Name: Un ensayo VIVO/MUERTO optimizado junto con citometría de flujo para cuantificar la supervivencia post-estrés en células de levadura (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-29T14:50:00.000+00:00
Duration: 9 min 58 s
Description: Aprende a cuantificar la supervivencia post-estrés en levadura mediante citometría de flujo con colorantes fluorescentes SYTO 9 y propidio yoduro. Este método ofrece datos reproducibles sobre la integridad de membrana celular.

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<ol><li>Lourens-Hattingh, A., Viljoen, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+and+survival+of+a+probiotic+yeast+in+dairy+products%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Res+Int%22%5BJournal%5D)">Growth and survival of a probiotic yeast in dairy products.</a> Food Res Int. 34 (9), 791-796 (2001).</li>
<li>Qiu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress+tolerance+phenotype+of+industrial+yeast%3A+industrial+cases%2C+cellular+changes%2C+and+improvement+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Microbiol+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Stress tolerance phenotype of industrial yeast: industrial cases, cellular changes, and improvement strategies.</a> Appl Microbiol Biotechnol. 103 (16), 6449-6462 (2019).</li>
<li>Welsh, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival%2C+persistence%2C+and+isolation+of+the+emerging+multidrugresistant+pathogenic+yeast+Candida+auris+on+a+plastic+health+care+surface%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Survival, persistence, and isolation of the emerging multidrugresistant pathogenic yeast Candida auris on a plastic health care surface.</a> J Clin Microbiol. 55 (10), 2996-3005 (2017).</li>
<li>Millard, P. J., Roth, B. L., Thi, H. P., Yue, S. T., Haugland, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+the+FUN1+family+of+fluorescent+probes+for+vacuole+labeling+and+viability+testing+of+yeasts%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Environ+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Development of the FUN1 family of fluorescent probes for vacuole labeling and viability testing of yeasts.</a> Appl Environ Microbiol. 63 (7), 2897-2905 (1997).</li>
<li>WlochSalamon, D. M., Bem, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Types+of+cell+death+and+methods+of+their+detection+in+yeast+Saccharomyces+cerevisiae%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Types of cell death and methods of their detection in yeast Saccharomyces cerevisiae.</a> J Appl Microbiol. 114 (2), 287-298 (2013).</li>
<li>Boulos, L., Prévost, M., Barbeau, B., Coallier, J., Desjardins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LIVE%2FDEAD+BacLight%3A+Application+of+a+new+rapid+staining+method+for+direct+enumeration+of+viable+and+total+bacteria+in+drinking+water%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Microbiol.+Methods%22%5BJournal%5D)">LIVE/DEAD BacLight: Application of a new rapid staining method for direct enumeration of viable and total bacteria in drinking water.</a> J. Microbiol. Methods. 37 (1), 77-86 (1999).</li>
<li>Zhang, T., Fang, H. H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+Saccharomyces+cerevisiae+viability+using+BacLight%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Lett%22%5BJournal%5D)">Quantification of Saccharomyces cerevisiae viability using BacLight.</a> Biotechnol Lett. 26 (12), 989-992 (2004).</li>
<li>Stocks, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+and+use+of+the+commercially+available+viability+stain%2C+BacLight%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+A%22%5BJournal%5D)">Mechanism and use of the commercially available viability stain, BacLight.</a> Cytometry A. 61A (2), 189-195 (2004).</li>
<li>Sun, S., Baryshnikova, A., Brandt, N., Gresham, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+interaction+profiles+of+regulatory+kinases+differ+between+environmental+conditions+and+cellular+states%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Syst+Biol%22%5BJournal%5D)">Genetic interaction profiles of regulatory kinases differ between environmental conditions and cellular states.</a> Mol Syst Biol. 16 (5), e9167(2020).</li>
<li>Li, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allicin+shows+antifungal+efficacy+against+Cryptococcus+neoformans+by+blocking+the+fungal+cell+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Allicin shows antifungal efficacy against Cryptococcus neoformans by blocking the fungal cell membrane.</a> Front Microbiol. 13, 1012516(2022).</li>
<li>Jin, Y., Zhang, T., Samaranayake, Y., Fang, H. H. P., Yip, H. K., Samaranayake, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+new+probes+and+stains+for+improved+assessment+of+cell+viability+and+extracellular+polymeric+substances+in+Candida+albicans+biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22Mycopathologia%22%5BJournal%5D)">The use of new probes and stains for improved assessment of cell viability and extracellular polymeric substances in Candida albicans biofilms.</a> Mycopathologia. 159 (3), 353-360 (2005).</li>
<li>Bojsen, R., Regenberg, B., Folkesson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Saccharomyces+cerevisiae+biofilm+tolerance+towards+systemic+antifungals+depends+on+growth+phase%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Saccharomyces cerevisiae biofilm tolerance towards systemic antifungals depends on growth phase.</a> BMC Microbiol. 14, 305(2014).</li>
<li>Ryan, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activity+of+potent+and+selective+host+defense+peptide+mimetics+in+mouse+models+of+oral+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">Activity of potent and selective host defense peptide mimetics in mouse models of oral candidiasis.</a> Antimicrob Agents Chemother. 58 (7), 3820-3827 (2014).</li>
<li>Chudzik, B., Koselski, M., Czuryło, A., Trębacz, K., Gagoś, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+look+at+the+antibiotic+amphotericin+B+effect+on+Candida+albicans+plasma+membrane+permeability+and+cell+viability+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Biophys.+J.+%28EBJ%29%22%5BJournal%5D)">A new look at the antibiotic amphotericin B effect on Candida albicans plasma membrane permeability and cell viability functions.</a> Eur. Biophys. J. (EBJ). 44 (1-2), 77-90 (2015).</li>
<li>Roscetto, E., Contursi, P., Vollaro, A., Fusco, S., Notomista, E., Catania, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antifungal+and+antibiofilm+activity+of+the+first+cryptic+antimicrobial+peptide+from+an+archaeal+protein+against+Candida+spp.+clinical+isolates%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Antifungal and antibiofilm activity of the first cryptic antimicrobial peptide from an archaeal protein against Candida spp. clinical isolates.</a> Sci Rep. 8 (1), 17570(2018).</li>
<li>Tang, H., Liang, J., He, B. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+optimized+LIVE%2FDEAD+assay+using+flow+cytometry+to+quantify+poststress+and+antifungaltreatment+survival+in+diverse+yeasts%5BTitle%5D)+AND+%22BioRiv%22%5BJournal%5D)">An optimized LIVE/DEAD assay using flow cytometry to quantify poststress and antifungaltreatment survival in diverse yeasts.</a> BioRiv. , (2025).</li>
<li>Stiefel, P., SchmidtEmrich, S., ManiuraWeber, K., Ren, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+aspects+of+using+bacterial+cell+viability+assays+with+the+fluorophores+SYTO9+and+propidium+iodide%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Critical aspects of using bacterial cell viability assays with the fluorophores SYTO9 and propidium iodide.</a> BMC Microbiol. 15 (1), 36(2015).</li>
<li>Rego, A., Ribeiro, A., CôrteReal, M., Chaves, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+yeast+regulated+cell+death%3A+Trespassing+the+point+of+no+return+to+loss+of+plasma+membrane+integrity%5BTitle%5D)+AND+%22Apoptosis%22%5BJournal%5D)">Monitoring yeast regulated cell death: Trespassing the point of no return to loss of plasma membrane integrity.</a> Apoptosis. 27 (9), 778-786 (2022).</li>
<li>CarmonaGutierrez, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+and+recommendations+on+yeast+cell+death+nomenclature%5BTitle%5D)+AND+%22Microbial+Cell%22%5BJournal%5D)">Guidelines and recommendations on yeast cell death nomenclature.</a> Microbial Cell. 5 (1), 4-31 (2018).</li>
<li>Miller, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+colony+size+to+measure+fitness+in+Saccharomyces+cerevisiae%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Using colony size to measure fitness in Saccharomyces cerevisiae.</a> PLoS One. 17 (10), e0271709(2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Placa de pozo profundo de 96 pozos</td><td>Thermo Fisher</td><td>278606</td><td>NUNC 96</td></tr><tr><td>Citómetro de flujo Attune NxT con lector de placas</td><td>Thermo Fisher A24858</td><td>A24858</td><td>Automuestreador (A42901)</td></tr><tr><td>Candida glabrata</td><td></td><td></td><td>CG99, cepa de laboratorio derivada de un aislado clínico (Cormack & Falkow, 1999)</td></tr><tr><td>Kit de levadura VIVA/MUERTA de FungaLight</td><td>Thermo Fisher A24858</td><td>L34952</td><td>Contiene SYTO 9 (3,34 mM) y yoduro propidio (20 mM). Estos dos componentes también pueden adquirirse por separado a varios proveedores.</td></tr><tr><td>Peróxido de hidrógeno</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H1009</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio Leica Confocal SP8</td><td>Leica</td><td>TCS SP8 X</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro de sodio</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S9888</td><td>Se usa para hacer una solución esterilizada de NaCl al 0,85%</td></tr><tr><td>Base de nitrógeno de levadura sin aminoácidos</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Y0626</td><td>se utiliza para elaborar el medio sintético completo con una mezcla de glucosa al 2% y aminoácidos</td></tr></tbody></table>

un ensayo vivo/muerto optimizado junto con citometría de flujo para cuantificar la supervivencia post-estrés en células de levadura

An Optimized LIVE/DEAD Assay Coupled with Flow Cytometry for Quantifying Post-Stress Survival in Yeast Cells

Un ensayo VIVO/MUERTO optimizado junto con citometría de flujo para cuantificar la supervivencia post-estrés en células de levadura

Quantifying survival is a common and critical task in yeast research. LIVE/DEAD stains based on plasma membrane integrity provide a rapid and ...

an-optimized-livedead-assay-coupled-with-flow-cytometry-for

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Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Cuantitativa de células vivas por fluorescencia microscopia análisis de la levadura de fisión

Fuente: Chapman, I. J., et al., Optimización de la sonda molecular para determinar la mortalidad celular en un organismo fotosintético (Microcystis aeruginosa) mediante citometría de flujo. J. Vis. Exp. (2016)Este video demuestra el método para distinguir células vivas y muertas de Microcystis aeruginosa mediante la combinación del etiquetado de sondas fluorescentes con el análisis de citometría de flujo de la autofluorescencia de ficocianina y la señal de la sonda.

Análisis de viabilidad de Microcystis aeruginosa mediante citometría de flujo

Este artículo describe el uso de una proteína de fusión luciferasa de luciérnaga-GFP para...

Los ensayos acoplados para Monitoreo replegamiento de proteínas en<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

Dos métodos complementarios basados ​​en citometría de flujo y microscopía se presentan que permiten la cuantificación, a nivel de una sola célula, de la dinámica de la expresión génica inducidos por la activación de una vía MAPK en la levadura.

La cuantificación temporal de la expresión de MAPK inducida en células individuales de levadura

Las poblaciones microbianas contienen heterogeneidad celular sustancial, que puede dictar el comportamiento general. Análisis de la sonda molecular a través de citometría de flujo puede determinar estados fisiológicos de las células, sin embargo su aplicación varía entre las especies. Este estudio proporciona un protocolo para determinar con precisión la mortalidad celular dentro de una población cianobacteria, sin menospreciar o grabación de resultados falsos positivos.

Molecular Sonda Optimización para determinar la mortalidad celular en una fotosintética Organismo (<em&gt; Microcystis aeruginosa</em&gt;) Usando citometría de flujo

El estudio del metabolismo es cada vez más relevante para la investigación inmunológica. Aquí, presentamos un método optimizado para medir la glucólisis y la respiración mitocondrial en esplenocitos de ratón y linfocitos T y B.

Un protocolo optimizado para analizar la glucólisis y respiración mitocondrial en los linfocitos

Agregación de la proteína provoca estrés oxidativo celular. Este protocolo describe un método de control de los Estados intracelulares de proteínas amyloidogenic y el estrés oxidativo asociado con ellos, mediante citometría de flujo. El enfoque se utiliza para estudiar el comportamiento de las variantes soluble y propensa a la agregación del péptido amiloide-β.

Evaluación del impacto de la agregación de proteína sobre el estrés oxidativo celular en levaduras

Este artículo describe un protocolo de citometría de flujo basado en FRET para cuantificar el autoensamblaje de proteínas en células De. cerevisiae y HEK293T.

Detección y caracterización de autoensamblaje de proteínas en Vivo por citometría de flujo

Los fenotipos de crecimiento de levadura se miden con precisión a través de imágenes de lapso de tiempo altamente paralelas de células inmovilizadas que crecen en microcolonías. Simultáneamente, se puede monitorear la tolerancia al estrés, la expresión proteica y la localización de proteínas, generando conjuntos de datos integrados para estudiar cómo las diferencias ambientales y genéticas, así como la heterogeneidad de la expresión génica entre las células isogénicas, modulan el crecimiento.

Imágenes en vivo de alto rendimiento de microcolonias para medir la heterogeneidad en crecimiento y expresión génica

Aquí, presentamos un protocolo para el uso de sustratos de levadura mostrados en la superficie para ensayos de modificación enzimática. La plataforma se demostró utilizando el análisis de la actividad de desfosforilación de la tirosina fosfatasa SHP-2 frente a uno de sus sustratos como ensayo representativo de modificación enzimática.

Modificación enzimática y evaluación por citometría de flujo de proteínas mostradas en la superficie de la levadura

Aprende a cuantificar la supervivencia post-estrés en levadura mediante citometría de flujo con colorantes fluorescentes SYTO 9 y propidio yoduro. Este método ofrece datos reproducibles sobre la integridad de membrana celular.

Un ensayo VIVO/MUERTO optimizado junto con citometría de flujo para cuantificar la supervivencia post-estrés en células de levadura (Video) | JoVE Journal

Un ensayo VIVO/MUERTO optimizado junto con citometría de flujo para cuantificar la supervivencia post-estrés en células de levadura

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