Name: Generación y manipulación genética de organoides cervicales humanos (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-03-10T13:20:00.000+00:00
Duration: 10 min 29 s
Description: Aprenda a generar y manipular genéticamente organoides cervicales humanos mediante digestión enzimática, nucleofección con siRNA y cultivo en matriz de membrana basal. Este protocolo permite estudiar biología de células madre y mecanismos de enfermedad.

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<ol><li>Singh, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+estimates+of+incidence+and+mortality+of+cervical+cancer+in+2020%3Aa+baseline+analysis+of+the+WHO+Global+Cervical+Cancer+Elimination+Initiative%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Glob+Health%22%5BJournal%5D)">Global estimates of incidence and mortality of cervical cancer in 2020:a baseline analysis of the WHO Global Cervical Cancer Elimination Initiative.</a> Lancet Glob Health. 11 (2), e197-e206 (2023).</li>
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<li>Cohen, P. A., Jhingran, A., Oaknin, A., Denny, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cervical+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Cervical cancer.</a> Lancet. 393 (10167), 169-182 (2019).</li>
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<li>Chang, H. K., Seo, S. S., Myong, J. P., Yu, Y. L., Byun, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+and+costs+of+cervical+intraepithelial+neoplasia+in+the+Korean+population%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gynecol+Oncol%22%5BJournal%5D)">Incidence and costs of cervical intraepithelial neoplasia in the Korean population.</a> J Gynecol Oncol. 30 (3), e37(2019).</li>
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<li>Pils, S., Eppel, W., Seemann, R., Natter, C., Ott, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sequential+cervical+length+screening+in+pregnancies+after+loop+excision+of+the+transformation+zone+conisation%3A+a+retrospective+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22BJOG%22%5BJournal%5D)">Sequential cervical length screening in pregnancies after loop excision of the transformation zone conisation: a retrospective analysis.</a> BJOG. 121 (4), 457-462 (2014).</li>
<li>Lee, C. J., Nam, Y., Rim, Y. A., Ju, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+animal+replacement+testing+strategies+using+stem+cell+and+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Advanced animal replacement testing strategies using stem cell and organoids.</a> Int J Stem Cells. 18 (2), 107-125 (2025).</li>
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<li>Jeong, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+genetic+manipulation+of+human+and+mouse+oesophageal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Identification and genetic manipulation of human and mouse oesophageal stem cells.</a> Gut. 65 (7), 1077-1086 (2016).</li>
<li>Myeong, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbial+metabolites+control+self-renewal+and+precancerous+progression+of+human+cervical+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Microbial metabolites control self-renewal and precancerous progression of human cervical stem cells.</a> Nat Commun. 16 (1), 2327(2025).</li>
<li>Rock, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basal+cells+as+stem+cells+of+the+mouse+trachea+and+human+airway+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Basal cells as stem cells of the mouse trachea and human airway epithelium.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (31), 12771-12775 (2009).</li>
<li>Rajkumar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+ubiquitin-specific+protease+11+mitigates+pulmonary+fibrosis+in+human+pluripotent+stem+cell-derived+alveolar+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Loss of ubiquitin-specific protease 11 mitigates pulmonary fibrosis in human pluripotent stem cell-derived alveolar organoids.</a> Int J Stem Cells. 18 (2), 205-213 (2025).</li>
<li>Ko, K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Key+genetic+determinants+driving+esophageal+squamous+cell+carcinoma+initiation+and+immune+evasion%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Key genetic determinants driving esophageal squamous cell carcinoma initiation and immune evasion.</a> Gastroenterol. 165 (3), 613-628 (2023).</li>
<li>Choi, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((YAP1+regulates+esophageal+stem+cells%27+self-renewal+and+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">YAP1 regulates esophageal stem cells' self-renewal and differentiation.</a> Biochem Biophys Res Commun. 726, 150280(2024).</li>
<li>Oh, B., Kim, J., Kim, N., Jeong, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+cancer+organoid+system+to+evaluate+the+cytotoxicity+of+natural+killer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Lung cancer organoid system to evaluate the cytotoxicity of natural killer cells.</a> Int J Stem Cells. 18 (1), 99-106 (2025).</li>
<li>Han, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergistic+drug+combinations+for+cancer+identified+in+a+CRISPR+screen+for+pairwise+genetic+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Synergistic drug combinations for cancer identified in a CRISPR screen for pairwise genetic interactions.</a> Nat Biotechnol. 35 (5), 463-474 (2017).</li>
<li>Jeong, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+KEAP1%2FNFE2L2+mutations+in+the+chemotherapeutic+response+of+patients+with+non-small+cell+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Role of KEAP1/NFE2L2 mutations in the chemotherapeutic response of patients with non-small cell lung cancer.</a> Clin Cancer Res. 26 (1), 274-281 (2020).</li>
<li>Zhang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+defined%2C+syngeneic+organoid+platform+for+developing+combination+therapies+for+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discov%22%5BJournal%5D)">Genetically defined, syngeneic organoid platform for developing combination therapies for ovarian cancer.</a> Cancer Discov. 11 (2), 362-383 (2021).</li>
<li>Lohmussaar, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+organoids+model+cervical+tissue+dynamics+and+viral+oncogenesis+in+cervical+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Patient-derived organoids model cervical tissue dynamics and viral oncogenesis in cervical cancer.</a> Cell Stem Cell. 28 (8), 1380-1396 (2021).</li>
<li>Chumduri, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Opposing+Wnt+signals+regulate+cervical+squamocolumnar+homeostasis+and+emergence+of+metaplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Opposing Wnt signals regulate cervical squamocolumnar homeostasis and emergence of metaplasia.</a> Nat Cell Biol. 23 (2), 184-197 (2021).</li>
<li>He, X. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PTEN-deficient+intestinal+stem+cells+initiate+intestinal+polyposis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">PTEN-deficient intestinal stem cells initiate intestinal polyposis.</a> Nat Genet. 39 (2), 189-198 (2007).</li>
<li>Wang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pten+deletion+leads+to+the+expansion+of+a+prostatic+stem%2Fprogenitor+cell+subpopulation+and+tumor+initiation%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Pten deletion leads to the expansion of a prostatic stem/progenitor cell subpopulation and tumor initiation.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (5), 1480-1485 (2006).</li>
<li>Yanagi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pten+controls+lung+morphogenesis%2C+bronchioalveolar+stem+cells%2C+and+onset+of+lung+adenocarcinomas+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Pten controls lung morphogenesis, bronchioalveolar stem cells, and onset of lung adenocarcinomas in mice.</a> J Clin Invest. 117 (10), 2929-2940 (2007).</li>
<li>Jeong, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+KEAP1%2FNRF2+and+TP53+mutations+in+lung+squamous+cell+carcinoma+development+and+radiation+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discov%22%5BJournal%5D)">Role of KEAP1/NRF2 and TP53 mutations in lung squamous cell carcinoma development and radiation resistance.</a> Cancer Discov. 7 (1), 86-101 (2017).</li>
<li>Liu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+dissection+of+cellular+and+molecular+features+underlying+human+cervical+squamous+cell+carcinoma+initiation+and+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">Single-cell dissection of cellular and molecular features underlying human cervical squamous cell carcinoma initiation and progression.</a> Sci Adv. 9 (4), eadd8977(2023).</li>
<li>Koster, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modelling+Chlamydia+and+HPV+co-infection+in+patient-derived+ectocervix+organoids+reveals+distinct+cellular+reprogramming%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Modelling Chlamydia and HPV co-infection in patient-derived ectocervix organoids reveals distinct cellular reprogramming.</a> Nat Commun. 13 (1), 1030(2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Kit de Célula Primaria 4D-Nucleofector X de P4</td><td>Lonza</td><td>V4XP-4032</td><td></td></tr><tr><td>Placa de sujeción ultrabaja de 96 pozos</td><td>SPL</td><td>39796</td><td></td></tr><tr><td>Filtro celular 40 y micro; m</td><td>SPL</td><td>93040</td><td></td></tr><tr><td>Tubo cónico de 50 mL 500/caja</td><td>SLP</td><td>SPL50050</td><td></td></tr><tr><td>Tubo cónico de 15 ml</td><td>Sarstedt</td><td>62.554.502</td><td></td></tr><tr><td>CryoPure Tube 1,8 mL -blanco</td><td>Sarstedt</td><td>72.379P</td><td></td></tr><tr><td>37 & deg; C, 5 % CO2 y nbsp; incubadora</td><td>Eppendorf</td><td>9734IQ905476</td><td></td></tr><tr><td>Inserto de cultivo celular</td><td>SPL</td><td>37024</td><td></td></tr><tr><td>Amaxa 4D-nucleofector</td><td>Lonza</td><td>AAF-1003X</td><td></td></tr><tr><td>Buffer de bloqueo (2% BCS en DPBS)</td><td>Gibco / Welgene</td><td>BCS: 26010074; DPBS: LB001-02</td><td></td></tr><tr><td>Polvo de Dispase II</td><td>Gibco</td><td>17105041</td><td></td></tr><tr><td>DNAse I</td><td>Enzimomática</td><td>M059L</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>356231</td><td></td></tr><tr><td>Búfer de lisis de los glóbulos rojos</td><td>Biosesang</td><td>R2015</td><td></td></tr><tr><td>TrypLE Express</td><td>Gibco</td><td>12605</td><td></td></tr><tr><td>Amortiguador de lavado (HBSS)</td><td>JBI</td><td>BL003-1</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12 avanzado</td><td>Gibco</td><td>12634028</td><td></td></tr><tr><td>Suplemento GlutaMAX</td><td>Gibco</td><td>35050-061</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina&ndash; Estreptomicina</td><td>Biowest</td><td>L0022-100</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Gibco</td><td>15630-080</td><td></td></tr><tr><td>Suplemento de B27</td><td>Gibco</td><td>17504044</td><td></td></tr><tr><td>Noggin</td><td>PeproTech</td><td>118214</td><td></td></tr><tr><td>N-acetil-l-cisteína</td><td>Sigma</td><td>A9165</td><td></td></tr><tr><td>Y-27632</td><td>Tecnologías STEMCELL</td><td>72307</td><td></td></tr><tr><td>FGF2</td><td>PeproTech</td><td>100-18B-50UG</td><td></td></tr><tr><td>FGF7</td><td>PeproTech</td><td>AF-100-19-250UG</td><td></td></tr><tr><td>A83-01</td><td>Selleckchem</td><td>S7692&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Forskolin</td><td>Sigma</td><td>F6886</td><td></td></tr><tr><td>Neuregulina 1</td><td>PeproTech</td><td>100-03-50UG</td><td></td></tr><tr><td>NGF</td><td>PeproTech</td><td>AF-450-01-100UG</td><td></td></tr><tr><td>R-spondin</td><td>Sinobiológico</td><td>11083-HNAS</td><td></td></tr><tr><td>HGF</td><td>Peprotech</td><td>100-39H-250ug</td><td></td></tr><tr><td>FGF10</td><td>Peprotech</td><td>100-26</td><td></td></tr><tr><td>Petridish 35 mm&nbsp;</td><td>SPL</td><td>10035</td><td></td></tr><tr><td><Fuerte>receta de medios organoides</fuerte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><fuerte>Nombre</fuerte></td><td><fuerte>empresa</fuerte></td><td><fuerte>Número de catálogo</fuerte></td><td><fuerte>concentración</fuerte></td></tr><tr><td>DMEM/F12 avanzado</td><td>Gibco</td><td>12634028</td><td></td></tr><tr><td>Suplemento GlutaMAX</td><td>Gibco</td><td>35050-061</td><td>1x</td></tr><tr><td>Penicilina&ndash; Estreptomicina</td><td>Biowest</td><td>L0022-100</td><td>1x</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Gibco</td><td>15630-080</td><td>10 mM</td></tr><tr><td>Suplemento de B27</td><td>Gibco</td><td>17504044</td><td>1x sin vitamina A</td></tr><tr><td>Noggin</td><td>PeproTech</td><td>118214</td><td>100 ng/ml</td></tr><tr><td>N-acetil-l-cisteína</td><td>Sigma</td><td>A9165</td><td>1 mM</td></tr><tr><td>Y-27632</td><td>Tecnologías STEMCELL</td><td>72307</td><td>10 uM</td></tr><tr><td>FGF2</td><td>PeproTech</td><td>100-18B-50UG</td><td>50 ng/ml</td></tr><tr><td>FGF7</td><td>PeproTech</td><td>AF-100-19-250UG</td><td>25 ng/ml</td></tr><tr><td>FGF10</td><td>Peprotech</td><td>100-26</td><td>100 ng/ml</td></tr><tr><td>A83-01</td><td>Selleckchem</td><td>S7692&nbsp;</td><td>500 nM</td></tr><tr><td>Forskolin</td><td>Sigma</td><td>F6886</td><td>10 & mu; M</td></tr><tr><td>Neuregulina 1</td><td>PeproTech</td><td>100-03-50UG</td><td>50 ng/ml</td></tr><tr><td>NGF</td><td>PeproTech</td><td>AF-450-01-100UG</td><td>20 ng/ml</td></tr><tr><td>R-spondin</td><td>Sinobiológico</td><td>11083-HNAS</td><td>100 ng/ml</td></tr><tr><td>HGF</td><td>Peprotech</td><td>100-39H-250ug</td><td>25 ng/ml</td></tr></tbody></table>

generación y manipulación genética de organoides cervicales humanos

Generation and Genetic Manipulation of Human Cervical Organoids

Generación y manipulación genética de organoides cervicales humanos

Cervical cancer is the fourth most common cancer in women and most frequently affects the uterine ectocervix. The uterine ectocervix is lined by ...

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Investigación

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Medicine

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El modelado del desarrollo del cerebro humano se ha visto obstaculizado debido a la complejidad sin precedentes del tejido epitelial neural. Aquí, se describe un método para la generación robusta de organoides cerebrales para delinear eventos tempranos del desarrollo del cerebro humano y para modelar la microcefalia in vitro.

Generación de derivados de IPSC organoides cerebro humano para modelar los trastornos del neurodesarrollo temprano

Organoides cerebrales representan un nuevo sistema modelo para investigar el cerebro humano desarrollo temprano en vitro. Este artículo proporciona la metodología detallada para generar eficientemente organitas prosencéfalo-tipo dorsal homogéneo de células pluripotentes inducidas humanas incluyendo pasos críticos de la caracterización y validación.

Generación de organoides Cerebral prosencéfalo-tipo estandarizadas y reproducibles de humanos inducida por células madre pluripotentes

Se presenta un protocolo para generar organoides endometriales primarios humanos que consisten en células epiteliales y estromales y retienen las características del tejido endometrial nativo. Este protocolo describe los métodos desde la adquisición de tejido uterino hasta el procesamiento histológico de organoides endometriales.

Generación de organoides endometriales primarios humanos multicelulares

Este protocolo permite la diferenciación de células pluripotentes humanas en organoides intestinales. El protocolo imita el desarrollo humano normal mediante la diferenciación de células en una población de endodermo definitivo, endodermo del intestino posterior y luego epitelio intestinal. Esto hace que el protocolo sea adecuado para estudiar tanto el desarrollo intestinal como las aplicaciones de modelización de enfermedades.

Generación de organoides intestinales derivados de hiPSC para aplicaciones de modelización del desarrollo y de enfermedades

Presentamos protocolos detallados para la generación y caracterización de modelos de desarrollo neocortical basados en células madre pluripotentes inducidas humanas (hIPSC) 2D y 3D, así como metodologías complementarias que permiten el análisis cualitativo y cuantitativo de la biogénesis y función del cilio primario (PC).

Modelos 2D y 3D basados en células madre pluripotentes inducidas por humanos para diseccionar la participación del cilio primario durante el desarrollo neocortical

Aquí, se describen métodos detallados para generar, mantener y caracterizar organoides de intestino delgado y colon derivados de células madre pluripotentes humanas. Estos métodos están diseñados para mejorar la reproducibilidad, ampliar la escalabilidad y disminuir el tiempo de trabajo necesario para el recubrimiento y el paso de organoides.

Generación, mantenimiento y caracterización de organoides intestinales y colónicos derivados de células madre pluripotentes humanas

Los organoides cerebrales proporcionan oportunidades sin precedentes para estudiar el desarrollo de órganos y la patología de enfermedades humanas. Aunque se ha logrado un gran éxito con los sistemas de cultivo de organoides cerebrales, todavía existen dificultades operativas en la aplicación de esta tecnología. El presente protocolo describe un procedimiento organoide cerebral que facilita el cambio medio y la transferencia de organoides.

Facilitar el cultivo de organoides cerebrales a través de la iluminación lateral de luz suave

La electroporación de organoides cerebrales de primates proporciona un enfoque preciso y eficiente para introducir modificaciones genéticas transitorias en diferentes tipos de progenitores y neuronas en un sistema modelo cercano al desarrollo (pato)fisiológico del neocórtex de primates. Esto permite el estudio de los procesos evolutivos y del desarrollo neurológico y también se puede aplicar para el modelado de enfermedades.

Microinyección dirigida y electroporación de organoides cerebrales de primates para la modificación genética

Aquí, presentamos un protocolo para generar organoides intestinales de ratas y usarlos en varias aplicaciones posteriores. Las ratas suelen ser un modelo preclínico preferido, y el robusto sistema de organoides intestinales satisface la necesidad de un sistema in vitro para acompañar los estudios in vivo .

Generación y manipulación de organoides intestinales de rata

Este protocolo presenta un método para generar organoides vasculares utilizando células madre pluripotentes humanas.

Generación de organoides vasculares a partir de células madre pluripotentes inducidas por humanos

Aprenda a generar y manipular genéticamente organoides cervicales humanos mediante digestión enzimática, nucleofección con siRNA y cultivo en matriz de membrana basal. Este protocolo permite estudiar biología de células madre y mecanismos de enfermedad.

Generación y manipulación genética de organoides cervicales humanos

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