Name: Trypsinizing Siembra y células de mamífero (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-06-12T13:28:00.000+00:00
Duration: 5 min 59 s
Description: Aprende a subcultivar células adherentes y en suspensión mediante tripsinización para mantener su viabilidad. Este método visual guía a investigadores en el mantenimiento saludable de líneas celulares en cultivo.

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El protocolo de texto completo de este enfoque experimental está disponible en <a href="http://www.mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb0101/current/abstract" target="_blank">protocolos actuales en Biología Celular</a> .

Los autores no tienen nada que revelar.

trypsinizing siembra y células de mamífero

Trypsinizing and Subculturing Mammalian Cells

Como las células confluyan, deben ser subcultivaron o pasajes. La falta de resultados de subcultura células confluentes en el índice mitótico reducción y, finalmente, la muerte celular. El primer paso en el subcultivo es para separar las células de la superficie del recipiente de cultivo primario por tripsinización o por medios mecánicos. La suspensión celular resultante se subdivide, o replantados, en cultivos frescos. Cultivos secundarios son revisados ​​para el crecimiento y alimentar periódicamente, y puede ser posteriormente subcultivo para producir cultivos de tercer nivel. El tiempo entre los pases de las células varía de acuerdo con la línea celular y depende de la tasa de crecimiento.

Como las células confluyan, deben ser subcultivaron o pasajes. Este vídeo demuestra un procedimiento de subcultivo tanto adherente y células en suspensión.

Trypsinizing Siembra y células de mamífero

A medida que las células alcanzan la confluencia, deben subcultivarse o pasarse. Si no se subcultivan las células confluentes, se produce una reducción del índice mitótico y, eventualmente...

La tecnología de cultivo de tejidos ha encontrado amplia aplicación en el campo de la biología celular. Sin embargo, las células cultivadas requieren mantenimiento regular para mantenerse sanas. Cuando las células alcanzan la confluencia, deben ser subcultivadas o pasadas.El incumplimiento de esto provoca un crecimiento reducido y, eventualmente, la muerte celular. En este video, demostramos cómo mantener células en cultivo tisular, tanto para líneas celulares adherentes como en suspensión. Hola, soy Ricky, aquí en el Laboratorio del Dr. LAN en la Red de Laboratorios de Patología Molecular en el este de Tennessee.Hoy quiero mostrarle dos técnicas para recoger células en suspensión y células adherentes. Para pasar una placa de células, comenzaremos con un cultivo primario crecido hasta confluencia en una placa de Petri de 60 milímetros o en un frasco de cultivo de tejidos de 25 centímetros cuadrados que contenga cinco mililitros de medio de cultivo de tejidos.Comenzamos retirando todo el medio de la cultura primaria con la pipeta estéril. Luego lavamos la monocapa de células adheridas una o dos veces con un pequeño volumen de HBSS a 37 grados Celsius sin calcio ni magnesio. Para eli

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Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

El micro-disección técnica de explantes es un método robusto y fiable para el aislamiento de proliferación células del músculo esquelético de los músculos menores, adultas o embrionarias como fuente de células madre de músculo esquelético. Excepcionalmente, estas células han sido derivadas por clonación para producir músculo esquelético líneas de células madre utilizadas en el trasplante de vivo.

Adultas y embrionarias del músculo esquelético Cultura Microexplant y aislamiento de células madre de músculo esquelético

En este informe, demuestran un sistema para aislar y cultivar células de donantes de la glándula mamaria de ratón, y ortotópicamente trasplante de estas células en ratones receptores para analizar estroma: interacciones epiteliales durante el desarrollo de tumores mamarios.

El trasplante de células del estroma mamario y células de carcinoma en los ratones C57BL/6J

Este vídeo muestra una técnica para estudiar la localización in vivo de anticuerpos específicos de tumor en un modelo de xenoinjerto tumoral de ratón. Al inyectar células cancerosas por vía subcutánea en ratones para la formación de tumores, se inyectan anticuerpos marcados con fluorescencia que se unen a los receptores específicos del tumor, lo que permite la evaluación in vivo de la localización de anticuerpos mediante imágenes.

Una técnica para evaluar la localización in vivo de anticuerpos específicos contra tumores

El video muestra un ensayo para evaluar la actividad de secuestro autofágico masivo en células de mamíferos. Utiliza la electroporación para liberar proteínas citosólicas, incluida la lactato deshidrogenasa (LDH). Las fracciones de LDH secuestradas y LDH celular total se determinan para evaluar el secuestro de LDH, proporcionando información sobre la actividad general de secuestro masivo.

Cuantificación de la actividad de secuestro autofágico a granel en células de mamíferos

Este video muestra un protocolo para aislar y cultivar células de la corteza cerebral primaria del telencéfalo dorsolateral de embriones de ratón.

Aislamiento y cultivo de células de telencéfalos dorsolaterales de embriones de ratón

Esta técnica proporciona un método para cosechar, normalizar y cuantificar el crecimiento intracelular de las bacterias patógenas que son pre-cultivadas en células naturales protozoos anfitrionas antes de las infecciones de las células de mamíferos. Este método puede ser modificado para acomodar una amplia variedad de células huésped para la fase de cebado así como los tipos de células diana.

Las infecciones tratables con células de mamíferos Protozoarios cebados con bacterias

Se describe procedimientos para el etiquetado y la genotipificación ratones recién nacidos y la generación de cultivos primarios de neuronas de ellos. La genotipificación es rápida, eficiente y fiable, y permite la extracción automatizada de ácido nucleico. Esto es especialmente útil para los ratones neonatally letales y sus culturas que requieren previa cumplimentación del genotipado.

Rápido Genotipado de animales seguidas del establecimiento de cultivos primarios de neuronas cerebrales

El objetivo de este protocolo es aislar los queratinocitos epidérmicos de la piel dorsal de ratones adultos para una variedad de aplicaciones aguas abajo, como biología molecular, bioquímica, clasificación celular activada por fluorescencia y usos primarios in vitro (por ejemplo, clonogénicos queratinocitos).

Aislamiento de los queratinocitos epidérmicos de ratón y su cultivo clonogénico In Vitro

Presentamos una técnica para estabilizar rápidamente complejos traslacionales (biosíntesis de proteínas) con reticulación de formaldehído en levaduras vivas y células de mamíferos. El enfoque permite diseccionar intermedios transitorios e interacciones dinámicas ARN:proteína. Los complejos reticulados se pueden utilizar en múltiples aplicaciones posteriores, como en métodos de perfiles basados en secuenciación profunda, microscopía y espectrometría de masas.

Fijación rápida in vivo y aislamiento de complejos traslacionales de células eucariotas

La Biotinilación Mejorada por Iluminación Restringida por Localización específica (ALIBi) es un método novedoso activado optogenéticamente desarrollado para marcar y purificar afinidad poblaciones subcelulares de ribosomas para secuenciación posterior y análisis proteómico.

Aislamiento de subpoblaciones subcelulares de ribosomas basadas en biotinilación potenciada por iluminación restringida por etiquetas péptidas específicas de péptidos recombinantes

Aprende a subcultivar células adherentes y en suspensión mediante tripsinización para mantener su viabilidad. Este método visual guía a investigadores en el mantenimiento saludable de líneas celulares en cultivo.

Trypsinizing Siembra y células de mamífero

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