Name: Etiquetado retrógrada de las células ganglionares de la retina por la aplicación de Fluoro-Gold en la superficie del colículo superior (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-06-17T17:19:00.000+00:00
Duration: 14 min 5 s
Description: Aprenda el etiquetado retrógrado de células ganglionares de la retina con Fluoro-Gold aplicado en el colículo superior. Este método permite evaluar la supervivencia celular y el efecto de fármacos en neurociencia.

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Los autores desean agradecer el apoyo del Programa Nacional de Glaucoma de la Fundación Americana del Asistente de Salud.

<ol><li> Anestesiar la rata por vía intra-peritoneal de ketamina (80mg/kg) y xilazina (8mg/kg) (relación de volumen de 2:1). Aplique un ungüento lubricante ocular estéril para prevenir la sequedad de la córnea durante la cirugía. </li><li> Afeitarse el pelo de la cabeza (del ojo a la altura de los oídos) y fijar la cabeza en la etapa de la cabeza por una cabeza de sujeción y establecer sus incisivos en la barra de incisivos. </li><li> Desinfectar el área de operación con una solución de povidona yodada al 10% seguido de 70% de alcohol. </li><li> Cortar la piel y los músculos para exponer el cráneo y las suturas (puntos de sutura sagital, coronal y transversal) (Figura 1). Aplicar bupivicaína analgésicos, como un toque a la zona de la incisión (no más de 2 mg / kg). </li><li> Taladrar un agujero del cráneo (ø 2x2 mm, 0,5 mm de ambos puntos de sutura sagital y transversal) a cada lado de la sutura sagital. Evitar la ruptura de las meninges y los senos que yace bajo las suturas. <img src="/files/ftp_upload/old/819_2008_6_18_3/ratSkull.png" alt="Características en el cráneo de rata viva." width="469" height="317" /> Figura 1. Características en el cráneo de rata viva. </li><li> Cortar con tijeras las meninges primavera, evitar que se rompa. </li><li> Aspirar el contenido cerebral que se encuentra sobre la superficie dorsal del colículo superior con cuidado por la bomba de vacío y tres puntos de control se puede observar: <ol><li> el color de los cambios en el tejido cerebral de gris a blanco a gris </li><li> dejar de aspirar cuando el incoloro líquido cefalorraquídeo sale </li><li> cuidadosamente aumentar el nivel más bajo de succión horizontal para exponer el colículo superior, amarillenta cubierta por la duramadre </li></ol></li><li> Aspirar el contenido del cerebro en SC hasta cuatro bordes del SC se puede observar directamente al microscopio. La porción de la corteza cerebral retirado debe mantenerse al mínimo para evitar efectos secundarios indeseables (por ejemplo, disfunción motora). Tenga cuidado de no tocar los senos paranasales. </li><li> Absorber el líquido en el agujero con rayas finas de algodón estéril para que la superficie de la SC lo más seco posible. Luego, coloque una capa delgada de esponja de gelatina remojadas con un 6% Fluoro-Gold en la superficie de Carolina del Sur (FG es absorbido por los terminales de los axones de las células ganglionares de la retina y de forma bilateral transportado retrógradamente a sus somas en la retina). </li><li> Llenar el agujero con espuma de gel y cerrar la herida de la piel con pinzas de sutura. </li><li> Los animales se les permitió recuperarse bajo la lámpara incandescente para mantener el calor. Analgésico buprenorfina, (100mcg/kg), se aplica por vía oral en el agua de bebida durante 5 días después de que el etiquetado SC. </li></ol>

<ol><li>Ahmed, A. K. M. F., Dong, K., Sugioka, K., Yamadori, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retrograde+double+labeling+of+retinal+ganglion+cells+in+the+newborn+and+adult+albino+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Protocols%22%5BJournal%5D)">Retrograde double labeling of retinal ganglion cells in the newborn and adult albino rat.</a> Neurosci. Protocols. 1, 1-11 (1996).</li>
<li>Chan, H. C., Chang, R. C. C., Ip, A. K. C., Chiu, K., Yuen, W. H., Zee, S. Y., So, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotective+effects+of+Lycium+barbarum+Lynn+on+protecting+retinal+ganglion+cells+in+an+ocular+hypertension+model+of+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Neuroprotective effects of Lycium barbarum Lynn on protecting retinal ganglion cells in an ocular hypertension model of glaucoma.</a> Experimental Neurology. 203, 269-273 (2007).</li>
<li>Forrester, J., Peters, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nerve+fibers+in+the+optic+nerve+of+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Nerve fibers in the optic nerve of rat.</a> Nature. 214, 245-247 (1967).</li>
<li>Ji, J. Z., Elyaman, W., Yip, H. K., Lee, V. W. H., Yick, L. W., Hugon, J., So, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CNTF+promotes+survival+of+retinal+ganglion+cells+after+induction+of+ocular+hypertension+in+rats%3A+the+possible+involvement+of+STAT3+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">CNTF promotes survival of retinal ganglion cells after induction of ocular hypertension in rats: the possible involvement of STAT3 pathway.</a> European Journal of Neuroscience. 19, 265-272 (2004).</li>
<li>Li, R. S., Chen, B. Y., Tay, D. K., Chan, H. H. L., Pu, M. L., So, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Melanopsin-Expressing+Retinal+Ganglion+Cells+Are+More+Injury-Resistant+in+a+Chronic+Ocular+Hypertension+Model.+Investigative%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Melanopsin-Expressing Retinal Ganglion Cells Are More Injury-Resistant in a Chronic Ocular Hypertension Model. Investigative.</a> Ophthalmology & Visual Science. 47, 2951-2958 (2006).</li>
</ol>

<ol><li> ¿Por qué usar este método quirúrgico para el recuento de células ganglionares retinianas? En las ratas alrededor del 98% de las células ganglionares de la retina (CGR) se sabe que los proyectos a la contralateral colículo superior (SC). La aplicación de flúor de oro en la superficie del SC puede etiquetar casi todos los de la CGR, por lo que podemos centrarnos en esta neurona retinal más vulnerables en el glaucoma. Comparar con etiquetado retrógrado de RGC poniendo FG en tronco del nervio óptico seccionado por 2 días, la i...

etiquetado retrógrada de las células ganglionares de la retina por la aplicación de fluoro-gold en la superficie del colículo superior

Retrograde Labeling of Retinal Ganglion Cells by Application of Fluoro-Gold on the Surface of Superior Colliculus

Células ganglionares de la retina (RGC) de conteo es esencial para evaluar degeneración de la retina, especialmente en el glaucoma. Etiquetado fiable RGC es fundamental para evaluar los efectos de cualquier tratamiento. En las ratas, aproximadamente el 98% de la CGR se sabe que los proyectos a la contralateral colículo superior (SC) (Forrester y Peters, 1967). La aplicación de flúor-oro (FG) en la superficie del SC puede etiquetar casi todos los de la CGR, por lo que podemos centrarnos en esta neurona retinal más vulnerables en el glaucoma. FG es absorbido por los terminales de los axones de las células ganglionares de la retina y de forma bilateral transportado retrógradamente a sus somas en la retina. Comparar con etiquetado retrógrado de RGC poniendo FG en tronco del nervio óptico seccionado por 2 días, la interferencia de la supervivencia de las CGR se reduce al mínimo. Comparar con manchas violeta de cresilo CGR que las manchas, las células amacrinas y el endotelio de los vasos sanguíneos en la capa de células ganglionares retinianas, este método de etiquetado es más específico a la CGR. Este vídeo describe el método de etiquetado retrógrada de las CGR mediante la aplicación de FG en la superficie del SC. Los procedimientos quirúrgicos incluyen la perforación del cráneo, la aspiración de la corteza para exponer la SC y la aplicación de esponja de gelatina sobre toda la superficie dorsal de la SC se muestran. Consejos útiles para evitar la hemorragia intracraneal masiva y la aspiración de la SC se les ha dado.

Este vídeo describe el método de etiquetado retrógrada de las CGR mediante la aplicación de flúor-oro (FG) en la superficie del colículo superior (SC). Técnica consiste en perforar el cráneo, la aspiración de la corteza, y la aplicación de esponja de gelatina sobre toda la superficie dorsal de la SC.

Etiquetado retrógrada de las células ganglionares de la retina por la aplicación de Fluoro-Gold en la superficie del colículo superior

El recuento de células ganglionares de la retina (CGR) es esencial para evaluar la degeneración retiniana, especialmente en el glaucoma. El marcaje fiable de las CGR es fundamental para...

Hola, soy Tu del Laboratorio GOSO en la Universidad de Hong Kong. Hoy voy a explicar cómo etiquetar retrogradamente la rata. Célula ganglionar retiniana.Las células ganglionares de la retina se etiquetarán de forma retrógrada mediante la aplicación de un colorante trazador sobre la superficie del quiasma óptico superior, de modo que posteriormente podamos contar las células ganglionares en la retina preparada en plano para evaluar la muerte celular o el efecto del fármaco aplicado. Esta es una imagen que ilustra la vía desde la retina hasta el quiasma óptico superior. El tinte fluorescente CLE puede transportarse de manera retrógrada desde el quiasma óptico superior CLE a través del tracto óptico.Cruzar el quiasma óptico a través del nervio óptico hasta la retina en el ojo. Utilizamos un microscopio operatorio para realizar la cirugía. Bomba de aspiración para extraer la corteza cerebral sobre la superficie dorsal del estadio de cabeza CLE, con el fin de mantener el sombrero rojo en posición.Se utilizaron una fresa y una sierra para hueso para abrir el cráneo y colocar el gelatina absorbible con el fin de aplicar el colorante fluorescente FG sobre la superficie de los cilios. Los i

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Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Transección del nervio óptico es un modelo ampliamente utilizado de la lesión en el SNC adulto. El noventa por ciento de las células ganglionares de la retina (CGR) cuyos axones son completamente seccionado (axotomía) mueren dentro de 14 días después de axotomía. Este modelo es fácilmente susceptible de manipulaciones experimentales y altamente reproducible.

La transección del nervio óptico: un modelo de apoptosis neuronal de adultos en el sistema nervioso central

Transección del nervio óptico es un modelo ampliamente utilizado de la lesión en el SNC adulto. Este modelo es ideal para llevar a cabo una serie de manipulaciones experimentales que se dirigen a la retina a nivel mundial o directamente dirigidos a la población heridos neuronal de las células ganglionares de la retina.

Los métodos para la manipulación experimental después de la transección del nervio óptico en el SNC de los mamíferos

Este artículo proporciona una descripción de cómo analizar y record de la preparación aislada de la retina en el ratón. En particular, se describe la forma de registrar las respuestas de la luz de una población de células ganglionares marcados con fluorescencia y, posteriormente, identificar y analizar su morfología.

Una preparación aislada de retina para registrar la respuesta de la luz a partir de semillas etiquetadas las células ganglionares retinianas

La transfección de células de ratón del ganglio de la retina por In vivo La electroporación

Transporte retrógrado de tinte fluorescente etiqueta a una subpoblación de neuronas en base a la proyección anatómica. Axones etiquetadas pueden orientarse...

Marcaje fluorescente retrógrada Permite dirigida extracelular sola unidad de grabación de neuronas identificadas<em&gt; En vivo</em

Fuente: Zhang, J., et al. Análisis cuantitativo de inmunogold de alta resolución de receptores de membrana en sinapsis de cinta de retina. J. Vis. Exp. (2016)Este video demuestra una técnica de microscopía electrónica para visualizar la localización del receptor de neurotransmisores en las sinapsis de la retina. Las secciones de la retina contienen células ganglionares de la retina que exhiben receptores de neurotransmisores unidos a la membrana y están marcadas con la subunidad B de la toxina...

Imágenes de alta resolución de los receptores de neurotransmisores en las sinapsis de la retina

Fuente: Inal, M. A. et. al., Trazado retrógrado de Drosophila neuronas motoras embrionarias utilizando tintes fluorescentes lipofílicos. J. Vis. Exp. (2020)Este video demuestra el método de etiquetado retrógrado de las neuronas motoras Drosophila utilizando tintes lipofílicos. El tinte entra en el axón, viaja retrógradamente y etiqueta las neuronas de color verde, lo que permite una visualización detallada de su morfología y proyecciones bajo un microscopio confocal.

Marcaje retrógrado de neuronas motoras de Drosophila mediante colorantes lipofílicos fluorescentes

Fuente: Laboissonniere, et. al. Secuenciación de ARN unicelular de subconjuntos definidos de células ganglionares de la retina. J. Vis. Exp. (2017).  Este video muestra una técnica de trazado fluorescente para identificar subtipos de células ganglionares de la retina (RGC) en la retina de un ratón transgénico. El proceso consiste en asegurar la retina aislada en una cámara de registro, mantener la viabilidad celular con perfusión oxigenada y dirigirse a las RGC marcadas con fluorescencia...

Identificación de subtipos de células ganglionares de la retina de ratón mediante trazado fluorescente

Presentamos un método eficiente para marcar retrógradamente las células ganglionares de la retina (RGCs) en peces cebra adultos.

Etiquetado retrógrada de células ganglionares retinianas en adultos de pez cebra con tintes fluorescentes

El método de inmunogold postincrustado es una de las formas más efectivas de proporcionar análisis de alta resolución de la localización subcelular de moléculas específicas. En este trabajo describimos un protocolo para analizar cuantitativamente los receptores de glutamato en las sinapsis de la cinta retiniana.

Resolución de alta Análisis Cuantitativo Inmunoelectrónica de Receptores de Membrana en la retina cinta sinapsis

Millones de personas sufren de enfermedades degenerativas retinianas que resultan en ceguera irreversible. Un elemento común de muchas de estas enfermedades es la pérdida de células ganglionares de la retina (RGCs). Este protocolo detallado describe el aislamiento de los RGC murinos primarios mediante selección positiva y negativa con citometría de flujo.

Aislamiento de células primarias de ganglio retiniano murino (RGC) por citometría de flujo

Aprenda el etiquetado retrógrado de células ganglionares de la retina con Fluoro-Gold aplicado en el colículo superior. Este método permite evaluar la supervivencia celular y el efecto de fármacos en neurociencia.

Etiquetado retrógrada de las células ganglionares de la retina por la aplicación de Fluoro-Gold en la superficie del colículo superior (Video) | JoVE Journal

Etiquetado retrógrada de las células ganglionares de la retina por la aplicación de Fluoro-Gold en la superficie del colículo superior

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