Name: Imagen en tiempo real sin etiquetar y análisis cuantitativo de la morfodinámica de macrófagos utilizando tomografía por difracción óptica (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-06-09T13:20:00.000+00:00
Duration: 6 min 17 s
Description: Aprende a realizar imagen sin etiquetar de macrófagos mediante tomografía por difracción óptica para estudiar morfodinámica celular cuantitativamente. Este método permite el seguimiento continuo de células RAW264.7 en tiempo real.

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	<li>Murray, P. J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+polarization.">Macrophage polarization.</a> Annu Rev Physiol. 79, 541-566 (2017).</li><li>Xue, J., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptome-based+network+analysis+reveals+a+spectrum+model+of+human+macrophage+activation.">Transcriptome-based network analysis reveals a spectrum model of human macrophage activation.</a> Immunity. 40 (2), 274-288 (2014).</li><li>Italiani, P., Boraschi, D. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+monocytes+to+M1/M2+macrophages:+phenotypical+vs.+functional+differentiation.">From monocytes to M1/M2 macrophages: phenotypical vs. functional differentiation.</a> Front Immunol. 5, 514 (2014).</li><li>Locati, M., Curtale, G., Mantovani, A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diversity,+mechanisms,+and+significance+of+macrophage+plasticity.">Diversity, mechanisms, and significance of macrophage plasticity.</a> Annu Rev Pathol. 15, 123-147 (2020).</li><li>Luo, M., Zhao, F., Cheng, H., Su, M., Wang, Y. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+polarization:+an+important+role+in+inflammatory+diseases.">Macrophage polarization: an important role in inflammatory diseases.</a> Front Immunol. 15, 1352946 (2024).</li><li>Cossarizza, A., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+use+of+flow+cytometry+and+cell+sorting+in+immunological+studies+(third+edition).">Guidelines for the use of flow cytometry and cell sorting in immunological studies (third edition).</a> Eur J Immunol. 51 (12), 2708-3145 (2021).</li><li>Unuvar Purcu, D., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+stimulation+time+on+the+expression+of+human+macrophage+polarization+markers.">Effect of stimulation time on the expression of human macrophage polarization markers.</a> PLoS One. 17 (3), e0265196 (2022).</li><li>Icha, J., Weber, M., Waters, J. 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<table><tbody><tr><td>ODT imaging system</td><td>Pellucid Optics</td><td>MH-PanoView</td><td>Usado para imagen de células vivas sin etiquetas</td></tr><tr><td>Software de adquisición</td><td>Pellucid Optics&nbsp;</td><td>Lucida-Pano v2.1.0</td><td>Usado para la adquisición de imágenes</td></tr><tr><td>Software de análisis</td><td>Pellucid Optics&nbsp;</td><td>Intellyseg v2.1.0</td><td>Usado para la reconstrucción de imágenes, segmentación y seguimiento</td></tr><tr><td>RAW264.7</td><td>Wuhan Zishan Biotechnology&nbsp;</td><td>STCC20020P</td><td>Línea celular de macrófagos murinos utilizada para experimentos de polarización e imagen in vitro.</td></tr><tr><td>Baicalina (BAI)</td><td>Shanghai Yuanye&nbsp;</td><td>JB246114</td><td>Usado para el pre-tratamiento de células</td></tr><tr><td>Lipopolisacárido (LPS)</td><td>Solarbio</td><td>L8880</td><td>Usado para estimular los macrófagos</td></tr><tr><td>Medio DMEM</td><td>Gibco</td><td>C11995500BT</td><td>Medio de cultivo celular</td></tr><tr><td>Suero bovino fetal</td><td>Procell</td><td>164210</td><td>Suplemento para el cultivo celular</td></tr><tr><td>Penicilina&ndash;Estreptomicina (100x)</td><td>Procell</td><td>PB180120</td><td>Antibióticos para el cultivo celular</td></tr><tr><td>Placa de cultivo de 60 mm</td><td>Corning</td><td>CLS430166</td><td>Usado para el cultivo celular</td></tr><tr><td>Placa de fondo de vidrio de 35 mm</td><td>Cellvis</td><td>D35-10-1.5-N</td><td>Usado para imagen ODT</td></tr><tr><td>Microscopio invertido</td><td>OLYMPUS</td><td>CKX53</td><td>Usado para la observación rutinaria de células y el monitoreo durante el cultivo.</td></tr><tr><td>Contador de células</td><td>RWD Life Science</td><td>C100</td><td>Usado para la determinación de la densidad celular</td></tr></tbody></table>

imagen en tiempo real sin etiquetar y análisis cuantitativo de la morfodinámica de macrófagos utilizando tomografía por difracción óptica

Real-Time Label-Free Imaging and Quantitative Analysis of Macrophage Morphodynamics Using Optical Diffraction Tomography

Imagen en tiempo real sin etiquetar y análisis cuantitativo de la morfodinámica de macrófagos utilizando tomografía por difracción óptica

This study establishes a label-free optical diffraction tomography (ODT)-based workflow for live-cell imaging and analysis to observe time-dependent ...

Desarrollamos un protocolo basado en ODT sin marcado para monitorear el comportamiento dinámico de los macrófagos a nivel de célula individual. Los ensayos tradicionales de punto final no pueden rastrear continuamente las células vivas de forma dinámica, mientras que la ODT permite la observación prolongada sin marcado de células vivas.Para comenzar, tome células cultivadas de macrófagos RAW264.7 con una confluencia del 80% al 90% y trátelas con lipopolisacárido y baicalina. Luego encienda el sistema de imagen de tomografía por difracción óptica e inicie el módulo de control ambiental. Establezca la temperatura del platino en 37 grados Celsius y la concentración de dióxido de carbono en 5%, y permita que el sistema se equilibre durante al menos 20 minutos. Después de abrir el software de adquisición, coloque la placa de cultivo sobre la platina de imagen. Utilice un objetivo de 60x con una apertura numérica de 1.42 para localizar las células y seleccione células aisladas con límites definidos para la adquisición de imágenes. Establezca el intervalo de imagen en ocho minutos y el número total de cuadros en 181. Active la función de enfoque automático para mantener el enfoque durante

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Investigación

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Biology

Biología

Reflexión interna total de fluorescencia (TIRF) microscopía es un enfoque poderoso para observar las estructuras cerca de la superficie celular en alto contraste y resolución temporal. Se demuestra cómo TIRF puede ser empleado para estudiar la dinámica de proteínas en la corteza de la pared celular-cerrados células bacterianas y fúngicas.

La visualización de la corteza organización y dinámica de los microorganismos, con total Microscopía de fluorescencia de reflexión interna

Describimos el uso de un microscopio óptico estándar para realizar mediciones cuantitativas de masa, volumen y densidad celular a través de una combinación de imágenes de campo claro y contraste de interferencia diferencial.

Microscopía óptica cuantitativa: Medición de Biofísica Celular Características con un microscopio óptico estándar

La distribución espacial y la dinámica temporal de las proteínas y lípidos de la membrana plasmática es un tema candente en biología. En este caso, este problema se aborda mediante un análisis de fluctuación de imagen espacio-temporal que proporciona conceptualmente las mismas cantidades físicas de seguimiento de una sola partícula, pero utiliza etiquetas moleculares pequeñas y configuraciones de microscopía estándar.

De Fluorescencia Fast Imaging a la Ley de Difusión Molecular en membranas de células vivas en un microscopio Comercial

Este protocolo describe la implementación de un sistema de microscopía óptica de estiramiento-tiempo de detección asimétrica para la obtención de imágenes de una sola célula en el flujo microfluídico ultrarrápido y sus aplicaciones en citometría de flujo por imágenes.

Microfluidic Imaging Cytometría de flujo por Asimétrica de detección de tiempo de estiramiento Microscopía óptica (ATOM)

Sondas específicas de objetivo representan una herramienta innovadora para el análisis de los mecanismos moleculares, como la expresión de proteínas en diversos tipos de enfermedad (p. ej., inflamación, infección y tumorigenesis). En este estudio, describimos una evaluación tomográfica tridimensional cuantitativa de la infiltración de macrófagos intestinales en un modelo murino de colitis con F4/80-específica mediada por fluorescencia tomografía.

Tomografía mediada por fluorescencia para la detección y cuantificación de la inflamación Intestinal murina relacionadas con macrófagos

Este protocolo describe la fabricación de las superficies de cristal de calidad óptica adsorbido con compuestos que contengan hidrocarburos de cadena larga que pueden ser utilizados para controlar la fusión de macrófagos de ejemplares vivos y permite la microscopía de superresolución de muestras fijas .

Fabricación de superficies de cristal de calidad óptica para estudiar la fusión de macrófagos

Aquí describimos los métodos usando microscopia confocal de disco de spinning solo eventos fagocíticas imagen por residente macrófagos peritoneales de ratón. Los protocolos pueden ampliarse a otras células fagocíticas.

Proyección de imagen 3D Time-lapse de la fagocitosis por macrófagos de ratón

Se describe un protocolo para la identificación de subtipos de linfocitos usando proyección de imagen de fase cuantitativa y un algoritmo de aprendizaje automático libre de etiqueta. Las mediciones de índice de refracción 3D tomogramas de linfocitos presentan 3D información morfológica y bioquímica de células individuales, que luego se analiza con un algoritmo de aprendizaje automático para la identificación de tipos de la célula.

Máquina de aprendizaje y sin etiqueta de identificación de subtipos de linfocitos usando proyección de imagen tridimensional fase cuantitativa

La microscopía óptica de superresolución basada en chips es un enfoque novedoso para la microscopía de fluorescencia y ofrece ventajas en la rentabilidad y el rendimiento. Aquí, los protocolos para la preparación de chips y la toma de imágenes se muestran para la microscopía TIRF y la microscopía de superresolución basada en localización.

Fluorescencia de reflexión interna total de alto rendimiento y microscopía de reconstrucción óptica estocástica directa utilizando un chip fotónico

El análisis de desplazamiento cuadrático medio (iMSD) derivado de imágenes se aplica a los macropinosomas para resaltar su naturaleza intrínseca de evolución en el tiempo en términos de propiedades estructurales y dinámicas. Los macropinosomas se comparan con los gránulos secretores de insulina (ISG) como referencia para las estructuras subcelulares con propiedades estructurales / dinámicas promedio invariantes en el tiempo.

Sondeo de las propiedades estructurales y dinámicas del tráfico de nanoestructuras subcelulares mediante espectroscopia de fluctuación espaciotemporal

Presentamos un protocolo para implementar la microscopía de interferencia-reflexión y la microscopía de reflexión-fluorescencia interna-total para la obtención simultánea de imágenes de microtúbulos dinámicos y proteínas asociadas a microtúbulos marcadas fluorescentemente.

Reflexión de interferencia simultánea y microscopía de fluorescencia de reflexión interna total para imágenes de microtúbulos dinámicos y proteínas asociadas

Aprende a realizar imagen sin etiquetar de macrófagos mediante tomografía por difracción óptica para estudiar morfodinámica celular cuantitativamente. Este método permite el seguimiento continuo de células RAW264.7 en tiempo real.

Imagen en tiempo real sin etiquetar y análisis cuantitativo de la morfodinámica de macrófagos utilizando tomografía por difracción óptica (Video) | JoVE Journal

Imagen en tiempo real sin etiquetar y análisis cuantitativo de la morfodinámica de macrófagos utilizando tomografía por difracción óptica

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