Imagerie de la migration en direct des cellules gliales dans le disque Eye drosophile Imaginal

Résumé

Nous décrivons ici un protocole visant à étudier la migration des cellules gliales dans le développement de l'œil de drosophile en utilisant l'analyse microscopique direct couplé à la GFP taggés cellules gliales.

Résumé

Les cellules gliales du vertébrés et invertébrés organismes doivent migrer vers des régions cibles finale afin de ensheath et de soutien des neurones associés. Bien que des progrès récents ont été faits pour décrire la migration en direct des cellules gliales dans l'aile de développement nymphal (1), les études de

Protocole

Partie 1: Pré-montage expérimental.

1. Une semaine à l'avance, compagnon mouches pour générer larve qui expriment la GFP sous le contrôle d'un promoteur spécifique gliales. Pour notre expérience, nous visualisés GFP taggés avec une séquence de localisation nucléaire exprimé dans les cellules gliales en utilisant les inversions de polarité (repo) promoteur (3, 4).
2. Préparer la couverture glisse au moins un jour à l'avance par trempage 18 mm de diamètre glisse couvercle pendant 10 minutes dans 1% de poly-L-lysine solution et l'air sec durant la nuit.
3. Le jour avant l'expérience, nettoyer une chambre de culture Cham....

Discussion

Dans ce protocole, nous décrivons l'observation de la migration des cellules gliales dans le disque imaginal des yeux en utilisant la microscopie vivre. Dans notre exemple de type sauvage (figure 1 après JC), nous avons utilisé un marqueur GFP nucléaires d'observer le mouvement des cellules gliales dans le disque les yeux au cours d'une heure. Dans un mutant d'un gène candidat requis pour la migration des cellules gliales actuellement à l'étude dans notre laboratoire, nous avons observé un d.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Poly-L-lysine	Réactif	Sigma-Aldrich	P8920
Schneider’s Insect Media	Réactif	Sigma-Aldrich	S0146
Pénicilline-streptomycine	Réactif	Sigma-Aldrich	P4458
Solution d'insuline provenant du pancréas de bovin	Réactif	Sigma-Aldrich	I0516
Chambre magnétique Chamlide	Outil	Live cell Instrument	CM-R-10	Chambre de type boîte de 35 mm pour lame de 18 mm
Ciseaux ultrafins pour coupe	Outil	Fine Science Tools	15200-00
Pinces Dumont n°5	Outil	Fine Science Tools	11251-20
Microscope à fluorescence	Microscope	Carl Zeiss, Inc.		Tout système d'imagerie à fluorescence disposant des filtres et excitations nécessaires pour la GFP peut être utilisé.