la exposición química. Al final del ensayo, casi toda la superficie de los pocillos está cubierta por células. La Figura 2B muestra imágenes de tinción de células vivas/muertas. El número de células muertas teñidas con yoduro de propidio (PI) aumenta después de la exposición química; sin embargo, la viabilidad celular es de al menos el 50% y casi todas las células están teñidas con calceína-AM.
En la Tabla 1 se enumeran las sustancias problema utilizadas en nuestros estudios anteriores 7,8. Estos estudios demuestran que los productos químicos Devtox se pueden distinguir con mayor precisión en función de la interrupción de la señal FGF en células iPS humanas. Un hallazgo clave es que el monitoreo continuo de la actividad de señalización es fundamental porque cambia dinámicamente con el tiempo. El uso de un sistema de medición de luminiscencia en tiempo real proporciona una resolución de tiempo considerablemente mayor con menos trabajo de medición. Aquí, describimos un protocolo que utiliza un sistema de monitoreo en tiempo real.
La figura 3A muestra los cambios en la intensidad de la luminiscencia durante 48 h en seis pocillos replicados en las mismas condiciones sin la sustancia problema. Las seis curvas están casi alineadas, lo que indica una buena reproducibilidad de pozo a pozo. Aunque no se identificó claramente en las mediciones manuales de 24 h en nuestros estudios anteriores, dos picos distintos, un pico inicial inmediatamente después de la adición del ligando FGF y un segundo pico aproximadamente a las 24 h, aparecen en mediciones en tiempo real de 48 h. La Figura 3B muestra los cambios en la intensidad de la luminiscencia tras la exposición al ácido valproico (VPA), un conocido tóxico para el desarrollo. El VPA es un inhibidor de la histona desacetilasa que causa defectos en el tubo neural, el corazón y las extremidades¹¹. VPA interrumpe la señalización de FGF de una manera dependiente de la concentración. El sistema automatizado de medición en tiempo real capturó la dinámica de la señal con mayor precisión que las mediciones manuales.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68910/68910fig1v2.jpg"> 
Figura 1: Ensayo de interrupción de la señal FGF/SRF. (A) Ingeniería genética de células iPS humanas para generar células reporteras de señales FGF / SRF. Se construyó un plásmido que contenía Nluc aguas abajo del elemento de respuesta sérica, brazos homólogos para knock-in dirigido y el gen de resistencia a la puromicina bajo el control del promotor de la fosfoglicerato quinasa humana. Después de la selección de puromicina, se establecieron células reporteras de SRE-Nluc. (B) Cronograma del ensayo. Las células reporteras se sembraron en una placa de 96 pocillos y se cultivaron durante 4 días para cubrir toda la superficie. El sustrato luminiscente y la sustancia problema se añadieron 3 y 1 h antes de iniciar la medición, respectivamente. El tiempo de adición del ligando FGF se estableció en 0 h y la intensidad de luminiscencia se midió continuamente durante las siguientes 48 h. (C) Análisis de datos. La dinámica de la señal se registró en células expuestas y no expuestas a productos químicos de prueba y se normalizó al control del vehículo para estimar el área entre curvas como el grado de como una medida de la interrupción de la señal causada por un producto químico. Se obtuvieron valores ABC para cada producto químico a diferentes concentraciones y se calculó su suma. El análisis de la curva de características operativas del receptor se realizó utilizando todos los tóxicos conocidos para el desarrollo probados para determinar el umbral. Abreviaturas: iPS = células madre pluripotentes inducidas; RLU = Unidad de luz relativa; AUC = Área bajo la curva; FGF = factor de crecimiento de fibroblastos; SRF = factor de respuesta sérica; SRE = elemento de respuesta sérica; HA = brazo homólogo; L = izquierda; R = derecha; PuroR = gen de resistencia a la puromicina; hPGK = fosfoglicerato quinasa humana; Nluc = NanoLuc luciferasa; ROC = característica de funcionamiento del receptor; ABC = área entre las curvas. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68910/68910fig1v2large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68910/68910fig2.jpg"> 
Figura 2: Morfología celular y tinción de células vivas/muertas. A) Imágenes microscópicas confocales de las células antes (día 4) y después (día 6) de la exposición a una sustancia problema. Las células restantes que cubren casi toda la superficie de los pocillos después de la prueba son un indicador de una prueba exitosa. La cobertura casi completa del pozo al final del ensayo indica una ejecución exitosa. (B) Tinción de células vivas/muertas antes y después de la exposición a una sustancia problema. Las células vivas se tiñeron de verde con Calceína-AM y las células muertas se tiñeron de rojo con yoduro de propidio (PI). se tiñeron con calceína-AM (verde) y las células muertas con yoduro de propidio (PI, rojo). La proporción de células muertas debe ser menor que &lt; el 50% del total de células. Barras de escala = 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68910/68910fig2large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68910/68910fig3.jpg"> 
Figura 3: Ejemplos típicos de dinámica de intensidad de luminiscencia. (A) La luminiscencia del curso temporal cambia el curso del tiempo de la luminiscencia después de la estimulación del ligando FGF, medido utilizando un sistema de medición de luminiscencia en tiempo real. La intensidad de la luminiscencia se monitoreó cada 22 min durante 48 h. Las seis líneas de colores representan señales de diferentes pozos. (B) Comparación de mediciones de luminiscencia manuales y en tiempo real con ácido valproico. Se observó una interrupción de la señal con ambos métodos de medición, mientras que el monitoreo en tiempo real capturó más claramente la señal mejorada en el segundo pico. Abreviaturas: RLU = Unidad de luz relativa; VPA = ácido valproico; FGF = factor de crecimiento de fibroblastos. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68910/68910fig3large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68910/68910_Table%201.xlsx" target="_blank">Haga clic aquí para descargar esta tabla.</a>
<table border="1" fo:font-size="8px" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Sustancia de prueba</td>
			<td>Abreviatura</td>
			<td>Cas NO.</td>
			<td>Estudio en animales (estudio previo)</td>
			<td>Estudio in vitro (este estudio)</td>
			<td>Suma de valores ABC</td>
			<td>Concentración máxima (μg/ml)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ácido trans-retinoico</td>
			<td>ATRA</td>
			<td>302-79-4</td>
			<td>P</td>
			<td>P</td>
			<td>65.9</td>
			<td>0.0100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hidroxiurea</td>
			<td>HU</td>
			<td>127-07-1</td>
			<td>P</td>
			<td>P</td>
			<td>63.3</td>
			<td>149</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ácido metoxiacético</td>
			<td>MAA</td>
			<td>625-45-6</td>
			<td>P</td>
			<td>P</td>
			<td>225</td>
			<td>683</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cloruro de metilmercurio</td>
			<td>MeHg</td>
			<td>115-09-3</td>
			<td>P</td>
			<td>P</td>
			<td>77.7</td>
			<td>1.20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hidrato de metotrexato</td>
			<td>MTX</td>
			<td>133073-73-1</td>
			<td>P</td>
			<td>P</td>
			<td>80.5</td>
			<td>5.00</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Salicilato de sodio</td>
			<td>SA</td>
			<td>54-21-7</td>
			<td>P</td>
			<td>P</td>
			<td>38.7</td>
			<td>666</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ácido valproico</td>
			<td>AVA</td>
			<td>99-66-1</td>
			<td>P</td>
			<td>P</td>
			<td>63.3</td>
			<td>100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-Aminonicotinamida</td>
			<td>6-UNA</td>
			<td>329-89-5</td>
			<td>P</td>
			<td>N</td>
			<td>24.9</td>
			<td>1.00</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ácido bórico</td>
			<td>BA</td>
			<td>10043-35-3</td>
			<td>P</td>
			<td>N</td>
			<td>24.2</td>
			<td>250</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-Bromo-2'-desoxiuridina</td>
			<td>BrdU</td>
			<td>59-14-3</td>
			<td>P</td>
			<td>P</td>
			<td>83.9</td>
			<td>50.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5,5-dimetil-2,4-oxazolidinediona</td>
			<td>DMO</td>
			<td>695-53-4</td>
			<td>P</td>
			<td>P</td>
			<td>50.3</td>
			<td>840</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cloruro de litio</td>
			<td>LiCl</td>
			<td>7447-41-8</td>
			<td>P</td>
			<td>N</td>
			<td>29.8</td>
			<td>250</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-Fluorouracilo</td>
			<td>5-FU</td>
			<td>51-21-8</td>
			<td>P</td>
			<td>P</td>
			<td>92.4</td>
			<td>2.65</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ciclofosfamida monohidrato</td>
			<td>CPA</td>
			<td>6055-19-2</td>
			<td>P</td>
			<td>N</td>
			<td>19.1</td>
			<td>400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mesilato de imatinib</td>
			<td>IMA</td>
			<td>220127-57-1</td>
			<td>P</td>
			<td>P</td>
			<td>42.4</td>
			<td>12.5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lenalidomida</td>
			<td>LEN</td>
			<td>191732-72-6</td>
			<td>P</td>
			<td>P</td>
			<td>94.7</td>
			<td>35.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pomalidomida</td>
			<td>POM</td>
			<td>19171-19-8</td>
			<td>P</td>
			<td>P</td>
			<td>50.9</td>
			<td>2.50</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Talidomida</td>
			<td>THA</td>
			<td>50-35-1</td>
			<td>P</td>
			<td>P</td>
			<td>53.3</td>
			<td>12.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acrilamida</td>
			<td>AcA</td>
			<td>79-06-01</td>
			<td>N</td>
			<td>N</td>
			<td>37.1</td>
			<td>454</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Alcanfor</td>
			<td>LEVA</td>
			<td>464-49-3</td>
			<td>N</td>
			<td>N</td>
			<td>27.5</td>
			<td>50.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clorhidrato de difenhidramina</td>
			<td>DHM</td>
			<td>147-24-0</td>
			<td>N</td>
			<td>P</td>
			<td>68.2</td>
			<td>262</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ftalato de dimetilo</td>
			<td>DMP</td>
			<td>131-11-3</td>
			<td>N</td>
			<td>N</td>
			<td>24.4</td>
			<td>100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sal sódica de penicilina G</td>
			<td>Peng</td>
			<td>69-57-8</td>
			<td>N</td>
			<td>N</td>
			<td>22.1</td>
			<td>1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sacarina sódica</td>
			<td>SAC</td>
			<td>82385-42-0</td>
			<td>N</td>
			<td>N</td>
			<td>34.0</td>
			<td>1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetaminofén</td>
			<td>APAP</td>
			<td>103-90-2</td>
			<td>N</td>
			<td>N</td>
			<td>22.3</td>
			<td>20.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trihidrato de amoxicilina</td>
			<td>AMX</td>
			<td>61336-70-7</td>
			<td>N</td>
			<td>N</td>
			<td>28.4</td>
			<td>25.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cimetidina</td>
			<td>CM</td>
			<td>51481-61-9</td>
			<td>N</td>
			<td>N</td>
			<td>25.3</td>
			<td>30.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eritromicina</td>
			<td>ERY</td>
			<td>114-07-8</td>
			<td>N</td>
			<td>N</td>
			<td>20.0</td>
			<td>15.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hidroclorotiazida</td>
			<td>HCTZ</td>
			<td>58-93-5</td>
			<td>N</td>
			<td>N</td>
			<td>21.9</td>
			<td>20.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sulfasalazina</td>
			<td>SSZ</td>
			<td>599-79-1</td>
			<td>N</td>
			<td>N</td>
			<td>30.8</td>
			<td>100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Químico</td>
			<td>AUC</td>
			<td>Umbral</td>
			<td>Sensibilidad</td>
			<td>Especificidad</td>
			<td>Exactitud</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 sustancias</td>
			<td>0.819</td>
			<td>37.9</td>
			<td>0.778</td>
			<td>0.917</td>
			<td>0.833</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabla 1: Productos químicos Devtox y no Devtox clasificados en experimentos con animales y resultados estimados con y sin interrupción de la señal FGF. Abreviaturas: P = positivo (Devtox); N = negativo (no Devtox).

Ensayo de toxicidad para el desarrollo basado en el monitoreo en tiempo real de la interrupción de la señal del factor de crecimiento de fibroblastos en células madre pluripotentes inducidas por humanos

Developmental toxicity (Devtox) is typically evaluated in animal models. However, there are challenges in ensuring accuracy, such as false negatives due ...

developmental-toxicity-assay-based-on-real-time-monitoring-fibroblast

Research

Investigación

JoVE Journal

Developmental Biology

Biología del Desarrollo

Demostramos el protocolo para la generación de células madre pluripotentes inducidas a partir de células somáticas humanas con lentivirus mediada por la entrega de los factores humanos Oct4, Sox2, Nanog, y Lin28. Pluripotencia fue confirmada por la morfología y la presencia de células madre embrionarias (ES) de células específicas de los marcadores.

Generación de células madre pluripotentes inducidas por reprogramación de fibroblastos humanos con los Lentivirus Stemgent Humanos TF Set

Se presenta un protocolo para la reprogramación eficiente de las células somáticas humanas en células madre pluripotentes inducidas (hiPSC) utilizando vectores retrovirales que codifican Oct3 / 4, Sox2, Klf4 y c-myc (OSKM) y la identificación de hiPSC correctamente reprogramado por tinción en vivo con Tra- 1-81 anticuerpo.

Selección y aislamiento de las colonias de humanos células madre pluripotentes inducidas a partir de fibroblastos adultos Reprogramado

La calidad de fibroblastos de embriones de ratón (MEFs) está dictada por la cepa derecha de ratón tal como CF-1. Pluripotencia-MEFs de apoyo y medios de comunicación condicionado (CM) obtenido a partir de éstas debe contener concentraciones óptimas de activina A, Gremlin y Tgfβ1 necesarios para la Activina / Nodal y las vías de FGF de manera cooperativa mantener la auto-renovación y pluripotencialidad.

Preparación de las células embrionarias de fibroblastos de ratón adecuados para el cultivo de células estaminales embrionarias humanas pluripotentes inducidas, y

Los protocolos describen dos sistemas in vitro en las pruebas de toxicidad del desarrollo (UKK y UKN1) basado en células madre embrionarias humanas y estudios transcriptoma. Los sistemas de pruebas predicen riesgo de toxicidad para el desarrollo humano, y pueden contribuir a reducir los estudios en animales, los costos y el tiempo requerido para las pruebas de seguridad química.

Humano madre pluripotentes células Basado Toxicidad para el desarrollo de ensayos de la seguridad química Detección y biología de sistemas de generación de datos

Este protocolo proporciona una forma sencilla y eficiente de propagar células madre pluripotentes humanas (hPSCs) utilizando solo medios condicionados derivados de la placenta humana en un plato recubierto de gelatina sin suplementación exógena adicional o sustratos sintéticos específicos de hPSC.

Una Cultura Modelo Novela de Pluripotentes Stem Cell Propagación de gelatina en Media Placenta acondicionado

Las células madre pluripotentes inducidas por el hombre (HiPSCs) se consideran una herramienta poderosa para la detección de drogas y químicos y para el desarrollo de nuevos modelos in vitro para pruebas de toxicidad, incluyendo neurotoxicidad. Aquí, se describe un protocolo detallado para la diferenciación de hiPSCs en neuronas y glia.

Protocolo para la diferenciación de células madre pluripotentes inducidas por humanos en cultivos mixtos de neuronas y glia para pruebas de neurotoxicidad

El protocolo que presentamos describe una plataforma para la identificación de pequeñas moléculas para el tratamiento de la enfermedad hepática. Se presenta una descripción paso a paso detallando cómo iPSCs se diferencian en células con características de hepatocitos en placas de 96 pocillos y utilizar las células para detectar pequeñas moléculas con potencial actividad terapéutica.

Usando humanos inducida por células de hepatocito-como derivado de células madre pluripotentes de descubrimiento de fármacos

Aquí describimos un método clínicamente relevante, alta eficiencia y libre de alimentador para reprogramar fibroblastos primarios humanos en células pluripotentes inducidas, usando modificado mRNAs que codifican factores de reprogramación y microRNA maduro-367/302 imita. También se incluyen métodos para evaluar la eficiencia de reprogramación, ampliar las colonias clonales iPSC y confirmar la expresión de los marcadores de pluripotencia TRA-1-60.

Basado en el ARN la reprogramación de fibroblastos primarios de humanos en células madre pluripotentes inducidas

La reprogramación celular requiere la introducción de genes clave, que regulan y mantienen el estado celular pluripotente. El protocolo descrito permite la formación de colonias de células madre pluripotentes inducidas (iPSC) a partir de fibroblastos dérmicos humanos sin métodos virales/integradores pero utilizando ARN no modificados (NM-RNA) combinados con factores de evasión inmune que reducen los mecanismos de defensa celular.

Aislamiento de fibroblastos dérmicos humanos adultos de la piel abdominal y generación de células madre pluripotentes inducidas utilizando un método no integrador

Los cardiomiocitos derivados de células madre pluripotentes inducidos por humanos (hiPSC-CM) se han convertido en un modelo in vitro prometedor para la detección de cardiotoxicidad inducida por fármacos y el modelado de enfermedades. Aquí, detallamos un protocolo para medir la contractilidad y electrofisiología de hiPSC-CMs.

Aplicaciones técnicas de la matriz de microelectrodos y los registros de pinza de parche en cardiomiocitos derivados de células madre pluripotentes inducidos por humanos

Los cardiomiocitos derivados de células madre pluripotentes inducidos por humanos (hiPSC-CM) ofrecen una alternativa al uso de animales para la detección preclínica de cardiotoxicidad. Una limitación para la adopción generalizada de hiPSC-CM en la detección de toxicidad preclínica es el fenotipo inmaduro de las células. Aquí se presentan protocolos para la maduración robusta y rápida de hiPSC-CM.

Detección de cardiotoxicidad de alto rendimiento utilizando monocapas maduras de cardiomiocitos derivadas de células madre pluripotentes inducidas por humanos

Aprende a evaluar toxicidad del desarrollo mediante el ensayo basado en células madre pluripotentes inducidas humanas que monitorea la interrupción de la señalización FGF/SRF en tiempo real.

Ensayo de toxicidad para el desarrollo basado en el monitoreo en tiempo real de la interrupción de la señal del factor de crecimiento de fibroblastos en células madre pluripotentes inducidas por humanos (Video) | JoVE Journal

Ensayo de toxicidad para el desarrollo basado en el monitoreo en tiempo real de la interrupción de la señal del factor de crecimiento de fibroblastos en células madre pluripotentes inducidas por humanos

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