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<table><tbody><tr><td>4&prime;,6-Diamidino-2-phenylindole (DAPI)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>62248</td><td>diluted 1:2000 para inmunotinción</td></tr><tr><td>50 mL Tubo de centrífuga filtro (0.22 &micro;m)</td><td>CellTreat</td><td>229710</td><td>Para la preparación de soluciones estériles</td></tr><tr><td>Unidades de filtro de 500 mL</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>566-0020</td><td>Para la preparación de medio estéril</td></tr><tr><td>Accutase</td><td>Sigma</td><td>A6964</td><td></td></tr><tr><td>Anfotericina B</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>15290026</td><td></td></tr><tr><td>Extracto pituitario bovino</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>13028014</td><td></td></tr><tr><td>Albúmina sérica bovina</td><td>Sigma</td><td>A7906</td><td></td></tr><tr><td>Toxina del cólera</td><td>Sigma</td><td>C8052</td><td></td></tr><tr><td>Colágeno I</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A1048301</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio confocal</td><td>Nikon</td><td></td><td>Microscopio Ti2 invertido con disco giratorio W1 con cámara sCMOS Hamamatsu</td></tr><tr><td>Insertos Corning Transwell</td><td>Sigma</td><td>CLS3460</td><td></td></tr><tr><td>Diethylenetriamine NONOate (DETA-NONOate)</td><td>Cayman Chemical</td><td>82120</td><td></td></tr><tr><td>Medio DMEM/F-12</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11330032</td><td></td></tr><tr><td>DNAsa I</td><td>Sigma</td><td>DN25</td><td></td></tr><tr><td>Suero fetal bovino</td><td>Sigma</td><td>F4135</td><td></td></tr><tr><td>Cocktail inhibidor de proteasas Halt 1X</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>1860932</td><td></td></tr><tr><td>Mezcla de nutrientes Ham's F1-12</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11765054</td><td></td></tr><tr><td>Solución de insulina</td><td>Sigma</td><td>I0516</td><td></td></tr><tr><td>Clorhidrato de isoproterenol</td><td>Sigma</td><td>I6504</td><td></td></tr><tr><td>Medio libre de suero para queratinocitos</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>17005042</td><td></td></tr><tr><td>Factor de crecimiento epidérmico murino</td><td>Sigma</td><td>E4127</td><td></td></tr><tr><td>N(G)-Nitro-L-arginina metiléster (L-NAME)</td><td>Sigma</td><td>N5751</td><td></td></tr><tr><td>NuSerum</td><td>Corning</td><td>355100</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina-estreptomicina</td><td>Sigma</td><td>P4333</td><td></td></tr><tr><td>Tampon fosfato salino (PBS)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>Kit de ensayo de proteína Pierce BCA</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>23227</td><td></td></tr><tr><td>Pronasa</td><td>Sigma</td><td>10165921001</td><td></td></tr><tr><td>Ácido retinoico</td><td>Sigma</td><td>R2625</td><td></td></tr><tr><td>Inhibidor de la Rho quinasa (Y-27632 clorhidrato)</td><td>Cayman Chemical</td><td>TOM-C837Z37</td><td></td></tr><tr><td>Tampon RIPA</td><td>Sigma</td><td>R0278</td><td></td></tr><tr><td>Medio RPMI-1640</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11875093</td><td></td></tr><tr><td>Nitrito de sodio&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>S2252</td><td></td></tr><tr><td>Transferrina</td><td>Sigma</td><td>T8158</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo anti-tubulina alfa acetilada (ratón)</td><td>Sigma</td><td>T6793</td><td>diluted 1:200 para inmunotinción</td></tr><tr><td>Anticuerpo anti-FoxJ1 alfa (ratón)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>14-9965-80</td><td>diluted 1:200 para inmunotinción</td></tr><tr><td>Anticuerpo secundario Cy3 anti-ratón</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A10521</td><td>diluted 1:1000 para inmunotinción</td></tr><tr><td>Inhibidor gamma-secretasa IX (DAPT)</td><td>Sigma</td><td>D5942</td><td></td></tr></tbody></table>

medición de la producción de óxido nítrico en cultivos celulares epiteliales traqueales de ratón diferenciados en la interfaz aire-líquido

Measurement of Nitric Oxide Production in Mouse Tracheal Epithelial Cell Cultures Differentiated at the Air Liquid Interface

Medición de la producción de óxido nítrico en cultivos celulares epiteliales traqueales de ratón diferenciados en la interfaz aire-líquido

Airway epithelial cultures differentiated at the air&#8211;liquid interface (ALI) provide a physiologically relevant model to study nitric oxide (NO) ...

measurement-nitric-oxide-production-mouse-tracheal-epithelial-cell

Research

Investigación

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Células epiteliales pulmonares pueden ser aislados de las vías respiratorias de los ratones y se cultivan en la interfaz aire-líquido como un modelo de epitelio respiratorio diferenciados. Un protocolo es descrito para el aislamiento, el cultivo y la exposición de estas células al humo del cigarrillo convencional, con el fin de estudiar la respuesta molecular a esta toxina ambiental.

Aislamiento de ratón las células epiteliales respiratorias y la exposición al humo del cigarrillo Experimental de la interfaz de aire líquido

Los ratones transgénicos han sido extremadamente útiles en atribuir la función fisiológica de los genes. Como este tipo de investigación, en general, y los estudios funcionales de las vías respiratorias, en particular, han experimentado un notable cambio hacia modelos murinos. A continuación presentamos los protocolos...

Mediciones in vitro de la constricción de la tráquea Utilizando ratones

El endotelio glicocalix / endotelial capa superficial está muy bien estudiada mediante microscopía intravital. Microscopía intravital es técnicamente difícil en un órgano en movimiento, como el pulmón. Se demuestra cómo simultánea campo claro y microscopía de fluorescencia se puede usar para estimar el espesor de capa de la superficie endotelial en un libremente...

Medición in vivo de la capa de ratón pulmonar superficie endotelial

Células epiteliales nasales, obtenidas mediante biopsia raspadura superficial de voluntarios humanos, se expanden y se transfieren a insertos de cultivo de tejidos. Al llegar a la confluencia, las células se cultivan en la interfase aire-líquido, produciendo cultivos de células ciliadas y no ciliadas. Cultivos de células epiteliales nasales diferenciados proporcionan modelos experimentales viables para el estudio de la mucosa respiratoria.

El cultivo de células humanas epiteliales nasales en la interfase aire líquido

En este artículo, las células endoteliales pulmonares primarias se aislaron y cultivaron de ratones neonatos.

Aislamiento de células endoteliales pulmonares primarias de ratón

Los avances recientes en los protocolos de diferenciación de células madre pluripotentes inducidas por humanos permiten la derivación gradual de tipos de células específicas de órganos. Aquí, proporcionamos pasos detallados para el mantenimiento y la expansión de las células basales de las vías respiratorias derivadas de iPSC y su diferenciación en un epitelio mucociliar en cultivos de interfaz aire-líquido.

Generación de cultivos de interfaz aire-líquido de células epiteliales de las vías respiratorias a partir de células madre pluripotentes humanas

Aquí se presenta un método reproducible, asequible y robusto para el aislamiento y la expansión de células epiteliales bronquiales primarias para biobancos a largo plazo y la generación de células epiteliales diferenciadas por cultivo en la interfaz aire-líquido.

Aislar células epiteliales bronquiales del tejido pulmonar resecado para biobancos y establecer cultivos de interfaz aire-líquido bien diferenciados

En este trabajo describimos un modelo in vitro para aislar y diferenciar células epiteliales murinas de las vías respiratorias, centrándonos en su aclimatación al extracto crónico de humo de cigarrillo (CSE). El modelo podría utilizarse para caracterizar de forma exhaustiva el impacto multiómico de la CSE, lo que posiblemente proporcione información sobre las respuestas celulares bajo una exposición crónica al humo.

Modelo in vitro para el estudio de la diferenciación y los cambios de las células epiteliales de las vías respiratorias murinas estimuladas con extracto de humo de cigarrillo

El cultivo de la interfaz aire-líquido se usa comúnmente para desarrollar epitelio pseudoestratificado de las vías respiratorias mediante la diferenciación de células epiteliales bronquiales humanas normales primarias que imitan el lado apical de las vías respiratorias pulmonares. Aquí, describimos un protocolo sencillo para determinar su calidad mediante el monitoreo de sus propiedades biofísicas, como la función ciliar y la integridad de la membrana.

Determinación de la función ciliar y la impermeabilidad de la membrana del epitelio pseudoestratificado de la vía aérea pulmonar

La producción endógena de óxido nítrico (NO) regula una amplia variedad de funciones biológicas. Cada vez es más claro que la interrupción o la desregulación de la señalización de NO basado en está involucrado en muchas enfermedades humanas. Los métodos para cuantificar los metabolitos relevantes no pueden proporcionar nuevos biomarcadores de diagnóstico o pronóstico de la enfermedad humana.

Técnicas analíticas para el ensayo de bioactividad del óxido nítrico

University of Maryland School of Medicine.  Este protocolo describe un método para cuantificar la producción de óxido nítrico (NO) en cultivos epiteliales de las vías respiratorias diferenciados en la interfaz aire-líquido (ALI) midiendo nitrito en secreciones apicales mediante un ensayo de quimioluminiscencia basado en triioduros.

Medición de la producción de óxido nítrico en cultivos celulares epiteliales traqueales de ratón diferenciados en la interfaz aire-líquido

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