Name: Aislamiento de pericitos de tejido cortical de ratón usando FACS para secuenciación unicelular (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-01-30T14:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 50 s
Description: Aprende a aislar pericitos de corteza cerebral de ratón mediante FACS con marcadores CD13+/CD31- para secuenciación unicelular. Este protocolo optimizado mejora la viabilidad celular y permite estudiar la heterogeneidad pericitaria en enfermedades neurovasculares.

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<ol><li>Payne, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pericyte+microenvironment+during+vascular+development%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">The pericyte microenvironment during vascular development.</a> Microcirculation. 26 (8), e12554(2019).</li>
<li>Ma, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier-associated+pericytes+internalize+and+clear+aggregated+amyloid-%CE%B242+by+LRP1-dependent+apolipoprotein+E+isoform-specific+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier-associated pericytes internalize and clear aggregated amyloid-β42 by LRP1-dependent apolipoprotein E isoform-specific mechanism.</a> Mol Neurodegener. 13 (1), 57(2018).</li>
<li>Mäe, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+analysis+of+blood-brain+barrier+response+to+pericyte+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Single-cell analysis of blood-brain barrier response to pericyte loss.</a> Circ Res. 128 (4), e46-e62 (2021).</li>
<li>Li, P., Fan, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pericyte+loss+in+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Pericyte loss in diseases.</a> Cells. 12 (15), 1931(2023).</li>
<li>Oliveira, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cultured+brain+pericytes+adopt+an+immature+phenotype+and+require+endothelial+cells+for+expression+of+canonical+markers+and+ECM+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Cultured brain pericytes adopt an immature phenotype and require endothelial cells for expression of canonical markers and ECM genes.</a> Front Cell Neurosci. 17, 1165887(2023).</li>
<li>Yao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Challenges+in+pericyte+research%3Apericyte-specific+and+subtype-specific+markers%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Stroke+Res%22%5BJournal%5D)">Challenges in pericyte research:pericyte-specific and subtype-specific markers.</a> Transl Stroke Res. 13 (6), 863-865 (2022).</li>
<li>Vanlandewijck, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+molecular+atlas+of+cell+types+and+zonation+in+the+brain+vasculature%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A molecular atlas of cell types and zonation in the brain vasculature.</a> Nature. 554 (7693), 475-480 (2018).</li>
<li>Alliot, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pericytes+and+periendothelial+cells+of+brain+parenchyma+vessels+co-express+aminopeptidase+N%2C+aminopeptidase+A%2C+and+nestin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Pericytes and periendothelial cells of brain parenchyma vessels co-express aminopeptidase N, aminopeptidase A, and nestin.</a> J Neurosci Res. 58 (3), 367-378 (1999).</li>
<li>Huang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+culture%2C+and+characterization+of+primary+endothelial+cells+and+pericytes+from+mouse+sciatic+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Isolation, culture, and characterization of primary endothelial cells and pericytes from mouse sciatic nerve.</a> J Neurosci Methods. 416, 110366(2025).</li>
<li>Armulik, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pericytes+regulate+the+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Pericytes regulate the blood-brain barrier.</a> Nature. 468 (7323), 557-561 (2010).</li>
<li>Crouch, E. E., Doetsch, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FACS+isolation+of+endothelial+cells+and+pericytes+from+mouse+brain+microregions%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">FACS isolation of endothelial cells and pericytes from mouse brain microregions.</a> Nat Protoc. 13 (4), 738-751 (2018).</li>
<li>Eichhorn, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+tissue+factor+and+platelet%2Fleukocyte+markers+on+extracellular+vesicles+reflect+platelet-leukocyte+interaction+in+severe+COVID-19%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Expression of tissue factor and platelet/leukocyte markers on extracellular vesicles reflect platelet-leukocyte interaction in severe COVID-19.</a> Int J Mol Sci. 24 (23), 16886(2023).</li>
<li>Smyth, L. C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Markers+for+human+brain+pericytes+and+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Chem+Neuroanat%22%5BJournal%5D)">Markers for human brain pericytes and smooth muscle cells.</a> J Chem Neuroanat. 92, 48-60 (2018).</li>
<li>Wu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epitranscriptomic+mechanisms+of+N6-methyladenosine+methylation+regulating+mammalian+hypertension+development+by+determined+spontaneously+hypertensive+rats+pericytes%5BTitle%5D)+AND+%22Epigenomics%22%5BJournal%5D)">Epitranscriptomic mechanisms of N6-methyladenosine methylation regulating mammalian hypertension development by determined spontaneously hypertensive rats pericytes.</a> Epigenomics. 11 (12), 1359-1370 (2019).</li>
<li>Mirzadeh, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+subventricular+zone+en-face%3Awholemount+staining+and+ependymal+flow%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">The subventricular zone en-face:wholemount staining and ependymal flow.</a> J. Vis. Exp. (39), e1938(2010).</li>
<li>Zappaterra, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+cerebrospinal+fluid+from+rodent+embryos+for+use+with+dissected+cerebral+cortical+explants%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of cerebrospinal fluid from rodent embryos for use with dissected cerebral cortical explants.</a> J. Vis. Exp. (73), e50333(2013).</li>
<li>Zou, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single-cell+transcriptomic+atlas+of+human+skin+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">A single-cell transcriptomic atlas of human skin aging.</a> Dev Cell. 56 (3), 383-397.e8 (2021).</li>
<li>Bahl, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+deep+learning+to+quantify+neuronal+activation+from+single-cell+and+spatial+transcriptomic+data%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Using deep learning to quantify neuronal activation from single-cell and spatial transcriptomic data.</a> Nat Commun. 15 (1), 779(2024).</li>
<li>Klein, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Droplet+barcoding+for+single-cell+transcriptomics+applied+to+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Droplet barcoding for single-cell transcriptomics applied to embryonic stem cells.</a> Cell. 161 (5), 1187-1201 (2015).</li>
<li>Zheng, G. X. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Massively+parallel+digital+transcriptional+profiling+of+single+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Massively parallel digital transcriptional profiling of single cells.</a> Nat Commun. 8 (1), 14049(2017).</li>
<li>Song, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptomic+comparison+of+human+and+mouse+brain+microvessels%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Transcriptomic comparison of human and mouse brain microvessels.</a> Sci Rep. 10 (1), 12358(2020).</li>
<li>He, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+the+brain+mural+cell+transcriptome%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Analysis of the brain mural cell transcriptome.</a> Sci Rep. 6, 35108(2016).</li>
<li>Stebbins, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+pluripotent+stem+cell-derived+brain+pericyte-like+cells+induce+blood-brain+barrier+properties%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">Human pluripotent stem cell-derived brain pericyte-like cells induce blood-brain barrier properties.</a> Sci Adv. 5 (3), eaau7375(2019).</li>
<li>Crouch, E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regional+and+stage-specific+effects+of+prospectively+purified+vascular+cells+on+the+adult+V-SVZ+neural+stem+cell+lineage%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Regional and stage-specific effects of prospectively purified vascular cells on the adult V-SVZ neural stem cell lineage.</a> J Neurosci. 35 (11), 4528-4539 (2015).</li>
<li>Ruan, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Screening+and+identification+of+muscle+pericyte+selective+markers%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Screening and identification of muscle pericyte selective markers.</a> Sci Rep. 15 (1), 28874(2025).</li>
<li>Dias, D. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pericyte-derived+fibrotic+scarring+is+conserved+across+diverse+central+nervous+system+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Pericyte-derived fibrotic scarring is conserved across diverse central nervous system lesions.</a> Nat Commun. 12 (1), 5501(2021).</li>
<li>Thalgott, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+characterization+of+pericyte+dysfunction+in+mouse+brain+using+functional+ultrasound+localization+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Non-invasive characterization of pericyte dysfunction in mouse brain using functional ultrasound localization microscopy.</a> Nat Biomed Eng. , (2025).</li>
<li>Grant, R. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organizational+hierarchy+and+structural+diversity+of+microvascular+pericytes+in+adult+mouse+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Organizational hierarchy and structural diversity of microvascular pericytes in adult mouse cortex.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 39 (3), 411-425 (2019).</li>
<li>O'flanagan, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissociation+of+solid+tumor+tissues+with+cold+active+protease+for+single-cell+RNA-seq+minimizes+conserved+collagenase-associated+stress+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biol%22%5BJournal%5D)">Dissociation of solid tumor tissues with cold active protease for single-cell RNA-seq minimizes conserved collagenase-associated stress responses.</a> Genome Biol. 20 (1), 210(2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td><td>Gibicol</td><td>A5669701</td><td>Alicuota y almacene a -20&deg;C; se puede almacenar a 4&deg;C durante hasta 1 semana después de descongelarlo</td></tr><tr><td>Phosphate Buffered Saline(10&times;PBS, pH 7.4)</td><td>Life Technologies</td><td>70011-044</td><td>Diluya antes de usar para lavar células</td></tr><tr><td>D-(+)-Glucose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7021-1KG</td><td>Para preparar el tampón energético celular</td></tr><tr><td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A1933-25g</td><td>Protege las células y previene la adhesión</td></tr><tr><td>Dulbecco's&nbsp; Phosphate Buffered Saline (DPBS,1&times;)</td><td>Gibco</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>Hanks' Balanced Salt Solution (HBSS,1&times;)</td><td>Life Technologies</td><td>14175-095</td><td>Para lavar y resuspender células</td></tr><tr><td>UltraPure DNase/RNase-Free Distilled Water</td><td>Life Technologies</td><td>10977-015</td><td>Para preparar sistemas de reacción libres de nucleasas</td></tr><tr><td>Collagenase/Dispase</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>11097113001-100mg</td><td>Para la digestión de tejidos y disociación celular; alicue y almacene a -20&deg;C</td></tr><tr><td>DNaseI(RNase-Free)</td><td>TIANGEN</td><td>RT411-1500U</td><td>Previene la agregación de ADN; alicue y almacene a -20&deg;C</td></tr><tr><td>Percoll</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1644-100ML</td><td>Para la separación celular; almacene a 4&deg;C</td></tr><tr><td>FITC Rat Anti-Mouse CD13</td><td>BD Biosciences</td><td>558744</td><td>Conjugado fluorescente; almacene protegido de la luz a 4&deg;C durante hasta 1 mes</td></tr><tr><td>APC Rat Anti-Mouse CD31</td><td>BD Biosciences</td><td>551262</td><td>Almacene protegido de la luz a 4&deg;C durante varios meses</td></tr><tr><td>PE Rat Anti-Mouse CD41</td><td>BD Biosciences</td><td>558040</td><td>Almacene protegido de la luz a 4&deg;C durante varios meses</td></tr><tr><td>PE Rat Anti-Mouse CD45</td><td>BD Biosciences</td><td>553081</td><td>Almacene protegido de la luz a 4&deg;C durante varios meses</td></tr><tr><td>FITC Rat IgG1, &kappa; Isotype Control</td><td>BD Biosciences</td><td>552916</td><td>Control de fluorescencia; almacene protegido de la luz a 4&deg;C</td></tr><tr><td>APC Rat IgG2a, &kappa; Isotype Control</td><td>BD Biosciences</td><td>553932</td><td>Almacene protegido de la luz a 4&deg;C durante varios meses</td></tr><tr><td>PE Rat IgG2b, &kappa; Isotype Control</td><td>BD Biosciences</td><td>553989</td><td>Almacene protegido de la luz a 4&deg;C durante varios meses</td></tr><tr><td>RNase AWAY Decontamination Reagent</td><td>Ambion</td><td>10328011</td><td>Para eliminar la contaminación por RNasa</td></tr><tr><td>Purified Rat Anti-Mouse CD16/CD32 (Mouse BD Fc Block)</td><td>BD Pharmingen</td><td>553141</td><td>Previene la unión no específica de anticuerpos</td></tr><tr><td>7-Aminoactinomycin D (7-AAD)</td><td>BD Pharmingen</td><td>559925</td><td>Para la exclusión de células muertas.</td></tr><tr><td>2,2,2-Tribromoethanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T48402-25g</td><td>Para la preparación de la solución de Tribromoetanol al 1.25% (p/v)</td></tr><tr><td>2-Methyl-2-butanol</td><td>Psaitong</td><td>M20008-500mL</td><td>Para la preparación de la solución de Tribromoetanol al 1.25% (p/v)</td></tr><tr><td>C57BL/6 mouse</td><td>Jiangsu Huachuang Xinnuo Pharmaceutical Technology Co., Ltd.</td><td>SYXK (Su) 2020-0041</td><td></td></tr><tr><td>50 mL centrifuge tube</td><td>Corning</td><td>430291</td><td></td></tr><tr><td>15 mL centrifuge tube</td><td>Corning</td><td>430791</td><td></td></tr><tr><td>cell cluture dish 100mm&times;20mm</td><td>Corning</td><td>430167</td><td></td></tr><tr><td>Cell Ranger</td><td></td><td>3.1.0/4.0.0</td><td>Software de análisis de datos de secuenciación de células individuales</td></tr><tr><td>Loupe Cell Browser</td><td></td><td>4.1</td><td>Navegador de células</td></tr><tr><td>STAR</td><td></td><td>2.5.1b</td><td>Alineación de ARN</td></tr><tr><td>irlbpy</td><td></td><td>-</td><td>Análisis de componentes principales</td></tr><tr><td>tsne</td><td></td><td>0.15</td><td>Análisis Barnes-Hut t-SNE (t-Distribución Estocástica de Vecinos Embebidos)</td></tr><tr><td>k-means</td><td></td><td>0.17</td><td>Agrupamiento K-Means</td></tr><tr><td>graph-based clustering</td><td></td><td>0.17</td><td>Agrupamiento basado en grafos</td></tr><tr><td>FastQC</td><td></td><td>v0.11.2</td><td>Control de calidad de datos (QC)</td></tr></tbody></table>

aislamiento de pericitos de tejido cortical de ratón usando facs para secuenciación unicelular

Isolation of Pericytes from Mouse Cortical Tissue Using FACS for Single-cell Sequencing

Aislamiento de pericitos de tejido cortical de ratón usando FACS para secuenciación unicelular

Pericytes, as a core component of the neurovascular unit, play a vital role in maintaining the integrity of the blood-brain barrier and regulating ...

isolation-pericytes-from-mouse-cortical-tissue-using-facs-for-single

Research

Investigación

JoVE Journal

Biochemistry

Bioquímica

Este video muestra un método para aislar pericitos cerebrales del cerebro de un ratón. Las células aisladas se cultivan en medios específicos de pericitos para promover la proliferación de pericitos.

Aislamiento y cultivo de pericitos cerebrales de ratón

El comportamiento de los fibroblastos subyace en un espectro de entidades clínicas, pero siguen estando mal caracterizadas, en gran parte debido a su heterogeneidad inherente. La investigación tradicional de fibroblastos se basa en la manipulación in vitro, enmascarando el comportamiento de los fibroblastos in vivo. Describimos un protocolo basado en FACS para el aislamiento de fibroblastos de piel de ratón que no requiere cultivo celular.

Murino fibroblastos dérmicos aislamiento por FACS

tejido cardíaco humano alberga poblaciones de células precursoras multipotentes perivasculares que pueden ser adecuados para la regeneración miocárdica. La técnica descrita aquí permite el aislamiento simultáneo y purificación de dos poblaciones de células estromales multipotentes asociados con vasos nativos sangre, es decir CD146 + CD34 - pericitos y CD34 + CD146 - células adventicias, desde el miocardio humano.

Aislamiento de Perivasculares Multipotentes poblaciones de células precursoras de Cardíaca Tejido humano

Este trabajo describe un protocolo basado en FACS que permite el aislamiento fácil y simultáneo de pericitos tipo I y tipo II de los músculos esqueléticos.

Aislamiento de Pericitos Tipo I y Tipo II de Músculos Esqueléticos de Ratón

Hemos optimizado un protocolo para aislar y purificar los pericitas cardíacos murinos para la investigación básica y la investigación de su biología y potencial terapéutico.

Aislamiento y Purificación de Pericitas Cardíacos Murinos

Proporcionamos un protocolo para el aislamiento de la microglia de diferentes regiones diseccionadas de un hemisferio cerebral de ratón adulto, seguido de la preparación de la biblioteca semiautomática para la secuenciación profunda de ARN de una sola célula de transcriptomes de longitud completa. Este método ayudará a dilucidar la heterogeneidad funcional de la microglia en salud y enfermedad.

Aislamiento de microglia específica de la región del hemisferio cerebral de un ratón adulto para la secuenciación profunda del ARN de una sola célula

Presentamos un protocolo para la extracción de pericitas cerebrales murinas. Basado en una extracción de pericita orientada al enriquecimiento libre de antibióticos, este protocolo es una herramienta valiosa para estudios in vitro que proporcionan alta pureza y alto rendimiento, disminuyendo así el número de animales experimentales utilizados.

Un método de alta salida para aislar los pericytes cerebrales del ratón

La obtención de una población pura de fibroblastos es crucial para estudiar su papel en la reparación de heridas y fibrosis. Aquí se describe un método detallado para aislar fibroblastos y miofibroblastos de corazones de ratón no lesionados y lesionados seguidos de la caracterización de su pureza y funcionalidad por inmunofluorescencia, RTPCR, clasificación celular asistida por fluorescencia, y contracción del gel de colágeno.

Aislamiento y caracterización de fibroblastos cardíacos adultos y miofibroblastos

Los pericitos capilares cerebrales son actores esenciales en la regulación de las propiedades de la barrera hematoencefálica y el flujo sanguíneo. Este protocolo describe cómo los pericitos capilares cerebrales pueden ser aislados, cultivados, caracterizados con respecto al tipo de célula y aplicados para investigaciones de señalización de calcio intracelular con sondas fluorescentes.

Cultivo de pericitos capilares cerebrales para mediciones de calcio citosólico y estudios de imágenes de calcio

Presentamos un método para aislar células endoteliales y núcleos de la luz de arterias carótidas de ratón expuestas a condiciones de flujo estables o alteradas para realizar experimentos ómicos unicelulares.

Aislamiento de células endoteliales de la luz de arterias carótidas de ratón para experimentos multiómicos unicelulares

Este protocolo describe un método para el aislamiento de células endoteliales retinianas postnatales murinas optimizadas para el rendimiento, la pureza y la viabilidad celular. Estas células son adecuadas para los enfoques de secuenciación de próxima generación.

Aislamiento de células endoteliales retinianas murinas para secuenciación de próxima generación

Aprende a aislar pericitos de corteza cerebral de ratón mediante FACS con marcadores CD13+/CD31- para secuenciación unicelular. Este protocolo optimizado mejora la viabilidad celular y permite estudiar la heterogeneidad pericitaria en enfermedades neurovasculares.

Aislamiento de pericitos de tejido cortical de ratón usando FACS para secuenciación unicelular

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