In vitro Reconstitución de la ubiquitinación bacteriana y eliminación mediada por VCP/p97

Nuestro trabajo revela cómo VCP o p97 actúa como defensor citosólico frente a múltiples patógenos diferentes. Esto desbloquea el potencial de VCP o p97 para aplicaciones terapéuticas y estrategias de bioingeniería. Además de la bioquímica rutinaria, se utilizan microscopía de superresolución, criomagnetometra, crioterapia extraterrestre para determinar cómo estos efectores del huésped se organizan sobre el patógeno para destruirlos.

Para empezar, cultivar la neumonía de estreptococo es seis cepas de serotipo dos durante la noche a 37 grados Celsius con 5% de dióxido de carbono en medio de levadura Todd Hewitt. Inocular una parte del cultivo nocturno en 10 partes de medio fresco de levadura Todd Hewitt e incubar a 37 grados Celsius con 5% de dióxido de carbono hasta que la densidad óptica a 600 nanómetros alcance 0,4. Luego mezclo 900 microlitros de cultivo de estreptococo para neumonía con 600 microlitros de glicerol al 50% y almacenamos el stock de glicerol a menos 80 grados Celsius.