Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.
Artículo de investigación
* These authors contributed equally
Este estudio evalúa los efectos de los Gránulos Antiespasmódicos Gualou Guizhi (GLGZ) sobre la espasticidad inducida por lesión medular (LM) utilizando métodos conductuales, biomecánicos, de imagen e histológicos, y explora los mecanismos relacionados con la PANoptosis.
La espasticidad muscular tras una lesión medular (LME) afecta gravemente a la calidad de vida, con tratamientos eficaces limitados. Los Gránulos Antiespasmódicos Gualou Guizhi (GLGZ), una formulación de medicina tradicional china (MTC) desarrollada por hospitales, pueden aliviar los espasmos. Este estudio tenía como objetivo evaluar la eficacia de GLGZ en la espasticidad inducida por LME y su asociación con la PANoptosis (una novedosa muerte celular programada que implica apoptosis, necroptosis y pirooptosis).
Se utilizaron ratas Sprague-Dawley machos de peso entre 180 y 200 g. La lesión medular se indujo mediante el método de caída de peso de Allen. Las ratas modelo exitosas fueron asignadas aleatoriamente a un grupo modelo o a uno de los grupos de dosis GLGZ: alta, media o baja. Las ratas falsas se sometieron a laminectomía sin lesión medular. Las intervenciones duraron 4 semanas. Tras la intervención, se evaluó la función motora de las extremidades utilizando la escala de Basso-Beattie-Bresnahan (BBB). La rigidez del músculo femoral se evaluó mediante elastografía de onda de corte por ultrasonido (SWE), mientras que la integridad de la médula espinal se determinó mediante resonancia magnética (RM). Se realizaron tinciones rápidas de azul por hematoxilina-eosina (HE), Nissl y Luxol para observar alteraciones histopatológicas. Se utilizó tinción por inmunofluorescencia multiplex para marcar la proteína moteante asociada a la apoptosis que contiene una CARD (ASC, verde), Caspasa-8 (naranja) y serina/treonina-proteína quinasa 3 (RIPK3, amarillo) interactuante con receptores para evaluar la PANoptosis.
GLGZ mejoró las puntuaciones BBB dependientes de la dosis: sham (21,00 ± 0,00), modelo (5,8 ± 1,1), dosis altas (10,6 ± 1,3), dosis medias (8,5 ± 1,2), dosis bajas (7,1 ± 1,0). La SWE mostró reducción de rigidez muscular: modelo (6,68 ± 0,74 m/s), dosis alta (2,19 ± 0,36 m/s, P < 0,001), dosis media (3,04 ± 0,45 m/s, P = 0,002), dosis baja (4,08 ± 0,65 m/s, P = 0,031) frente al modelo. En comparación con el grupo modelo (3,65 ± 1,03 mm²), GLGZ redujo de forma dependiente del tamaño de la lesión medular en todos los grupos de dosis (todos P < 0,05), (1,33 ± 0,79 mm² en dosis altas, 1,94 ± 0,67 mm² en dosis media, 2,50 ± 0,79 mm² en el grupo de dosis baja. La histología reveló que GLGZ preservaba neuronas y promovía la reparación de mielina. GLGZ redujo la expresión de ASC, Caspasa-8 y RIPK3 de forma dependiente de la dosis.
El espasmo muscular es una complicación común de la lesión medular (LME), que afecta gravemente a la calidad de vida de los pacientes. Su proceso patológico incluye lesiones mecánicas iniciales, inflamación secundaria, estrés oxidativo, apoptosis y deterioro de la regeneración nerviosa, entreotros 1,2. Los tratamientos actuales (descompresión quirúrgica, farmacoterapia, rehabilitación) tienen eficacia limitada, con la medicación a largo plazo causando efectos secundarios como resistenciaa los fármacos 3. Por lo tanto, explorar mecanismos y tratamientos ....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Modelado animal
Este estudio fue aprobado por el Comité de Ética del Segundo Hospital Afiliado de la Universidad de Medicina Tradicional China de Fujian (Aprobación nº FJPSPH-IAEC2024114) y se llevó a cabo en cumplimiento de las directrices de bienestar animal. Los machos de ratas Sprague-Dawley que pesaban entre 180 y 200 g fueron alojadas en condiciones controladas a 22-26°C y una humedad del 40-70%. La LME se indujo mediante el método Allen de caída de peso10: anestesia inhalada de isoflurano al 3-4%, incisión en la línea media en T10, exposición de los segmentos T9-T11, laminectomía (dur....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Marcador BBB
La puntuación BBB del grupo falso fue de 21,00 ± 0,00, significativamente superior a la del modelo (5,8 ± 1,1, P < 0,001). Las puntuaciones de BBB aumentaron dependiente de la dosis de GLGZ: dosis alta (10,6 ± 1,3, P < 0,001), dosis media (8,5 ± 1,2, P = 0,003), dosis baja (7,1 ± 1,0, P = 0,028) frente al modelo (Figura 1).
Análisis de la elastografía de onda cortante de la rigidez del rect.......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Este estudio evaluó sistemáticamente los efectos mejoradores del GLGZ sobre la espasticidad muscular en ratas con LME y exploró su relación con la neuroprotección y la PANoptosis. Los resultados indicaron que el GLGZ podría mejorar las puntuaciones de BBB y reducir la rigidez muscular en ratas con lesión medular de forma dependiente de la dosis. El estudio también encontró que el mecanismo de acción de GLGZ podría estar relacionado con la neuroprotección, la reparación de mielina y la in.......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Los autores no tienen conflictos de interés que declarar.
Este trabajo fue financiado por el Proyecto Principal de Investigación Científica de la Comisión Provincial de Salud de Fujian (2024ZD01006), el Proyecto Abierto del Instituto de Investigación Clínica en 2023 (LC2023001-Instituto), la Fundación de Ciencias Naturales de la Provincia de Fujian (2024J01733), el Proyecto de Investigación en Innovación Médica de la Comisión de Salud de Fujian (2022CXA052), y el Proyecto de Reclutamiento de Liderazgo basado en listas de los principales proyectos de innovación en ciencia y tecnología en la Universidad de Medicina Tradicional China de Fujian (XJB2022003-3).
....Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Etanol anhidro | 240403A1 | Deshidratación | |
| Etanol anhidro | 241101A1 | Tinción | |
| agente de recubrimiento atenuado por antifluorescencia (que contiene DAPI) y nbsp; | MA0221 | Tinción por inmunofluorescencia | |
| Anticuerpo ASC | Bs-6741R | Análisis de PANoptosis (1:300) | |
| Anticuerpo de caspasa-8 | 13423-1-AP | Análisis de PANoptosis (1:400) | |
| Microscopio de fluorescencia | NIKON | ECLIPSECi-L | |
| Escáner digital de diapositivas de vidrio totalmente automático | GCell-60 | Escáner de diapositivas | |
| kit de hematoxilina-eosina | R23718 | Tinción por hematoxilina-eosina (HE) | |
| Software de análisis de imágenes | NIH | ImageJ 1.53k | |
| Luxol Fast Blue | R23193 | Tinción Luxel Fast Blue-Cresyl Violet | |
| Escáner de resonancia magnética | Bruker | 7.0T | |
| Kit de tinción por fluorescencia múltiple | 240522 | Tinción por inmunofluorescencia | |
| Kit de tinción mieloide | G3245 | Tinción mieloide | |
| Neutral bálsam | MB9899 | Montaje tras el tinte | |
| Kit de tinte Nissl | R23093 | Tinción Nissl | |
| Anticuerpo RIPK3 | Bs-3551R | Análisis de PANoptosis (1:400) | |
| SPSS 22.0 | software de análisis estadístico | ||
| Ratas Sprague-Dawley... | Empresa biotecnológica Hangyi en Fuzhou | ||
| Ácido tartárico, tripolifosfato sódico | 10019418 | Tinción | |
| Sistema de ultrasonido | SIEMENS Acuson | Sonda de matriz lineal (18L6) | |
| xileno | 240904A2 | Tinción |
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.