Evaluación Doppler por onda pulsada de la disfunción diastólica en el modelo ZSF-1 de rata de hipertensión pulmonar debida a enfermedad cardíaca izquierda

Nuestra investigación se centra en la insuficiencia cardíaca con fracción de eyección preservada y en las diferencias significativas entre los sexos que manifiesta la enfermedad. La disfunción diastólica es una característica distintiva de la HFpEF, con índices que pueden evaluarse mediante ecografía Doppler sin ecocardiografía 2D, que es costosa y requiere equipos sofisticados. Para empezar, enciende la tableta conectada a la almohadilla de trazado del ECG.

Selecciona RS Monitor entre las aplicaciones disponibles. Luego enciende el botón de ECG pulsando el botón redondo delante. Toca ajustes en la esquina inferior derecha de la interfaz de usuario.

Selecciona los ajustes predefinidos en el menú de ajustes experimentales. Toca el menú desplegable bajo presets guardados, luego elige Rat CV y haz clic en OK en la esquina inferior derecha. Después, limpia la almohadilla de ECG con alcohol etílico al 70% para eliminar cualquier residuo de gel de ECG.

Obtén gel electrodo altamente conductor para el electrocardiograma y gel hipoalergénico soluble en agua para el Doppler. Coloque el animal anestesiado en posición supina sobre la almohadilla no invasiva de ECG con la nariz situada en el cono nasal, de tamaño adecuado, con una salida de vaporizador ajustada al 1,5 a 2%. Con un aplicador con punta de algodón, aplique una pequeña cantidad de gel de electrodos en la superficie dorsal de las cuatro patas y en el lado plantar de las patas traseras. Asegura las patas con cinta adhesiva en la superficie de contacto del electrodo de la almohadilla de ECG, asegurando un contacto suficiente entre el gel y la almohadilla.

Luego usa una crema depilatoria suave para eliminar el vello del pecho y del abdomen. Limpia cualquier crema residual para evitar irritación de la piel. Asegúrese de que la línea base isoeléctrica y las formas de onda P, QRS y T se muestren claramente en el monitor del ordenador.

Crea una carpeta nueva identificando el animal y los datos de interés. Enciende el dispositivo transceptor Doppler de pulsos usando los interruptores de alimentación en la parte delantera y trasera de la gran caja azul. Luego enciende el procesador de señales Doppler.

A continuación, abre el software de estación de trabajo de procesamiento de señal Doppler. Haz clic en Configurar y selecciona Configuración del sistema. Selecciona la frecuencia de sonda de 20 megahercios para el experimento.

Conecta la sonda de 20 megahercios cuando investigues a una rata o ratón joven. Usa una sonda de 10 megahercios para ratas mayores, grandes o obesas. Si ambas sondas están conectadas, utiliza el interruptor de palanca en la parte frontal del módulo transceptor para cambiar entre frecuencias según sea necesario.

Asegúrese de que el transductor de sonda de mano esté conectado al receptáculo del canal A o B del módulo transceptor. Selecciona el canal correspondiente para operar la sonda portátil. Configura el interruptor de dirección en TWD para mostrar el flujo hacia la sonda por encima de la línea base de flujo cero.

Luego ajusta el rango a 2,5 a 3,5 milímetros para ratones o cuatro a seis milímetros para ratas. Ajusta el filtro a 15 para suavizar la salida de velocidad fásica a una señal amortiguada. Pulsa ir en la esquina superior izquierda de la interfaz de usuario.

En la ventana emergente, introduzca la información relevante de adquisición, incluyendo tipo de animal, género, fecha de nacimiento, edad en la fecha de adquisición y peso. Selecciona la carpeta pre-creada deseada en el menú desplegable del directorio y haz clic en OK. Ajusta la línea base del ECG arrastrando la barra de la escala del eje hacia arriba o hacia abajo hasta que las ondas R sean claramente visibles. Para realizar mediciones Doppler, primero se aplica una pequeña cantidad de gel de ultrasonidos en la región subesternal y epigástrica del pecho y abdomen del animal anestesiado.

Coloca la sonda Doppler en la línea media bajo el diafragma, justo debajo del esternón, con la cabeza apuntando a la cefálade hacia la oreja izquierda del animal. Escanea lentamente el flujo sanguíneo moviendo la sonda en pequeños movimientos circulares con radio creciente. Mantén una presión suave de la sonda contra la piel bajo el diafragma en todo momento.

Si no se detecta flujo mitral, se ajusta el dial de rango en incrementos de 0,5 milímetros hasta identificar la forma de onda transmisora. Asegúrate de que la forma de onda Doppler y el electrocardiograma se muestren simultáneamente en la pantalla. Crea instantáneas usando el pedal una vez identificado el flujo correcto y repite hasta que se registre la calidad óptima de los datos.

Detener la adquisición de datos haciendo clic en detener cuando esté satisfecho con la calidad de los datos. Haz clic en Archivo y selecciona Abrir en el menú desplegable. Elige el archivo de datos de mayor calidad de la carpeta precreada para el análisis.

Pulsa en Análisis y luego en Modo Análisis. Elige el segundo paso, configuración general y pon el tipo de dato en Doppler. Luego configura la señal en entrada mitral.

Selecciona el modelo animal adecuado y selecciona todos los nombres de medición bajo los nombres de medida por defecto. Selecciona el paso cinco, editor R-peak desde el menú desplegable de control de análisis. Activa los marcadores de beats y R-picos de visualización y haz clic en auto-calcular.

Luego elige el paso seis y editor de beats en el menú desplegable de control de análisis. Activa los marcadores de pantalla de beats y R-peak y haz clic en seleccionar todos los beats. Después, elige el paso siete, editor de marcadores.

Haz clic en marcadores de análisis de pantalla y elige el parámetro deseado bajo el marcador actual seleccionado. Asegurarse de que los parámetros dados estén disponibles para la completitud de los datos. Selecciona el paso ocho, resultados de la medición.

Haz clic en copiar resultados a la tabla para copiar los datos en un archivo de Excel y guardarlo. Quita la cinta de las patas del animal después de apagar el vaporizador. Luego retira al animal de la almohadilla del electrodo.

Limpia cualquier crema depilatoria y gel de electrodos que quede del animal. Luego traslada al animal de nuevo a su jaula con acceso libre a agua y comida para su recuperación. Para una evaluación más precisa de la función diastólica, es necesario visualizar los patrones de flujo antegrado y retrógrado relacionados con la apertura y cierre de la válvula mitral y aórtica dentro del mismo ciclo cardíaco a lo largo de varios ciclos.

Se determinaron múltiples índices a partir del patrón de flujo transmisor bifásico, incluyendo el pico de llenado temprano, el pico de contracción auricular, la relación entre estos dos picos y el tiempo de desaceleración del pico temprano de llenado. El tiempo de relajación isovolumínica, o IVRT, fue un buen indicador de disfunción diastólica en roedores. La IVRT aumentó durante el envejecimiento en el modelo de rata ZS F1 de hipertensión pulmonar y enfermedad cardíaca izquierda.

Este cambio podía detectarse tan pronto como a las 16 semanas de edad. Los ratas machos obesas de 24 semanas mostraron una IVRT más alta en comparación con los primeros tiempos en controles magros. Este protocolo permite al investigador estudiar los índices ecocardiográficos establecidos de la HFpEF, incluyendo la relación E/A, IVT o el tiempo de desaceleración de la onda E.

Esta técnica carece de visualización 2D del corazón, y algunos marcadores de la función diastólica dependen de la carga, una condición difícil de controlar. Esta es una técnica de bajo coste que detecta de forma fiable la progresión de la enfermedad a lo largo del tiempo en enfermedades cardiopulmonares que manifiestan disfunción diastólica.